Antimicrobial peptides are widely used in various organisms as a defense system against infection. The peptides are lethal towards bacteria and fungi, however have minimal toxicity in mammalian and plant cells. In this aspect, it is considered that antimicrobial peptides are new alternative materials for defensing against microbial infection. Here, we describe overall characteristics of antimicrobial peptides based on the mechanism of action, classification of the peptides, report detection/screening methods and chemical/biological production. It is expected that understanding of innate immune system based on antimicrobial peptides tends to develop novel natural antimicrobial agents, which might be applied for defensing pathogenic microorganisms resistant to conventional antibiotics.
A series of N(2)-benzothiazolyl substituted tetrahydroindazoles has been synthesized via cyclic ${\beta}$ keto esters. Optimum reaction condition was found as acidic toluene and effect of higher acidity towards substituted hydrazines in situ was described. Synthesized compounds have been achieved as single isomer and characterized by using 1D and 2D NMR spectral reports. Antimicrobial screening was carried out for the synthesized compounds along with a series of N(2)-pyridyl tetrahydroindazoles.1 The results of the in vitro antimicrobial screening studies revealed that compounds 13, 16 against Staphylococcus aureus, 11 against Escherichia coli, 10-12, 16 against Pseudomonas aeruginosa and 12 against Klebsiella pneumoniae recorded almost two-fold better activity compared to the standard drug used.
The microdilution assay recommended by NCCLS (National Committee for Clinical Laboratory Standards) is one of the standardized methods of antibiotic susceptibility test. This method has been widely used clinically to obtain MIC values of antibiotics on pathogenic microorganisms. It is more convenient, rapid and simple to test many samples than other test methods such as agar diffusion assay and broth macrodilution assay. The screening of antimicrobial agents from microbial extracts is too laborious in its process. Therefore, a number of screening methods having more simple procedure have been developed. In our laboratory, we applied microdilution assay for screening the antimicrobial agents. This assay showed dose-response results and was more sensitive than disc diffusion assay in our system. We tested 200 samples of microbial extracts originated from 100 microbial strains and selected several samples as potential candidates. In this report, we show that the microdilution assay is more convenient method in screeing of antibiotic susceptibility than those previously reported.
Finding new antimicrobial activities by functional metagenomics has been shown to depend on the heterologous host used to express the foreign DNA. Therefore, efforts are devoted to developing new tools for constructing metagenomic libraries in shuttle vectors replicatable in phylogenetically distinct hosts. Here we evaluated the use of the Escherichia coli-Bacillus subtilis shuttle vector pHT01 to construct a forest-soil metagenomic library. This library was screened in both hosts for antimicrobial activities against four opportunistic bacteria: Proteus vulgaris, Bacillus cereus, Staphylococcus epidermidis, and Micrococcus luteus. A new antibacterial activity against B. cereus was found upon screening in B. subtilis. The new antimicrobial agent, sensitive to proteinase K, was not active when the corresponding DNA fragment was expressed in E. coli. Our results validate the use of pHT01 as a shuttle vector and B. subtilis as a host to isolate new activities by functional metagenomics.
생체 염 농도에서도 항균활성을 유지할 수 있는 선형 ${\alpha}$-helical 항균 펩타이드를 M13 펩타이드 라이브러리로부터 탐색할 수 있는 새로운 방법을 개발하였다. M13의 pIII은 magainin 유도체인 MSI-344와 indolicidin과 융합된 상태에서도 파아지의 viability에 영향을 주지 않는 것으로 보아, MSI-344와 indolicidin의 대장균에 대한 독성을 중화할 수 있는 것으로 판단되며, 따라서 대장균에서 항균 펩타이드 라이브러리의 제조가 가능함을 증명하였다. 선형 항균 펩타이드의 보존된 부위를 바탕으로, 13개의 아미노산 잔기로 구성된 semi-combinatorial 항균 펩타이드 라이브러리를 M13를 이용하여 제조하였다. 제조된 파아지 라이브러리는 먼저 적혈구에 흡착시켜, 높은 용혈 역가를 가질 가능성이 있는 파아지를 제거한 후, 높은 염 농도에서 Pseudomonas aeruginosa와 Staphylococcus aureus에 흡착할 수 있는 파아지를 탐색하였다. 탐색된 펩타이드들은 염이 없는 조건에서는 비교적 낮은 항균 역가를 보였지만, P06와 S18 펩타이드의 경우, 생체 염 농도보다 높은 150 mM $Na^+$, 2 mM $Mg^{2+}$, 2 mM $Ca^{2+}$의 조건에서도 항균 역가가 영향을 받지 않았으며, 심각한 용혈 역가 또한 보이지 않았다. 본 연구에서 개발한 대상 세균에 대한 흡착능력을 이용한 탐색방법은 salt-tolerant antimicrobial peptide의 개발의 새로운 가능성을 제시하였다.
