Lactic acid bacteria were isolated from Kimchi and screened for bacteriocin. A total of 99 strains showed antimicrobial activity when grown on solid media, yet only 10 showed antimicrobial activity in liquid media. Strain H-559, identified as Lactococcus lactis subsp. lactis, exhibited the strongest inhibitory activity and was active against pathogenic bacteria including Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus, and Bacillus cereus as well as other lactic acid bacteria. The antimicrobial substance produced by L. lactis subsp. lactis H-559 was confirmed to be a bacteriocin by the treatment of $\alpha$-chymotrypsin, and protease type Ⅸ and ⅩIV. The bacteriocin activity remained stable between pH 2.0 and pH 11.0 and during heating for 10 min at $100^{\circ}C$. The bacteriocin production started in the exponential phase and stopped in the stationary phase. L. lactis subsp. lactis H-559 showed the highest bacteriocin activity at a culture temperature of $25^{\circ}C$, and an inverse relationship between the bacteriocin productivity and mean growth rate at different culture temperatures was observed. The mean growth rate and bacteriocin productivity of L. lactis subsp. lactis H-559 increased as the initial pH of the media increased.
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
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v.31
no.3
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pp.399-404
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2002
The fermented fruit and vegetable mixed broth was prepared by using bacteriocin-producing lactic acid bacteria to evaluate the possibility of developing isotonic beverage with anticariogenic activity. Optimum conditions were also established to produce bacteriocin by a mixed culture system consisting of Lc. lactis and Leu. mesenteroides in a fruit and vegetable mixture. Production of bacteriocin was not observed when both strains were simultaneously innoculated, but pH adjustment of the broth fermented by Leu. mesenteroides to nearneutral pH stimulated the production of bacteriocin by Lc. lactis. The concentration of sodium of the fermented broth was higher than those of commercial products. Color change of the fermented broth was not observed during storage. The fermented broth showed strong inhibitory effect against Streptococcus mutans which is an oral inhabitant with a cariogenic activity. Bacteriocin activity in the fermented broth was retained very stable for 4 weeks at 4$\^{C}$. The results indicated that bacteriocin-producing lactic acid bacteria can be used for the preparation of a Korean style thirst-quenching beverage containing bacteriocin.
Kim, Hyun-Jin;Kim, Ji-Hyun;Son, Jeong-Hwa;Seo, Hyo-Jin;Park, So-Jin;Paek, Nam-Soo;Kim, Sung-Koo
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.14
no.3
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pp.503-508
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2004
The antimicrobial substance produced by Lactobacillus bulgaricus was inactivated by protease. It showed inhibitory activity against Staphylococcus aureus ATCC6538, Streptococcus agalactiae ATCC14364, some Gram-positive and Gram-negative bacteria, and characteristics of a bacteriocin. The optimal temperature and culture time for the production of bacteriocin were $30^{\circ}C$ and 10 h, respectively, in the culture of L. bulgaricus. The bacteriocin production started in the exponential phase and reached a maximum at the early stationary phase. Using Staph. aureus ATCC6538 and Strep. agalactiae ATCC14364, known as common bovine mastitis pathogens, as indicator strains for determination of the bacteriocin activity, the antimicrobial activity of the bacteriocin was found to be stable in acidic and neutral pH's (2- 7) even at lOOT, whereas it was lost at high pH (10- 11) and $100^{\circ}C$. The mode of action for the antimicrobial activity was bacteriocidal, and the molecular weight determined by SDS-PAGE and overlay method was 14 kDa.
El-Arabi, Nagwa I.;Salim, Rasha G.;Abosereh, Nivien A.;Abdelhadi, Abdelhadi A.
