In order to select multifunctional powerful antagonistic biocontrol agent against red-pepper rotting fungi Phytophthora capsici, we isolated an indigenous antagonistic bacterium which produces antifungal substances and siderophores from a local soil of Kyongju, Korea. The isolated strain was identified as Pseudomonas fluorescens biotype F. The antibiotic produced from P. fluorescens 2112 inhibited hyphae growth and the zoospore germination of Phytophthora capsici. The favorable carbon, nitrogen source and salts for the production of antibiotic from P. fluorescens 2112 were glycerol, beef extract and LiCi at 1.0%, 0.5% and 5 mM, respectively. And antagonistic activity of P. fluorescens 2112 was confirmed against P. capsici in vivo.
A lichen-forming fungus was successfully isolated by discharged spore method from Korean lichen (Hetero-dermia sp.) and cultivated in pure culture. The isolate JR0012 inhibited mycelial growth of several plant-pathogenic fungi. Mycelial growth of the four Pythium spp. tested was completely inhibited. Potato dextrose broth was found to be the medium favorable for large-scale production of antibiotics from the isolate. Anti-fungal substances produced in axenic culture were partially purified. This is the first report in Korea of lichen-forming fungus successfully isolated and which exhibited strong antifungal activity against plant-pathogenic fungi, especially the four Pythium spp..
본 연구는 기존의 선행 연구된 천연물 중 항균활성이 가장 좋은 황련, 오배자, 피톤치드(Phytoncide)가 단일추출물과 추출혼합물 일 때 M. furfur의 항균활성 차이에 대한 효과를 알아보고자 하였고, 선행연구에서 비듬균에 대한 천연한방추출물의 항균활성결과와 비교하였다. 추출혼합물에서 S. aureus는 3가지 혼합한 천연물질에서 항균활성이 내성하였으며 E. coli는 황련과의 혼합물에서 내성하였고 C. albicans는 오배자와 혼합물에서 내성이있는 것으로 나타나 각 균주에 따라 항균활성이 다른 것으로 나타났다. 반면 M. furfur는 단일추출물에서 전혀 항균활성이 없었고, 혼합물에서는 황련과 피톤치드 50% 혼합물에서 3.20mm의 직경으로 미약한 항균활성을 보였다. 이는 같은 진균인 C. albicans와 비교하여 볼 때 현저한 차이가 있었다. 그 이유는 M. furfur가 C. albicans에 비하여 세포벽이 지방친화성 성분을 지니고 있고 라멜라층, 원형질내막, 중간 다층구조로 되어있기 때문이라고 사료된다.
오래 저장해 둔 쇠비를 즙액에서 5종의 항균성 물질이 분리되었으며 이들 물질이 isobutyric acid, butyric acid, isovaleric acid, valeric acid 그리고 caproic acid 등과 C4-C6의 저급지방산으로 동정되었다. 각각의 지방산은 실내실험에서 다소간에 배나무 검은무늬병균(Alternaria alternata Japanese pear pathotype)의 포자발아나 균사신장을 다같이 저해하였다. 포자발아에 대한 각각 지방산의 항균력은 예외없이 균사신장에 대한 그것보다 컸다. 예컨데 200PPM 이하의 농도에서 균사생장을 완전히 저해하는 항균성 지방산은 하나도 없었지만 caproic acid의 50ppm과 valeric acid의 200ppm은 포자발아를 완전히 억제하였다. 또한 생물검정의 결과에서 이들 지방산의 탄소시술의 길이가 길수록 더욱 높은 항균력을 보여주었으므로 탄소사슬의 길이가 항균력과 관계가 있는 것으로 추정되었다.
