A bacterial strain WJ-98 found to produce active extracellular keratinase was isolated from the soil of a poultry factory. It was identified as Paracoccus sp. based on its 16S rRNA sequence analysis, morphological and physiological characteristics. The optimal culture conditions for the production of keratinase by Paracoccus sp. WJ-98 were investigated. The optimal medium composition for keratinase production was determined to be 1.0% keratin, 0.05% urea and NaCl, 0.03% K$_2$HPO$_4$, 0.04% KH$_2$PO$_4$, and 0.01% MgCl$_2$$.$6H$_2$O. Optimal initial pH and temperature for the production of keratinase were 7.5 and 37$^{\circ}C$, respectively. The maximum keratinase production of 90 U/mL was reached after 84 h of cultivation under the optimal culturing conditions. The keratinase from Paracoccus sp. WJ-98 was partially purified from a culture broth by using ammonium sulfate precipitation, ion-exchange chromatography on DEAE-cellulose, followed by gel filtration chromatography on Sephadex G-75. Optimum pH and temperature for the enzyme reaction were pH 6.8 and 50$^{\circ}C$, respectively and the enzymes were stable in the pH range from 6.0 to 8.0 and below 50$^{\circ}C$. The enzyme activity was significantly inhibited by EDTA, Zn$\^$2+/ and Hg$\^$2+/. Inquiry into the characteristics of keratinase production from these bacteria may yield useful agricultural feed processing applications.
Several bacterial strains utilizing crude oil as their sole carbon and energy source were isolated from polluted marine by crude oil. One of the strains, named KCL-2 showed strong degradation activity for crude oil. This strain was identified as a Klebsiella sp. based on the morphological, biochemical, and physiological characteristics. The optimum cultural conditions were as follows; $27^{\circ}C$~$37^{\circ}C$ for temperature and 7.0 for initial pH. Additionally, the optimal concentration of sodium chloride was 3.0%, confirming indicating that this strain was derived from sea water.The strain KCL-2 could use several kinds of n-alkane hydrocarbones from octadecane to octacosane as a sole carbon source. The emulsifying activity by KCL-2 was the highest after 3 days of cultivation under the condition of 3.0% sodium chloride, pH 7.0 and 32$^{\circ}C$. This strain had several criptic plasmids.
By FISH and spore staining methods, the changes of Bacillus spp. numbers were investigated at municipal waste water treatment system, which operated with B3 process. Total bacterial numbers, which is the sum ofDAPI bound cells and numbers of spore, were ranged TEX>$3.2{\times}10^8 ~ 4.4{\times}10^8 $ cells/ml. The Bacilli numbers whichis the sum of probe S-G-Bacill-0597-a-A-22 bound cells and numbers of spore were from $0.3{\times}10^7 ~ 8.4{\times}10^7 $ cells/ml. The ratios of Bacillus sp. to total bacteria were ranged from 8 to 60%. Among 4 aeration tanks, thefirst tank had shown the highest proportions of Bacillus sp. And third and fourth tanks, the numbers of sporewere increasing.
Streptomyces sp. AD001 is a Gram-positive soil actinomycetes secreting an uncharacterized 2,4-dichlorophenol (DCP) oxidizing enzyme, whose activity is similar to the previously known Actinomycetes lignin-peroxidase (ALiP). This extracellular peroxidase was purified from Streptomyces sp. AD001 as a single protein band on an SDS-PACE by ammonium sulfate fractionation, Q-sepharose, concanavalin A, and Bio-Gel HTP column chromatographies. The molecular mass of the purified peroxidase was determined by SDS-PAGE to be 45.2 kDa, and 49.7 kDa with MALDI-TOF-MS, respectively. The highest level of peroxidase activity was observed at pH 7.5 and $30^{\circ}C$. The amino terminal sequence of the purified peroxidase (G-E-P-E-E-G-N-V-D-G-T-L) showed no significant homologies to my known proteins, suggesting that Streptomyces sp. AD001 may secrete a novel kind of bacterial peroxidase Initial rate kinetic data of the 2,4-DCP oxidation were best modeled with a random-binding bireactant system.
Several methods to produce ethanol from tapioca starch were examined. Among four methods tested, alcohol fermentation with extruded tapioca starch was the most effective, which alcohol yield was 460.5 f/ton. After 69hours reaction with Rhizopus sp. glucoamylase, 108.7mg/$m\ell$ of reducing sugar were produced from extruded tapioca and 43.8mg/$m\ell$ from raw tapioca starch. In alcohol fermentation with extruded tapioca, the high concentration of alcohol at early stage prevented bacterial contamination and the fermentation rate was increased due to the high saccharifying power of glucoamylase on the extruded starch, but extrusion temperature had no influence on the fermentability, Scanning electron microscopy showed that the extrusion process changed the structure of tapioca starch granule to more susceptible form to glucoamylase attack than the raw starch. And glucoamylase of Rhizopus sp. had stronger digestion activity on both extruded tapioca and raw tapioca starch than that of Aspergillus usamii.
