본 실험은 Propolis ethanol 추출물과, chloroform, ethyl acetate, butanol 등 4가지 용매로 더 추출한 분획틀을 이용하여 DPPH radical 소거능 실험과 항진균활성을 알아보았고, 고체배지 및 액체배지에서 항진균활성을 측정하였다. 또한 luciferase mRNA를 이용한 in vitro translation으로 이들 추출물에 의한 단백질합성에의 영향을 검토하였다. 첫 번째로, 액체배지에서의 항진균 활성을 실험한 결과 Candida glabrata, Candida lusitaniae 그리고 Cryptococcos neoformans 등의 성장저해율이 chloroform 분획 존재하에서 각각 39%, 41%, 48% 이었으며 ethyl acetate 분획 존재하에서 각각 25%, 24%, 13%로 측정되었다. 이 결과는 ethyl acetate 분획에 비해 chloroform 분획에 진균 성장 저해물질이 가장 많이 존재함을 나타낸다. 두 번째로, 동일한 비율로 희석한 프로폴리스 분획물들과 합성 항산화제인 BHT의 수소공여능을 비교하였을 때 Ethanol 추출물의 수소공여능은 합성항산화제인 0.1% BHT의 수소공여능보다 높았으며, 분획들 중에서 chloroform 분획이 가장 수소공여능이 높았다. 세 번째로, luciferase mRNA를 이용한 in vitro, translation 실험에서는 Propoliis ethanol 추출물이 단백질합성을 저해하는 것으로 관찰되었다. Propolis 분획물들 중에서 chloroform 분획이 단백질 합성을 가장 많이 저해하였다. 이와 같은 결과는 chloroform 분획물이 다른 분획에 비해 수소공여능, 진균성장 저해율 및 단백질합성 저해활성이 가장 큰 것으로 보여지므로 이 분획물에 대한 생화학적인 연구가 요구된다.
Antifungal properties of methyl 2-benzimidazole carbamate(BMC) were investigated using 16 fungi. Cytotoxicity test of BMC revealed that the morphology of HeLa cells was considerably deformed even at the concentrations as low as 0.1 ppm. Minimum inhibitory concentration(MIC) values of BMC for 7 fungi among the 16 tested ones were lower than $1.95{\times}10^{-4}{\mu}g/ml$, while Aspergillus flavus showed an MIC value higher than 1.0 ${\mu}g/ml$. Tolerance induction against BMC was successful only for Paecilomyces farinosus LAR10, contrary to the expectation that tolerance would be induced for the fungi having high MIC values such as Aspergillus niger ATCC 9642 and A. flavus ATCC 9643. Spore germination of A. niger ATCC 9642 was suppressed by BMC. However the mycelial growth of the fungus once germinated was not retarded at all by BMC up to 8 MIC. Addition of lanosterol provided a remedy for the reduced germination rate of A. niger ATCC 9642 spores.
In order to estimate accurate originality of the important crude drugs, Gastrodia, Dendrobium, Bletilla and Cremastra spp. were investigated comparing their morphological, anatomical and physicochemical characteristics and antibacterial, antifungal activities. The results of the studies as follows: 1. In morphological and anatomical studies, Korean Gastrodia contained more mucilage duct and symbiotic fungi than imported Gastrodia. Korean Dendrobium contained starch grains but without starch grains in the imported Dendrobium from China enclosed with thicken silicified wall. The corm of Cremasta appendiculata contained raphides of bundles with mucilage while the bulbs of Tulipa edulis contained several various starch grains form. 2. In physiological and TLC analysis, crude drugs in Orchidaceae contained common constituents with fluorescence and much mucilage. 3. The EtOH extracts of Gastrodia, Dendrobium, Bletilla, Cremastra showed antibacterial activities against B. subtilis and E. coli (Dendrobium>Gastrodia>Bletilla>Cremastra). But, no antifungal activities against C. albicans, A. niger were observed.
Twenty seven out of ca. 5,000 actinomycete strains, which were isolated from soil collected throughout the country, showed antibicrobial effects against fungai, Rhizopus stronifer (ATCC 6227a), Rhizoctonia solani (KCCM 11271) and yeast, Candida albicans (ATCC 10231). From these antifungal microorganisms, we further selected seven strains which seemed to produce insecticidal substances with in vivo test, using silkworm, Bombyx mori and beet armyworm, Spodoptera exigua. Morphological and biochemical experiments revealed that three strains out of seven were Streptomyces. Further investigations on the physical and chemical properties of these antifungal and insecticidal substances are now in progress.