An endospore-forming, rod-shaped bacterium was isolated from forest soil samples collected at the Taebaek mountain of Gangwon province, Korea, and taxonomically characterized by physiological, biochemical and phylogenetic methods. Its 16S rRNA sequences showed the maximum similarity of 97% with B. amyloliquefaciens. In addition, the isolate BCNU 2002 was determined to have the ability to produce enzymes such as amylase, protease, gelatinase and catalase. The in vitro antifungal activity of Bacillus sp. BCNU 2002 was also examined against human pathogenic fungi such as Aspergillus niger, Candida albicans, Epidermophyton floccosum, Saccharomyces cerevisiae, Trichophyton mentagrophytes and Trichophyton rubrum. A maximum production level of antifungal substances of Bacillus sp. BCNU 2002 was achieved under aerobic incubation at $28^{\circ}C$ for 7 days in LB broth. BCNU 2002 showed strong antifungal activities against T. mentagrophytes and T. rubrum with the range of percentage inhibition from 56.25 to 63.23%. It was also confirmed that ethylacetate extract of cultured broth showed a strong antifungal activity against A. niger, C. albicans, S. cerevisiae and T. rubrum by agar diffusion method. The peptide fraction also exhibited broad antifungal spectrum against various pathogenic fungi. The minimum inhibitory concentration values for active extracts ranged between 125 ${\mu}g$/mL and 1000 ${\mu}g$/mL.
황련(Coptis japonica)의 추출액을 공시하여 Phytophthora capsici, Fusarium oxysporum, Colletotrichum dematium, C. truncatum, Botrytis cinerea, Botryosphaeria dothidea과 Alternaria porri에 대해 항균 활성 검정, 몇가지 작물에 대한 병해 방제 효과를 조사하고 항균 활성 물질을 동정하였다. 황련 추출액은 P. capsici, F. oxysporum, C. dematium, B. cinerea, B. dothidea 및 A. porri에 대해서 항균력이 우수하였다. Methanol을 용매로 추출하여 분리된 물질과 berberine-Cl 표준품의 항균활성을 비교할 때, 황련추출액으로부터 분리된 물질은 표준품 berberine-Cl과 비슷하게 항균력을 나타내었다. 황련 추출액은 고추 역병(83.3%), 참깨 모잘록병 (92.0%) 및 파 검은무늬병(87.5%)에 대해서 방제효과가 인정되었다. 고추 잎과 과실, 파 잎 및 딸기 과실에는 약해가 나타나지 않았으나 고농도에서는 고추 및 참깨의 발아를 억제하거나 유근의 신장을 억제하는 것으로 나타났다. Methanol로 추출한 황련 추출액으로부터 황색 분말 4.24g/100g을 얻을 수 있었다. 이들 물질을 HPLC로 분석한 결과 항균성을 나타내는 물질은 berberine-Cl로 동정되었다.
Antifungal activity of Korean and Chinese lichen-forming fungi(LFF) was evaluated against plant pathogenic fungi of Botryosphaeria dothidea, Botrytis cinerea, Diaporthe actinidiae, Pestalotiopsis longiseta, Pythium sp., Rhizoctonia solani, and Sclerotium cepivorum. The LFF were isolated from Cladonia scabriuscula, Melanelia sp., Nephromopsis asahinae, Nephromopsis pallescens, Parmelia laevior, Pertusaria sp., Ramalina conduplicans, Ramalina sinensis, Ramalina sp., Umbilicaria proboscidea and Vulpicida sp. with discharged spore method. The isolates were deposited in the herbarium of Korean Lichen Research Institute(KoLRI) in Sunchon National University. The LFF of Melanelia sp., P. laevior, Pertusaria sp., R. conduplican and Ramalina sp. exhibited strong antifungal activity against all of the pathogenic fungi examined. Among them, LFF of P. laevior showed more than 90% of inhibition in fungal hyphae growth, compared with control. The results imply that LFF can be served as a promising bioresource to develop novel biofungicides. Mass cultivation of the LFF is now under progress in laboratory conditions for chemical identification of antifungal substances.