A bacterial strain producing highly viscous polysaccharide(A29 POL) was isolated from soil and identified sa Bacillus sp. A29. The cultural conditions of the Bacillus sp. A29 for the polysaccharide prouction were dextrin 12%, soytone 0.2%, SnCl$_{2}$ $\cdot $2H$_{2}$O 0.02%, Na$_{2}$HPO$_{4}$ $\CDOT $12H$_{2}$O 0.36%, L-alanine 0.01%, initial pH6.8, and 30$\circ $C at pH 3 FOR 4 days. Final viscosity of the culture broth was 65, 000 cp and then the amount of produced polysaccharide was 8.3 g/l. A29 POL was composed of glucose and xylose. A29 POL showed high viscosity at low concentration(0.1%) and in the presence of the salts such as NaCl or CaCl$_{2}$. A29 POL showed high viscosity acid condition and at alkali condition and high pseudoplasticity in the presence of a NaCl or CaCl$_{2}$. It was shown that the viscosity at high temperature(80$\circ $C) was decreased but it was recovered at low temperature (20$\circ $C. A29 POL was able to from film and gel in the presence of MgSO$_{4}$ $\CDOT $7H$_{2}$O, Na$_{2}$CO$_{3}$ \CDOT $H$_{2}$O, MnSO$_{4}$ $\CDOT $ 7H$_{2}$O. A29 POL had anionic charge.
Currently, urban greening projects and research are attracting attention as a way to mitigate urban heat island phenomenon. In this study, nitrogen fixative bacteria were isolated and their effects on plant growth were confirmed. First, enrichment was performed in a nitrogen-free medium to isolate the nitrogen-fixing bacteria, and the colony showing high growth in a medium with limited nitrogen source was isolated and purified. Separated bacterial isolates were reduced by more than 90% acetylene by ARA and indirectly confirmed the activity of nitrogenase by ethylene production. Cedecea sp. MK7 and Enterobacter sp. Y8 with confirmed reproducibility were selected as nitrogen fixative bacteria. Nitrogen fixing bacteria were applied to the growth of perennial rye grass, and it was found that the dry weight increased to 34.80 mg (186.60%) compared with the control with 18.65 mg dry weight. After plant growth, microbial community analysis of soil applied by bacteria showed similarity to the control group. Therefore, in this study, it is expected that the efficiency will be increased if plant growth is promoted by using nitrogen fixing bacteria in urban greenery system.
Activated sludge was sequentially adapted to benzene, toluene, and o-xylene (BTX) to study the effects on the change of microbial community. Sludge adapted to BTX separately degraded each by various rates in the following order; toluene>o-xylene>benzene. Degradation rates were increased after exposure to repeated spikes of substrates. Eleven different kinds of sludge were prepared by the combination of BTX sequential adaptations. Clustering analyses (Jaccard, Dice, Pearson, and cosine product coefficient and dimensional analysis of MDS and PCA for DGGE patterns) revealed that acclimated sludge had different features from nonacclimated sludge and could be grouped together according to their prior treatment. Benzene- and xylene-adapted sludge communities showed similar profiles. The sludge profile was affected from the point of the final adaptation substrate regardless of the adaptation sequence followed. In the sludge adapted to 50 ppm toluene, Nitrosomonas sp. and bacterium were dominant, but these bands were not dominant in benzene and benzene after toluene adaptations. Instead, Flexibacter sp. was dominant in these cultures. Dechloromonas sp. was dominant in the culture adapted to 50 ppm benzene. Thauera sp. was the main band in the sludge adapted to 50 ppm xylene, but became vaguer as the xylene concentration was increased. Rather, Flexibacter sp. dominated in the sludge adapted to 100 ppm xylene, although not in the culture adapted to 250 ppm xylene. Two bacterial species dominated in the sludge adapted to 250 ppm xylene, and they also existed in the sludge adapted to 250 ppm xylene after toluene and benzene.
The purpose of this work was to investigate the characteristics of a biosurfactant-producing bacterium isolated from crude-oil contaminated soils. During the incubation of strain HK-3 with 1% crude-oil, bacterial growth pattern, the amount of biosurfactant production, and pH changes were monitored. In order to examine the effect of supplemented carbons on the production of biosurfactant, cultivation of HK-3 cells in BH media with different carbons (e.g. glucose, dextrose, mannitol, citrate, or acetate) revealed that the production of biosurfactant reached the maximal level at the 72 h incubation with mannitol, which the area of clear zone was measured to approximately 7.64 $cm^2$. Identification test using the BIOLOG system, morphology study based on scanning electron microscopy and the 16S rRNA sequence-based phylogenetic analysis assigned strain HK-3 to a Pseudoalteromonas species, designated as Pseudoalteromonas sp. HK-3 which was registered in GenBank as [FJ477041].
The promoting effect of Pseudomonas sp. P7014 on the mycelia growth of Pleurotus eryngii was investigated. An ethyl acetate fraction (F5) from the culture supernatant of the bacteria was confirmed to contain the growth promoting compound (GPC). The GPC was identified to be indole acetic acid (IAA) by TLC, HPLC, MS/MS, and NMR analyses. P. eryngii mycelia grew rapidly both on PDA and in PDB after the treatment of GPC. The promoting concentration of GPC was as low as 1.0 nM. Tryptophan, the aminated form of IAA, was confirmed to be the precursor of IAA. These results suggested that bacterial secreted compound was IAA and plays an important role in promoting growth of mushroom mycelia.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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