기존의 황국균을 이용하여 제조하는 고추장의 품질을 개선 하고자 항암 및 강장에 효과가 있는 동충하초를 이용한 코오지로 제조한 고추장의 품질특성을 조사하였다. 동충하초를 이용하여 제조한 코오지가 황국균을 이용하여 제조한 코오지에 비해 효소역가의 경우 protease의 활성은 우수한 것으로 나타난 반면 amylase의 역가는 낮은 것으로 나타났다. 고추장을 제조하여 맛, 향, 색 및 전체적인 기호도에 있어 황국균을 이용하여 제조한 코오지와 동충하초를 이용하여 제조한 코오지를 7:3의 비율로 혼합하여 숙성한 것이 기존의 황국균만을 이용하여 제조한 고추장에 비해 우수한 것으로 나타나 동충하초를 이용할 경우 기존의 황국균으로 제조하는 고추장에 비해 품질을 개선할 수 있는 효과가 있는 것으로 나타났다.
국내 전통발효식품으로부터 protease 활성이 높은 Aspergillus oryzae SCF-6, SCF-37, 그리고 JJSF-1 균주를 선발하여 된장을 각각 제조하고 60일간 숙성하면서 품질을 비교 평가하였다. 60일 숙성 동안 수분 염도 및 pH는 시료 간에 큰 차이가 없었다. 된장의 숙성지표가 되는 아미노산성 질소의 함량은 숙성 경과에 따라 증가하여 60일 숙성 후 SCF-6을 활용하여 제조한 된장이 971.6 mg%로 다른 시료보다 높았으며, 유리아미노산 함량도 상대적으로 높은 8,064.9 mg%이었다. SCF-6과 37로 제조한 된장은 60일 숙성 후 GABA 함량이 각각 61.3과 53.7 mg%로 측정되었다. 색도는 숙성 경과에 따라 명도와 황색도는 점차 감소한 반면 적색도는 점차 증가하였다. 아플라톡신은 모든 된장에서 불검출 되었고, 바이오제닉 아민 중 histamine 함량은 2.55-5.60 mg/kg 그리고 tyramine은 3.70-5.87 mg/kg으로 매우 낮게 측정되었다. 본 결과로 A. oryzae SCF-6은 장류 제조의 종균으로 적합한 것으로 판단된다.
고역가 액체종국 제조 및 배양기술을 개발하기 위해, Aspergillus 속의 곰팡이(A. oryzae, A. niger)를 이용한 밀기울 첨가율 별(0, 5, 10, 15 및 20%) 배지를 이용한 액체종국을 제조하여 이들의 품질 특성을 조사하였다. 액체종국의 일반성분 및 효소활성(glucoamylase, acidic protease)을 조사한 결과, 배지에 밀기울 첨가량이 많을수록 균사체량이 많아졌을 뿐만 아니라 산도, 아미노산도도 증가하는 것을 알 수 있었고 액체종국에 첨가하는 밀기울 농도가 달라짐에 따라 각 균주의 효소활성이 바뀌는 것을 알 수 있었다. 또한, 효소활성에 따른 최적 배양시간은 곰팡이 종류에 따라 차이가 있었고 A. oryzae와 A. niger 곰팡이의 액체종국 배양은 10~15% 밀기울을 첨가하여 48~72시간 배양하는 최적조건을 규명하였다. 기존에 사용되었던 고체종국과 비교하여 밀입국제조에 종국으로써 적합한지를 구명하고자 A. oryzae와 A. niger를 사용한 고체종국을 접종한 밀누룩을 대조구로 하여 밀기울 10% 액체배지로 만든 액체종국의 접종량 별(1, 3, 5, 10%) 밀누룩의 배양시간 별(0, 15, 20, 36, 38, 40 hrs) 및 이화학적 특성과 효소활성(${\alpha}$-amylase, glucoamylase, acidic protease)변화를 비교하였다. 결론적으로 시간과 인력등의 경제적 가치가 많이 투입되는 고체종국 보다는 누룩 제조시 액체종국을 사용하는 것이 여러 가지 측면에서도 유리 하다고 여겨진다.
