A novel bacterial strain, MG7, with high cellulase activity was isolated and identified by morphological characteristics and molecular phylogeny analysis as Paenibacillus barcinonensis. Maximum production of cellulase by MG7 was observed at pH 7.0 and $35^{\circ}C$. The enzyme was purified with a specific activity of 16.88 U/mg, the cellulase activity was observed in a zymogram, and its molecular mass (58.6 kDa) was confirmed by SDS-PAGE. The purified enzyme showed maximum activity at pH 6.0 and $65^{\circ}C$ and degraded cellulosic substrates such as carboxy methyl cellulose (CMC), Avicel, filter paper, and ${\beta}$-glucan. The enzyme showed stability with 0.5% concentration of various surfactants. The $K_m$ and $V_{max}$ of cellulase for CMC and Avicel were found to be 0.459mg/ml and 10.46mg/ml/h, and 1.01 mg/ml and 10.0 mg/ml/h, respectively. The high catalytic activity and its stability to temperature, pH, surfactants, and metal ions indicated that the cellulase enzyme by MG7 is a good candidate for biotechnological applications.
섬유소 분해균 Cellulomonas sp. CS1-1의 각종 탄소원에서의 ${\beta}$-글루코시다아제 생성을 살피기 위하여 Quickfit FVIL 발효장치를 이용하고, 뉴트리엔트 이스트브로스, 카르복시멜틸셀룰로오스, 아비셀, 셀로비오스 등을 탄소원으로 한 배지에 뱃치로 배양하여 그 배양적 특성과 세포내 또는 세포외 ${\beta}$-글루코시다아제의 분포를 검토한 결과 : i)${\beta}$-글루코시다아제는 공시한 모든 배양 조건하에서 생성되었고 세포내 효소로서 배양여액에서는 검출되지 않았다. ii) 뉴트리엔트 이스트브로스와 카르복시메틸 셀룰로오스를 탄소원으로 할 때 보다 셀로비오스 및 아비셀을 탄소원으로 하는 경우 효소의 비활성도가 높았다. iii) 공시한 모든 기질에서 공히 균의 대수기(對數期)에 극대치의 비활성도를 나타내었다.
Effect of a nonionic surfactant, Tween 20 on the adsorption and kinetic mechanism for the hydrolysis of a microcrystalline cellulose, Avicel PH 101, by endoglucanase Ⅰ (Endo Ⅰ) and exoglucanase Ⅱ (Exo Ⅱ) isolated from Trichoderma viride were studied. The Langmuir isotherm parameters, amount of maximum adsorption (Amax) and adsorption equilibrium constant (Kad) for the adsorption, were obtained in the presence and the absence of nonionic surfactant. On the addition of Tween 20, the Kad and Amax values of Exo Ⅱ were decreased, while those of Endo Ⅰ were not affected. These indicate that the adsorption affinity of Exo Ⅱ on the cellulose is weakened by nonionic surfactant, and the surfactant enhanced desorption of Exo Ⅱ from insoluble substrate. The enzymatic hydrolysis of the cellulose can be described by two parallel pseudo-first order reactions using the percentages of easily (Ca) and hardly (Cb) hydrolyzable cellulose in Avicel PH 101 and associated rate constants (ka and kb). The Ca value was increased by adding Tween 20 for all enzyme samples (Exo Ⅱ, Endo Ⅰ and their 1:1 mixture) implying that the low-ordered crystalline fraction in the cellulose may be partly dispersed by surfactant. The ka value was not affect by adding Tween 20 for all enzyme samples (Exo Ⅱ, Endo Ⅰ and their 1:1 mixture). The kb value of Exo Ⅱ was increased by adding Tween 20, while that of Endo Ⅰ was not affected. This suggests that the surfactant helps the Exo Ⅱ desorb from microcrystalline cellulose, and increase the hydrolysis rate. These results were show that the increase of hydrolysis of cellulose by the nonionic surfactant is due to both the activation of Exo Ⅱ and partial defibrillation of the cellulose.
섬유소 폐기물의 생물학적 당화를 위해 분리한 사상균 FJ1은 섬유소 분해효소의 생산성이 뛰어난 신규의 유망한 셀룰라아제 생산균주로 잠정적으로 평가되었다. 사상균 FJ1의 셀룰라아제 생산을 위한 배지조성은, 질소원으로서 0.1% peptone을 사용하였을 경우와, avicel 및 섬유소 폐기물인 볏짚을 혼합하여 사용한 경우 높은 효소생산성을 나타냈다. 경제적인 효소생산을 위한 기질로 섬유소 폐기물의 농도와 혼합비는 1%(w/v)농도에서 볏짚과 펄프를 각각 0.5%(w/v)와 0.5%(w/v)으로 사용하였을 경우 CMCase, xylanase, $\beta$-glucosidase, avicelase의 효소 활성은 각각 24.3, 38.7, 1.5, 0.6 unit/ml 이었다. 이러한 효소생산성은 섬유소 폐기물의 생물학적 당화기술에 크게 기여할 수 있으리라 사료된다.
