The hypothalamus is the classic site of synthesis of arginine vasotocin as neurohypophyseal hormone in the chicken. However, high concentrations of arginine vasotocin were also measured in ovarian tissues by radioimmunoassay. At first, we observed specific positive signal of mRNA encoding AVT in the hypothalamus by Northern hybridization. However, we could not find any specific bands in ovarian and uterine tissues. For evidence of transcription of the arginine vasotocin gene ingonadal tissues of the chicken, this study has applied the polymerase chain reaction as a highly sensitive assay. The hypothalamus, the four largest preovulatory ovarian follicles and the shell gland (uterus) were collected at 4 h and 20 h before oviposition. The ovarian follicular tissues were separated into granulose theca interns and theca externa layers. The uterine tissues were separated into myometrium and endometrium The extracted mRNA was converted to cDNA by reverse-transcriptase using oligo-$d(T)_{15}$ primer. Then, the cDNA was amplified by Vent polymerase and arginine vasotocin specific primers. The amplification reaction was incubated by 30 cycles successively, $95^{\circ}C$, $55^{\circ}C$ and $72^{\circ}C$ earth for 1 min. Te comparisons of the mRNA levels encoding arginine vasotocin between the tissues were determined by semi-quantification methods. After amplification of the cDNA, the PCR products were detected in hypothalamus, ovarian tissues and uterine tissues. The results of semi-quantification showed that the levels of arginine vasotocin mRNA in ovarian iud uterine tissues were about from 1/50 to 1/1000 when compared to that in the hypothalamus. The very low levels of mRNA encoding arginine vasotocin in ovarian and uterine tissues probably led us to conclude that arginine vasotocin may play a role of local mediate acting autocrine and/or paracrine.
Park, Mi Seon;Kim, Na Na;Shin, Hyun Suk;Min, Byung Hwa;Kil, Gyung-Suk;Cho, Sung Hwoan;Choi, Cheol Young
Animal cells and systems
/
v.16
no.5
/
pp.391-399
/
2012
We cloned cDNA-encoding arginine vasotocin (AVT) from the brain of the cinnamon clownfish Amphiprion melanopus, and that was predicted to encode a protein of 153 amino acids. We examined changes in the expression of AVT mRNA in the brain and arginine vasotocin receptor (AVTR) mRNA and osmotic stress transcription factor 1 (OSTF1) mRNA in the gills of the cinnamon clownfish using quantitative real-time PCR in an osmotically changing environment (seawater (35 psu) ${\rightarrow}$ brackish water (BW, 17.5 psu) and BW with prolactin [PRL]). The expression of AVT, AVTR, and OSTF1 mRNA in the brain and gills increased after transfer to BW, and the expression was repressed by PRL treatment. AVT-immunoreactive cells were almost consistently observed in the telencephalon. The plasma $Na^+$ and $Cl^-$ levels decreased in BW, but the level of this parameter increased in BW with PRL treatme during salinity change. These results suggest that AVT, AVTR, and OSTF1 play important roles in hormonal regulation in osmoregulation organs, and that PRL improves the hyperosmoregulatory ability of cinnamon clownfish in BW environment.
Two experiments were conducted to investigate the effect of betaine on egg production, lipid metabolism, and osmoregulation in 18-to 42-week-old ISA Brown laying hens. In experiment 1, three hundred and sixty one hens were fed a com-soy basal diet contailing 16% crude protein (CP), 2800 kcal/kg metabolizable energy (ME), 0.33% methionine, and 0, 300, 600, or 1200 mg betaine per kg diet. Egg production, egg weight, feed consumption, feed conversion, and egg quality were measured every eight weeks. Betaine concentration in live and egg were determined along with serum cholesterol, abdominal fat, total serum protein and albumin levels. In experiment 2, twenty thirty-three-week-old laying hens were fed the same diets as those used in experiment 1 in individual cages and the amount of feed and water consumption were measured for two weeks. At the end of experiment 2, all birds were killed to determine blood plasma and ileal osmopressure, arginine vasotocin (AVT), and liver moisture content. In experiment 1, egg production between the treatments during the first eight weeks were not different, whereas the significant increment of egg production were noticed in the birds fed more than 600 ppm betaine after reaching the peak egg production stage (p<0.05). The egg weight was reduced significantly by the betaine supplementation for the first 8 weeks (p<0.05). Feed conversion tended to improve by betaine supplement. Egg quality was not enhanced by betaine supplementation. Liver betaine level increased with betaine feeding compared to the control but betaine concentration in eggs decreased with betaine supplementation. Betaine supplementation elevated the level of serum total cholesterol and triglyeerides compared to the control. Abdominal fat content was increased by betaine supplementation, whereas liver fat content decreased. In experiment 2, water consumption significantly increased in hens fed diets containing 300 and 600 mg betaine/kg (p<0.05) and osmotic pressure of ileal digesta increased with betaine supplement. Liver moisture content was not affected by betaine, but AVT increased in hens fed betaine. The overal results suggested the possibility of using betaine as a feed additives in the laying hens beacuse of its positive contribution to improving egg production and other metabolic parameters related to lipid metabolism.
Isotocin (IT), a nonapeptide homolog of oxytocin in mammals, has been suggested to be involved in physiological processes including social behaviors, stress responses, and osmoregulation in teleost fish. To study its structure and function, the gene encoding the IT precursor was cloned from the genomic DNA and brain cDNA of the cinnamon clownfish, Amphiprion melanopus. The IT precursor gene consists of three exons separated by two introns, and encodes an open reading frame of 156 amino acid (aa) residues, comprising a putative signal peptide of 19 aa, a mature IT protein of 9 aa, a proteolytic processing site of 3 aa, and 125 aa of neurophysin. Tissue-specific analysis of the IT precursor transcript indicated its expression in the brain and gonads of A. melanopus. To examine its osmoregulatory effects, the salinity of the seawater (34 ppt) used for rearing A. melanopus was lowered to 15 ppt. Histological analysis of the gills indicated the apparent disappearance of an apical crypt on the surface of the gill lamella of A. melanopus, as pavement cells covered the surface upon acclimation to the lower salinity. The level of Na+/K+-ATPase activity in the gills was increased during the initial stage of acclimation, followed by a decrease to its normal level, suggesting its involvement in osmoregulation and homeostasis. The only slight increase in the level of IT precursor transcript in the A. melanopus brain upon low-salinity acclimation suggested that IT played a minor role, if any, in the process of osmoregulation.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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