Various parameters such as solvent selection, concentration, solid/liquid ratio, soaking time, temperature, stationary, shaking conditions, and repeated extractions were investigated in order to determine the optimum extraction conditions of ${\beta}$-glucosidase from bagasse fermented by mixed culture of Aspergillus niger NRC 7A and Aspergillus oryzae NRRL 447. Among various solvents tested, non ionic detergents gave the best results than the inorganic or organic salt solutions and distilled water. The optimum conditions for extraction of ${\beta}$-glucosidase were 30 min soaking time at $40^{\circ}C$ under shaking condition at 150 rpm, with solid/liquid ratio 1:15 (w/v), which yielded $2882.74{\pm}95.52U/g$ fermented culture (g fc) of enzyme activity. With repeated washes under the above optimum conditions, the results showed that enzyme extracted in the $1^{st}$ and $2^{nd}$ washes represents about 90% of the total activity.
Phytases (myo-inositol hexakisphosphate phosphohydrolase; EC 3.1.3.8) are enzymes which catalyze the hydrolisys of phytate into myo-inositol and inorganic phosphates. Phytases are found in plants and a variety of microorganisms. Aspergillus species were treated with 254 nm of UV irradiation for the screening of phytase overproducing mutant strains. At 15 minute irradiation, the survivals of population were less than 5%, and UV irradiation time was decided at 20 minute for the isolation of mutant strains. Four UV mutant strains in A. oryzae (YUV-47, -169, -341, -511) and six in A. ficuum (FUV-17, -36, -69, -193, -317, -419) were isolated on PSM media containing ammonium phosphate. The specific enzyme activities of A. ficuum mutants are 110 to 140% higher than that of wild type.
Thirty-three Mannich bases of 2,2'-methylene bis(3,4,6-trichlorophenoxyacetic acid) were synthesized as potential antimicrobial agents and tested against Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Escherichia coli, Trichophyton rubrum, Microsporum gypseum, Epidermophyton floccosum, Aspergillus niger and Aspergillus oryzae in vitro. It was found that: 1) Compounds 24 and 22 were active against Staphylococcus aureus and Bacillus subtilis at the concn. of 1 $\mu$g/ml respectively; 2) Compounds 9 and 29 were active against Trichophyton rubrum at the concn. of 2 $\mu$g/ml respectively; 3) Compouns 9 and 30 were active against Microsporum gypseum at the concn. of 2 $\mu$g/ml respectively; 4) Compounds 6,9,13,15,21,28,29,31,33 and 34 were active against Epidermophyton floccosum at the concn. of 1 $\mu$g/ml respectively; 5) Compounds 6,9,18 and 28 were active against Aspergillus niger and Aspergillus oryzae at the concn. of 1 $\mu$g/ml respectively.
Currently, the genetic modification of Aspergillus oryzae is mainly dependent on protoplast-mediated transformation (PMT). In this study, we established a dual selection marker system in an industrial A. oryzae 3.042 strain by using Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation (ATMT). We first constructed a uridine/uracil auxotrophic A. oryzae 3.042 strain and a pyrithiamine (PT)-resistance binary vector. Then, we established the ATMT system by using uridine/uracil auxotrophy and PT-resistance genes as selection markers. Finally, a dual selection marker ATMT system was developed. This study demonstrates a useful dual selection marker transformation system for genetic manipulations of A. oryzae 3.042.
본 연구는 항비만 소재로 연구된 도라지와 울금 소재를 대상으로 발효 전과 후 3T3-L1 지방세포의 분화 억제효능을 확인하고자 하였다. 그 결과 발효 전 도라지와 울금은 3T3-L1 세포의 분화에 영향을 미치지 못하는 것을 확인할 수 있었다. Apsergillus oryzae 발효를 통해 만들어진 소재들은 도라지 발효물의 플라보노이드 증가를 제외하면 모든 소재에서 폴리페놀과 플라보노이드의 함량 및 항산화 활성이 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 그러나 발효 전과 다르게 발효 후 도라지, 울금 및 도라지와 울금 혼합물의 발효물에서 3T3-L1 세포의 분화억제능이 oil red O 염색법을 통해 관찰되었으며, mRNA 발현 확인을 통해 SREBP-1c와 $PPAR{\gamma}$의 발현을 억제하여 분화를 억제할 수 있음을 확인하였다. 이는 Apsergillus oryzae 발효과정이 도라지와 울금의 항비만효과를 개선할 수 있으며, 발효과정을 통해 새로운 항비만 유효성분이 생성되었음을 예측할 수 있었다. 본 연구결과를 통해 Apsergillus oryzae 발효공정이 도라지와 울금의 기능을 향상시켜 우수한 기능성 제품의 개발에 유용하게 활용될 수 있음을 확인할 수 있었으며, 개발공정의 기초자료를 제공할 것으로 사료된다.