핀란드의 Lappeenranta 지역에 위치하는 Saimaa 호수가의 토양시료로부터 분리된 Bacillus sp. KMU-1011를 이용하여 많은 작물에 잿빛 곰팡이병을 유발하는 Botrytis cinerea KACC 40573에 대한 항진균 활성을 위한 배양조건을 조사하였다. 항진균 물질의 생산을 위한 기본배지로 nutrient broth를 사용하였으며 탄소원으로 1.0% glucose와 질소원으로 1.0% polypeptone를 첨가하였을 때 가장 높은 항진균 활성을 나타내었다. 배양조건으로는 $24^{\circ}C$, 180 rpm, 48시간 배양하였을 때 가장 높은 항진균 활성을 나타내었다. Ammonium sulfate를 $30{\sim}60%$ 첨가하여 항진균 물질을 회수하였을 때 가장 양호한 항진균 활성을 나타내었으며, chloroform을 이용하여 배양액 중에 존재하는 항진균 물질을 회수하여 다양한 작물병원성 곰팡이에 대한 spectrum을 조사한 결과, 잿빛곰팡이병, 고추 탄저병, 참외 탄저병, 수박등의 박과작물의 덩굴마름병, 토마토 시들음병, 글라디올러스 마른썩음병, 토마토 질병, 수박 덩굴쪼김병. 수박 질병, 사과나무 역병, 벼 잎집무늬마름병, 참외 줄기썩음병, 그리고 고추 균핵병에 대하여 양호한 항진균 활성을 나타내는 것으로 조사되었다.
본 연구는 식 의약용버섯으로 알려진 끈적긴뿌리버섯(Oudemansiella mucida) 배양액에서 추출한 물질이 항진균효과를 갖고 있는지 규명하기위한 실험을 수행하였다. 균사체의 배양액에서 항진균 물질을 생산하기 위한 전단계로 끈적긴뿌리버섯의 균사생장에 적합한 온도, pH, 탄소영양원, 질소영양원, 탄소/질소 비율 및 최적의 고체배지 등을 선발하기 위한 실험을 수행하였다. 균사생장에 최적인 온도와 pH는 각각 $25^{\circ}C$와 pH 5이었으며, 최적 탄소영양원과 질소영양원은 각각 maltose와 calcium nitrate였다. 균사생장을 위한 탄소/질소 영양원의 비율이 20 : 1이고 배지의 glucose 농도가 3%일 때, 균사생장이 가장 활발하였으며, 최적의 고체배지에는 Hennerberg 배지가 선정되었다. 균사생장의 실험 결과를 토대로 끈적긴뿌리버섯의 균사체를 배양한 후 그 배양여액을 이용하여 식물병원 곰팡이에 대한 항진균 효과를 규명하였다. 끈적긴뿌리버섯의 균사체 배양액에서 추출한 물질과 시판되고 있는 항진균 농약을 이용하여 Colletotrichum acutatum, Botrytis cinerea 및 Pyricularia oryzae 등 식물병원성 곰팡이를 대상으로 균사생장과 포자발아를 저해하는 효과를 조사한 결과 끈적긴뿌리버섯의 균사체에서 생산된 물질은 식물병원균의 균사생장을 저해하는 효과를 나타내었으나 공시된 항진균 농약에 비해 저해효과는 낮게 나타났다. 공시된 식물병원균 포자의 발아를 억제하는 효과는 folpet을 제외한 모든 공시 농약에 비해 낮게 나타났다. 따라서 끈적긴뿌리버섯의 균사체 배양액에서 추출한 물질에는 항균성을 나타내는 물질을 함유되어 있어서 새로운 항진균 제제로 개발할 수 있는 가능성이 있는 것으로 사료된다.
국내 분리 Myxococcus 속 점액세균 207 균주들 중 가장 높은 항진균 활성을 보인 M. stipitatus KYC4013 균주의 배양 추출물을 고분해능 LC-MS로 비교 분석한 결과 melithiazol 유도체로 추정되는 5개 항진균 물질과 phenalamide 유도체로 추정되는 3개 이차대사산물을 생산하고 있는 것으로 나타났다. Melithiazol 유도체 추정 물질들은 CYS 배지에서 가장 잘 생산되었으며, phenalamide 유도체 추정 물질들은 VY3 배지에서 가장 잘 생산되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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