전보$^{(1,2)}$ 에서 기술한 경기도 소요산분근의 토양으로부터 분리된 강한 항진인성 물질 t-cinnamamide와 미지의 물질을 생성하는 streptomyces속 No.297은 균의 형태적, 생리적및 배양상의 특성을 조사하여 동정한 결과 Streptomyces griseorubiginosus var. soyoensis도 동정되었다.
3-Aryloxy methyl-4-(N-pyrazin-2'yl carboxamido)-5-mercapto-1,2,4-triazoles (3a1-a14) were prepared starting from potassium dithio carbazinates (2a1-a14). These triazoles were then employed in the synthesis of 3-aryloxy methyl-4-(N-pyrazin-2'yl carboxamido)-5-hydrazino-1,2,4-triazoles (4a1-a14). All the newly synthesized compounds were characterized by analytical, IR, NMR spectral studies. The compounds were screened for their antibacterial, antifungal, anti-inflammatory and analgesic properties. Most of the compounds have shown significant antifungal activity while few have shown excellent anti-inflammatory and analgesic activity. An attempt is made to study the structure activity relationship (SAR).
The present study aimed to assess the antifungal properties of the essential oil fraction from Ligusticum chuanxiong (Umbelliferae) and its components against five clinically important Aspergillus species. The essential oil fraction was extracted from the underground parts of the plant by steam distillation, and its main components, namely, Z-ligustilide, butylidene phthalide, and p-cresol were isolated by column chromatography. The antifungal activities of the essential oils were evaluated by the broth dilution method. Both the total essential oil fraction of L. chuanxiong and its components showed significant anti-Aspergillus activity against all five tested strains with MICs between 62.5 and 250 ${\mu}g$/ml, respectively. In a checkerboard microtiter assay, the combination of antibiotics, itraconazole with the essential oil fraction of L. chuanxiong or its main components exhibited synergistic or additive, and in some cases indifferent, effects against the tested Aspergillus species, resulting in FICIs (fractional inhibiting concentration indices) ranging from 0.12 to 2, while the combination of antibiotics, amphothericin B with L. chuanxiong essential oils mostly showed antagonistic effects.
쇠비름 즙액에서 얻은 5종의 저급지방산인 isobutyric(C-4), butyric(C-4), isovaleric(C-5), valeric (C-5), caproic(C-6) acids등이 그들 사이에 항균력의 차이는 있었지만 공시한 25종의 식물병원균의 포자발아나 균사생장에 대하여 폭넓은 항균스펙트럼을 보여주었다. 각각의 지방산의 항균력은 포자발아검정이나 균사신장검정에 있어서 공시균주에 따라 큰 차이를 보여주었다. 포자발아검정에 공시한 17종의 병원균과 균사신장검정에 공시한 16종의 병원균은 그들의 포자발아나 균사신장을 제각기 완전히 저해하는 각각의 지방산의 최저저해농도(MIC)에 따라 3군으로 나눌 수 있다. 이밖에도 이 연구의 결과에서 다음과 같은 가설을 제시할 수 있었다. 1) Caproic acid는 공시균의 균사신장보다 포자발아에 대하여 더욱 강한 독성을 보였으나 약간의 예외는 있었지만 그 밖의 지방산은 이와같은 독성을 보여주지 않았다. 2) 지방산의 사슬이 길수록 항균력도 강하다. 3) n-Butyric acid와 n-Valeric acid는 그들의 이성체보다 항균력이 강하다. 4) 각각의 지방산은 부생균의 포자발아나 균사신장에 대한 것보다 활물기생균이나 몇가지 조건적 기생균의 그것들에 대하여 더욱 강한 독성을 보여주었다.