삼림 토양 시료를 이용하여 cellulase 생산균주를 단리한 결과, Carboxymethylcellulose (CM-cellulose)를 기질로 첨가한 고체배지상에서 명확한 활성환을 형성하는 총 6종류의 cellulase 생산균주를 단리하여, 단리한 균주 유래의 16S rDNA유전자 염기서열 분석을 통하여 균주 동정을 진행하였다. 그 결과 본 연구에서 단리된 균주는 Bacillus subtilis 4종류, Bacillus amyloliquefaciens 1종류, Bacillus cereus 1종류로 동정되었다. 이 중에서 CM-cellulose에 대한 가장 높은 cellulase 활성을 보이는 Bacillus subtilis를 선정하여 Bacillus subtilis NSC로 명명하였다. Bacillus subtilis NSC 유래 cellulase는 균주 배양 36~48시간에서 가장 높은 cellulase 생산성을 보였으며, 최적 pH 및 온도를 검토한 결과, 본 균주 유래 cellulase는 pH 5.0과 $40^{\circ}C$에서 가장 높은 효소 활성을 나타내었다. 그리고, pH 4.0~5.0 조건에서 30분간 효소처리를 하여도 효소활성의 감소가 없었으며, $40^{\circ}C$까지는 30분간의 열처리에도 효소활성의 저하 없이 안정한 특성을 보였다. CM-cellulose, Alkali swollen cellulose, Sigmacell-cellulose, Alpha-cellulose, 그리고 Avicel을 기질로 기질 특이성을 한 결과 CM-cellulose에 대하여 가장 높은 효소 활성을 나타내었으며, cellulose 결정구조를 보유하고 있지않는 CM-cellulose와 Alkali swollen cellulose에 대해서는 명확한 효소활성을 보였다. 하지만, cellulose 결정구조를 보유하고 있는 Sigmacell Cellulose, Alpha-cellulose, 그리고 Avicel 기질에 대해서는 CM-cellulose 활성의 각각 8%, 8%, 그리고 4%의 매우 낮은 효소활성을 나타내었다. Bacillus subtilis NSC 유래 cellulase의 0.26 U/ml 조효소액과 0.52 U/ml 조효소액을 이용하여 CM-cellulose의 분해 특성을 검토하였을 때 두 조효소액 모두 반응 CM-cellulose에 대해 반응 120분 후에 0.43 U/ml와 0.76 U/ml의 효소 활성을 나타내었다.
For the model tablets using mannitol and Avicel PH 101 as excipients, the patterns of disintegration and dissolution from the differences of physical properties were investigated. It was found that the patterns in the dissolution and binding forces in the interaction of materials by estimates of solid-solid or liquid surface free energy due to cohesive or adhesive properties of materials, and solid surface free energy in binding forces of tablet should be considered as an important factor in dissolution processes.
Xylanase(1, 4-beta-D-xylan xylanohydrolase` EC 3.2.1.8) II was purified from Penicillium verruculosum by using the techniques of two anion exchange chromatographies, and gel filtration. The molecular weight of this enzyme was about 22, 000 as determined by SDS-electrophoresis. The enzyme showed hydropytic activity toward xylan but did not catalyze hydrolysis of Rho-nitrophenyl-beta-D-xylopyranoside, Rho-nitrophenyl-beta-D-glucopyranoside, Rho-nitrophenyl-beta-D-cellobiopyranoside, and celluloses such as Avicel, cotton, filter paper, carboxymethylcellulose.
This experiment was carried out to determine the amount of organophosphorous pesticides accumulated in farmer's blood during the farming season. The Blood had been collected for about 5ml from farmer's, and extraction was purified on a Avicel/Darco G-Co (1:10) column and determined by Gas Chromatography using AFID supported on 2% EGA. The Gas chromatographic detection yielded recoveries from the blood of 88% for smithion 94% for malathion. The amount of average contamination shows 0.045ppm for smithion. 0.054ppm for malathion.
토양으로부터 분리된 섬유소분해 활성이 우수한 균주를 동정하고, 효소의 생산조건, 효소의 분리 및 정제와 정제한 효소의 물리화학적 특성을 검토하였다. 분리된 미생물은 동정을 통하여 Pseudomonas sp. YD-15라고 명명하였고 avicel 1.2%, yeast extract 0.6%, $KNO_3$ 0.1%, $K_2HPO_4$ 0.2%, $MgSO_4$$7H_2O$ 0.15%의 배지(pH 8.0)를 사용하여 $30^{\circ}C$에서 $60{\sim}80$시간 배양 하였을 때 최대 효소생산을 보였으며, 배양액으로부터 85% ammonium sulfate 침전, DEAE-Sepharose CL-6B chromatography, Sephadex G-100 gel filtration 과정을 통하여 14%의 수율로 정제도 15.3배의 효소단백질을 얻었다. 정제효소의 최적 작용 pH는 6.0 이었고 pH $5.0{\sim}8.0$ 사이에서 안정하였다. 최적 작용온도는$50^{\circ}C$였으며, $50^{\circ}C$까지는 안정하였다. 효소의 분자량은 약 100,000으로 추정되었으며, 기질인 carboxymethylcellulose(CMC)에 대한 Km 값은 40mg/ml 이었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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