고초균과 효모를 혼용 첨가한 고추장을 6개월간 숙성시키면서 pH, 미생물 및 효소활성도의 변화를 조사한 결과는 다음과 같이 요약할 수 있다. pH 변화는 담금 직후에는 $5.29{\sim}5.35$에서 숙성 60일 경에는 $4.71{\sim}4.84$로 낮아졌으며 효모 첨가구에서는 숙성 초기에 pH 강하가 심한 것으로 나타났으나 유의적인 차이는 없었다. 호기성 세균 수는 고초균 첨가시 담금 초기에는 $3.9{\sim}4.2{\times}10^6$ 생균 수였던 것이 숙성 30일 경까지 급속히 증가하였고 그후 서서히 감소되어 숙성 90일 이후에는 일정 수준을 유지하였다. 곰팡이 수는 숙성 30일까지 현저히 증가한 후 감소되어 숙성 60일 이후에는 완만한 수준을 보였고, 고추장 숙성 기간 중 효모 무첨가구에서는 고추장 숙성 30일경을 전후하여 효모를 발견할 수 있었으며 숙성 60일까지 급격히 증가한 후 감소하였다. 효모 첨가구에서는 30일 이후부터 효모 수가 증가하였으며 숙성 60일 이후부터는 감소하였다. ${\alpha}-amylase$와 ${\beta}-amylase$ 활성도는 곰팡이와 고초균을 혼합한 시험구가 비교적 높은 활성을 보여 주었고 효모첨가구에서는 활성이 감소되었다. Acidic protease 활성도는 숙성 30일 이후 급격히 증가하는 경향이 나타났으며 특히 곰팡이와 고초균 혼용구에서 보다 높은 활성도를 보여주었다. 따라서 곰팡이 단용구에 비해 고초균을 혼용 첨가한 고추장이 숙성 중 미생물 수도 많았고 효소 활성도가 높은 것으로 나타났다.
대전광역시 근교의 야산과 들판 등지에서 썩은 나뭇잎, 짚, 흙을 채취하여 각각을 배양한 다음 Congo red test에 의해 cellulase 활성을 보이는 균주를 선별하였다. Genomic DNA를 분리한 후 PCR을 수행하여 DNA sequence를 Gene Bank를 통해 분석한 결과 A. tubingensis로 밝혀졌다. 이것을 배양하여 상등액을 crude enzyme으로 사용하여 온도와 pH를 달리하면서 효소의 활성정도를 측정하였다. 대조균주로 A. oryzae KCTC 6291를 이용하였고, 본 연구를 통하여 분리한 균주인 A. tubingensis가 생산하는 cellulase는 A. oryzae의 cellulase에 비하여 각각 다른 온도와 pH에서 높은 안정성을 보여주었다. A. tubingensis는 각각의 온도에서 활성의 정도가 비슷했으며, 45$^{\circ}C$, 55$^{\circ}C$에서 높은 활성을 나타내고 있지만, 고르게 활성이 나타났다. 또한 pH 12.0에서 가장 높은 활성을 보여 주었고, pH 2.0, 3.0, 4.0에서는 양쪽 모두 거의 활성이 없었으며, 중성, 염기성에 대해서 활성에는 큰 변화가 없었다. 따라서, 분리 동정한 A. tubingensis는 온도와 pH에서 고르게 활성을 나타내므로 생균제로 활용할 수 있는 범위가 클 것으로 여겨진다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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