숙성된 김치로부터 항진균 활성을 나타내는 균주 1종과 감수성을 나타내는 곰팡이 1종을 분리하였다. 분리된 균주는 형태학적, 생화학적 특성 조사와 165 rRNA 염기서열 결정을 통한 균주 동정 결과 Lactobacillus plantarum AF1으로 명명하였고, 감수성 곰팡이는 ITS-5.8S rRNA 염기서열 분석을 통하여 Epicoccum nigrum KF-1으로 명명하였다. Dual culture overlay assay를 통한 Lb. plantarum AF1의 항진균 활성 실험 결과 A. ochraceus, A fumigatus, C. gossypiicola 등 식품 부패 곰팡이 및 병원성 곰팡이에 강한 생육 저해 활성을 나타내었다. 또한 항균 물질에 의한 항미생물 활성 범위를 측정한 결과 항진균 활성 외에도 식중독균주를 포함한 그람 양성 및 음성 세균들에 강한 저해 활성을 나타내어 Lb. plantarum AF1은 넓은 항미생물 활성 범위를 가지는 것을 알 수 있었다. Lb. plantarum AF1의 생육에 따른 항진균 활성을 측정한 결과 항진균 활성은 배양 20시간부터 최대 활성(3,200 AU/ml)을 나타내어 120시간까지 활성이 감소되지 않고 유지되었다. 항진균 물질의 안정성 실험을 통하여 AF1 항진균 물질은 산성의 pH(pH $3.0{\sim}4.0$)와 열에 안정한 물질이며, 단백분해효소 처리에 영향을 받지 않으므로 비단백질성 물질이거나 단백분해효소의 영향을 받지않는 구조의 물질임을 추정하였다. AF1 항진균 물질의 분자량을 예측하기 위하여 Lb. plantarum AF1의 배양액을 3,000 Da 이상과 이하의 분획으로 나누어 항진균 활성을 측정한 결과 AF1 항진균 물질은 분자량 3,000 Da 미만의 물질임을 확인하였다. 본 실험에서 분리한 김치유산균인 Lb. plantarum AF1은 넓은 범위의 항진균 활성 및 항세균 활성을 나타내므로 강력한 천연 식품보존제 및 사료보존제로서 활용이 기대된다.
메주로부터 항곰팡이 활성을 보이는 균주 1종과 이에 감수성을 나타내는 곰팡이 3종을 분리하였다. 분리된 균주는 형태학적, 생화학적 특성 조사와 16S rRNA 염기서열 결정을 통한 균주 동정결과 Bacillus subtilis MJP1으로 명명하였고, 3종의 곰팡이는 ITS-5.85 rRNA염기서열 분석을 통하여 Aspergillus petrakii PF-1, A. ochraceus PF-2, 그리고 A. nidulans PF-3로 명명하였다 B. subtilis MJP1은 곰팡이 에 대한 강한 저해활성 뿐만 아니라 Candida 속 효모들과 그람 양성균에 대한 넓은 범위의 저해활성을 나타내었다. B. subtilis MJP1의 생육에 따른 항균 활성을 측정한 결과 항진균 활성은 배양 16시간부터 최대 활성(3,200 AU/ml)을 나타내어 균이 사멸기에 접어든 후에도 활성을 그대로 유지한 반면, 항세균 활성은 대수기 중반인 12시간부터 25시간까지 가장 높은 활성 (1,600 AU/ml)을 보이다가 72시간 이후에는 활성을 상실하였다. pH 안정성 실험에서 항진균 활성과 항세균 활성 모두 pH $6{\sim}10$ 구간에서 비교적 안정한 결과를 보였으나, 열처리 실험에서 항진균 활성은 영향을 받지 않은 반면, 항세균 활성은 $30^{\circ}C$ 이상의 온도에서는 불안정한 결과를 보였다. 각종 효소에 대한 안정성 실험에서 항진균 활성은 어떠한 효소에도 영향을 받지 않았으나, 항세균 활성은 단백분해효소 처리 후에 활성이 실활 됨으로써 항균 물질이 단백질성 물질임을 추정하였다. $C_{18}$ Sep-Pak column으로 부분 정제한 항균 물질이 항진균 활성과 항세균 활성을 나타내므로 소수성을 가지는 물질임을 알 수 있으며, Tricine-SDS-PAGE및 direct detection을 통하여 항진균 물질의 분자량은 약 2.4 kDa 정도이며, 항세균 물질의 분자량은 약 4.5 kDa으로_ 확인되었다. 따라서 B. subtilis MJP1은 항진균 활성과 항세균 활성을 가진 bacteriocin-like substances를 생산함을 알 수 있고 이와 같은 새로운 항미생물 물질은 천연 식품보존제 및 사료보존제 뿐만 아니라 항생제 대체 의약품으로도 활용이 기대되며, 이를 위하여 향후 이 물질들의 보다 정확한 구조 및 특성 규명 등의 연구가 필요하다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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