흥국으로부터 분리된 Monascus 균주로부터 항균활성이 우수한 2균주, 분리주 No.116및 No.481을 선정하여 영양원 및 배양조건의 변화에 따른 항균활성에 대한 검토한 결과 분리주에 따라 차이를 보였으며, 분리주 No.116의 경우 탄소원으로서는 sucrose 8%, 질소원으로 $(NH_4)_2SO_40.8%,$ 인산염으로 $KH_2PO_40.5%$ 그리고 금속성분으로 $MgSO_40.5%$ 첨가시 뚜렷이 향상된 결과를 보였으며, 분리주 No.481의 경우에는 각각 sucrose 8%, $(NH_4)_2SO_41.6~2%,$$K_2HPO_40.1%,$$MgSO_40.5%$ 그리고 $FeSO_40.5%$ 첨가시 항균활이 크게 향상된 결과를 보였다. 또한 두 균주 모두 배양 초기의 pH는 5.3, 배양온도는 $32.5^{\circ}C에서$ 가장 우수한 항균물질을 생성할 수 있었다. 상기 배양 최적조건에서 분리주 No.116과 No.481 모두Bacillus subtilis, Staphyloccus aureus, Listeria monocytogenes 및 Enterococcus faecium에 대해 51시간 이상 뚜렷한 생육저해를 나타냈다.
The periodontal diseases and dental caries are major infectious diseases in oral cavity. Many of the preventive and therapeutic dental products contain the antimicrobial and anti-inflammatory components. But some of these antimicrobial have weak points such as coloration, burning sensation and insolubility in water. We have screened the therapeutic herbal extracts of the Plant Extract Bank for the antimicrobial activity on the major dental pathogens by growth inhibition assay. For the Porphyromonas gingivalis, 8 herbal extracts had an antimicrobial activity, 11 herbal extracts for the Prevotella intermedia, 43 herbal extracts for the Haemophilus actinomycetemcomitans and 61 herbal extracts for the Streptococcus mutans. Among these extracts, 6 herbal extracts had an antimicrobial activity for more than 3 species of dental pathogens. These extracts are Araliae Cordatae Radix, Crassirhizomae Rhizoma, Mori Radicis Cortex, Psoraleae Semen, Pini Ramulus and Sieges- beckiae Herba. All of effective extracts were CA group, ethanol extracts. Among these 6 herbal extracts, only Crassirhizomae is known to have a antibacterial effects. Therefore these herbal extracts have a possibility to be a candidate for a major antibacterial components in dental products.
Because of the need for new antimicrobial substances with novel mechanisms of action, we report here the use of an Acinetobacter reporter system for high-throughput screening of active antimicrobial agents. The bioreporter Acinetobacter strain DF4/PUTK2 carrying luciferase genes luxCDABE was chosen because of its ecological importance and it is widespread in nature. This bioreporter is genetically engineered to emit light constitutively that can be measured in real time by luminometry. Hence, this reporter system was employed to determine the bacteriostatic actions of spent-culture supernatants derived from twelve bacterial isolates. Out of the results, the strongest bioluminescence inhibitory effect of the supernatants was recorded with Bacillus cereus strain BAC (S5). Subsequently, ethyl acetate extracts of extracellular products of strain BAC (S5) were separated by a thin-layer chromatography (TLC). Based on the bioluminescence inhibitory assay, three fractions were found to have antimicrobial activity. One fraction (C) having the strongest antimicrobial activity was further purified using TLC and characterized by IR, $^1H$ NMR, mass spectrometry, SDS-PAGE, and amino acid composition analysis. The results predicted the presence of 2-pyrrolidone-S-carboxylic acid (PCA) and the octadeconic-acid-like fatty acid. Fraction C also demonstrated a broad inhibitory activity on several Gram-negative and Gram-positive bacteria. In conclusion, the Acinetobacter reporter system shows great potential to be a reliable, sensitive, and real-time indicator of the bacteriostatic actions of the antimicrobial agents.
Jang, Bo Kook;Chi, Lai Won;Cho, Ju Sung;Lee, Cheol Hee
Journal of Plant Biotechnology
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제47권1호
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pp.90-99
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2020
This study aimed to screen for plants with antimicrobial potential among the evergreen woody species of South Korea that are used for horticulture and landscaping and to provide basic information about plants with proven antimicrobial activity to underpin future research. The plant materials were extracted under various conditions, and the antimicrobial activities of the extracts were evaluated by agar diffusion assay. The screening tests demonstrated that the crude extracts of 43 species had inhibitory effects against S. aureus. The inhibitory activities of four species (Elaeocarpus sylvestris, Camellia japonica, Cleyera japonica, and Quercus salicina) were relatively higher than that of the synthetic antimicrobial agents methylparaben and phenoxyethanol. The highest inhibitory activity was observed with the leaf extracts (extracted with methanol for 30 minutes) of E. sylvestris, based on induction of the largest inhibition zone of 23.3 mm in size. In addition, solvent fractions of E. sylvestris were evaluated. The largest inhibitory zone of 23.1 mm was observed for the n-butanol fraction, which is likely to contain effective compounds that exhibit inhibitory activity against S. aureus. In contrast, n-hexane and residual aqueous fractions showed no antimicrobial activity. Overall, our findings confirm that evergreen woody plants native to South Korea have potential antimicrobial activity.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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