Microbiology and Biotechnology Letters
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v.46
no.3
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pp.288-299
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2018
Food bio preservation is of major interest in the food industry. Many types of antimicrobial compounds can be produced by lactic acid bacteria (LAB), including bacteriocins. Bacteriocins increase the shelf-life of food by decreasing some food-borne diseases. In this study, a multi-coding sequence of bacteriocin genes was used for primer design to produce bacteriocin genes in Enterococcus faecium AH2 strain and Pediococcus pentosaceus AH1. Multi-coding sequences were aligned to detect conserved sequences in the bacteriocin gene. Eight genes encoding proteins involved in bacteriocin production were isolated and sequenced, including six from E. faecium AH2 (entA, entI, entF, entR, orfA2, orfA3) and two from P. pentoceseus AH1 (papA, pedB), and all gene sequences were deposited in the Gen Bank database under accession numbers LC064146-LC064151, LC101300, and LC101789, respectively. P. pentosaceus AH1 and E. faecium AH2 strains displayed bacteriocin activities of $2610AU\;mL^{-1}$ and $690AU\;mL^{-1}$ and inhibition zones of 26 mm and 19 mm, respectively. Overexpression of entA in E. faecium AH2 increased the bacteriocin and antimicrobial activities.
A bacteriocin-producing strain identified as Pediococcus acidilactici was isolated from kimchi. The bacteriocin was identified to belong to the pediocin family and exhibited bactericidal activity against most Gram-positive bacteria as well as some Gram-negative bacteria. The bacteriocin was stable up to $80^{\circ}C with wide pH ranges (5.0-10.0). The bactericidal activity remained unchanged after treatment with nonproteolytic enzymes such as nuclease and ${\alpha}$-amylase, however, it was destroyed after treatment with protease. The bacteriocin was effectively extracted by the pH-mediated adsorption-desorption method and purified effectively by semi-preparative RP-HPLC. The molecular weight of the bacteriocin was 4,622, as determined by electrospray mass spectrometry. The amino acid sequence consisted of 44 amino acid residues with four cysteines. The high solubility and pH stability of the isolated pediocin provide definite advantages over nisin and other bacteriocins in regards to its potential applications.
Phenotypic changes after plasmid curing experiment suggested that the bacteriocin production phenotype ($Bac^{+}$) might be linked to a chromosomal DNA and the mucin production phenotype ($Muc^{+}$) might be linked to a 62.5 kilobase (kb) plasmid (pMUC62) in Lactobacillus plantarum 27 isolated from meat starter culture. The non-mucoid ($Muc^{-}$) variants were missing pMUC62 but they produced bacteriocin as the wild strain ($Bac^{+}$). There was no difference in antibiotic resistance and sugar fermentation patterns between the wild strain ($Bac^{+}$$Muc^{+}$) and the nonmucoid ($Bac^{+}$$Muc^{-}$) variants. Antimicrobial spectrum of bacteriocin produced by both wild strain and $Muc^{-}$ variant of Lb. plantarum 27 included strains of Pediococcus acidilactici (A, M, H), Pediococcus sp. isolated from meat, Lactobacillus sp. isolated from meat, Lb. plantarum NCDO 955 and Staphylococcus aureus 485. Neither of the tested Gram negative bacteria were inhibited by bacteriocin. Antimicrobial activity of crude bacteriocin was retained after autoclaving, DNase or catalase treatment and exposure from pHs 4 to 9 but was lost after treating with several proteolytic enzymes and exposure at pH 10.
For an extension of the palatable stage in Kimchi which was limited by further lowering pH as the fermentation proceeds, the starter culture of bacteriocin-producing Enterococcus faecium DU 0267 obtained from Kimchi was added at the preparation time, and pH, bacteriocin activity, growth of lactic acid bacterial group and gas production in Kimchi were examined during the fermentation at 10, 20 and 30$\circ$C . The pH of Kimchi fell rapidly to 4.0~4.2 in the early fermentation stage, and then, has gone down very slowly throughout further fermentation. The lactic acid bacte- ria, particularly lactobacilli and leuconostoc, were remarkably slower in its growth than those in the control. Although the patterns of these change during fermentation at different temperatures were similar, these effects by the addition of starter were enhanced at 10 and 20$\circ$C. The bacteriocin activity was increased rapidly during log phase of the bacteriocin producer strain in the early fermentation stage of Kimchi and reached their maximum after fermentation at 10$\circC, for 8 days and at 20 or 30$\circ$C for 2 days. Thereafter, the activity disappeared quickly. The gas production by fermentation was also suppressed considerably, and their volume produced after fermentation at 20$\circ$C for 14 days corresponded to 60% of those of the control.
In this study, Lactococcus lactis subsp. hordniae JNU533 (JNU533) was isolated from Swiss-type cheese, and the bacteriocin produced by this strain was characterized. The spot-on-lawn assay was used to determine the antimicrobial spectrum and characteristics of the JNU533-derived bacteriocin. Results confirmed that the JNU533-derived bacteriocin inhibited the growth of lactic acid bacteria. The size of the bacteriocin was approximately 4.9 kDa, and it was heat- and pH-stable under various temperature and pH conditions. Furthermore, the possibility of using JNU533 as a starter culture in the manufacturing of fermented dairy products was assessed. A single colony of JNU533 was inoculated into 10% skim milk containing 0.5% glucose to investigate its characteristics in milk culture. The decrease in the pH was similar to that elicited by Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus. Furthermore, the results confirmed that JNU533 inhibited the growth of various bacteria and could be used as a milk fermentation starter. This study highlights the characteristics of the bacteriocin produced by JNU533 and the growth features of this strain in a skim milk medium.
Pediocin K1 is a bacteriocin produced by Pediococcus sp. KCA 1303-10, isolated from traditionally fermented flatfish in Korea. Pediocin K1-dependent antibiosis and pediocin K1-independent antibiosis against Listeria monocyrogenes were investigated by comparing antibiosis potential of the ped+ wild-type strain of Pediococcus sp. KCA1303-10 with that of the ped- mutant strain in 3 different media at 3 different temperatures. In the synthetic MRS-APT medium, bacteriocin (pediocin K1)-dependent antibiosis (BDA) acted as the major driving force of overall antibiosis at the initial stage before the pH of the media was not sufficiently lowered, while bacteriocin-independent antibiosis (BIA) took over the major role at the late stage of antibiosis by killing otherwise resistant cells in the modium. The role of BDA increased as the temperature of the system decreased. The antibiosis potential of BDA among the overall antibiosis of Pediococcus against Listeria at $37^{\circ}C$ was calculated as 46%, and as 75% at $25^{\circ}C$. In the skim milk medium, antibiosis of Pediococcus against Listeria was weakened more than 4 log cycles compared to that of the synthetic medium; however, BDA worked as the main antibiosis force regardless of the culturing temperature in the skim milk medium. In the bean soup medium, BDA also worked as the major killing mechanism against Listeria, but BIA played as another suppressing mechanism against otherwise pediocin-resistant Listeria population. These results suggest that a large portion of the inhibitory action of the ped+Pediococcus sp. KCA1303-10 was attributable to the bacteriocin produced by the strain and that viable Pediococcus sp. KCA1303-10 was superior to the purified bacteriocin in suppressing the occurrence of the bacteriocin-resistant Listeria monocytogenes in food systems.
The inhibitory effect of Lactobacillus plantarum (Lb. plantarum) which is bacteriocinproducing strain against the growth of Listeria monocytogenes (L. monocytogenes) was examined in trypticase soy broth (TSB). TSB was inoculated with 104 cells/me L. monocytogenes and then with different numbers $(10^6\;10^4\;and\;10^2\;cells/ml)$ of Lb. plantarum. The mixed cultures were incubated at 37, 25 and $4^{\circ}C$. The most effective inhibition of was found at $37^{\circ}C$ and a less inhibition at $25^{\circ}C$. However, there was no significant change in the cell numbers of both L. monocytogenes and Lb. plantarum at $4^{\circ}C$. At same incubation temperature, the higher initial inoculum level of Lb. plantarum, the better inhibitory effect against L. monocytogenes. In addition, TSB was inoculated with L. monocytogenes at different initial inoculum levels of $10^6,\;10^4$ and $10^2$ cells/me and then supplemented with 0, 30, 60 and 100 AU/ml of bacteriocin produced by Lb. plantarum. The mixed cultures were incubated at 37, 25 and $4^{\circ}C$. L. monocytogenes of three different initial inoculum levels began to be inhibited in the presence of more than 60 AU/ml of bacteriocin at $37^{\circ}C$. In TSB containing more than 60 AU/me of bacteriocin and incubated at $25^{\circ}C$, L. monocytogenes decreased by 2 log-units during the period of 12 hrs incubation and thereafter remained steady. At $4^{\circ}C$, L. monocytogenes decreased by 1.5 log-units in the presence of 60 AU/ml bacteriocin during the period of 4 days incubation and dropped to the non-detectable level in TSB with 100 AU/ml bacteriocin.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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