The edible part of cucurbita moschata Duch, which is commonly used as a Korean traditional medicine as well as a popular food source, was studied to isolate anti-complementary substance. Extracts of Cucurbita moschata Duch showed significant anti-complementary activities on the classical pathway of the complement system. Especially, the ripe Cucurbita moschata Duch had more activity than that of the complement system. Especially, the ripe Cucurbita moschata Duch had more activity than that of the green one in terms of the overall anti-complementary activity. Among the extracts of various organic solvents of the ripe Cucurbita moschata Duch, chloroform and ethyl-acetate extracts, which are non-polar solvent extracts, showed the strongest activities. These results suggest that the major difference in the solvent extraction for the anti-complementary substances depends on the change in the chemical composition such as the fatty acid with the degree of ripening.
The effect of various nutrients for the production of the anti-complementary polysaccha- ride by Flammulina velutipes, was examined and the partial purification of the polysaccharide was carried out. The culture conditions and medium compositions considerably influenced the anti-complementary activity of the polysaccharides. When a culture was carried out at 23$\circ$C and pH 5.5 for 6 days in the synthetic medium supplemented with galactose and NaNO$_{3}$, the production of the anti-complementary polysaccharide was maximized. The crude polysaccharide, FV-1 was isolated from the culture broth and partially purified into two fractions, FV-1-II and FV-1-III by gel filtration using Sephadex G-100. FV-1-II was mainly consisted of xylose, mannose, galactose and glucose, and rhamnose, mannose and galactose, for FV-1-III. Also, the anti-complementary activity of FV-1-III was reduced partially in the absence of the Ca ion. When crossed immunoelect- rophoresis using anti-human C3 serum was carried out after incubation of normal human serum with the FV-1-III in the Ca ion free condition, a cleavage of C3 precipitin line was observed. These results indicate that the mode of complement activation by polysaccharide from Flammulina velutipes is via not only the classical pathway but also the alternative pathway.
장수버섯 자실체로부터 분리된 강력한 항보체 활성 다당체인 FF-AP1을 정제하고 이것의 화학적 특성을 구명하기 위해 본 실험을 수행한 결과는 다음과 같다. ConA-Sepharose 4B affinity chromatography에 의해 FF-AP1은 $FF-AP1{\alpha}$와 $FF-AP1{\beta}$로 더 분리되었으며 이 중 항보체 활성의 주 유효 다당체인 $FF-AP1{\beta}$는 $10\;{\mu}g/ml$ 농도에서도 약 70%의 항보체 활성도를 나타내었다. $FF-AP1{\beta}$는 약 9.6%의 단백질을 함유한 산성다당체이며 glutamic acid와 aspartic acid의 함량이 상대적으로 다른 아미노산들에 비해 높았다. 이것의 분자량은 gel filtration법에 의해 15,000인 것으로 추정되었고 적외선 분광 분석에서 $890cm^{-1}$ 부근의 소peak를 탐지함으로써 ${\beta}$ glucosidic 결합의 존재를 확인하였다. Gas chromatography에 의한 구성당 조성 분석 결과, 주 구성당이 glucose, mannose, 및 galactose인 galacto-manno-glucan이었고, 소량의 rhamnose, xylose, fucose와 uronic acid도 탐지되었다.
A high molecular-weight water-soluble fraction(PO) obtained by the ethanol precipitation of 0.1 N NaOH extracts of the mushroom Pleurotus ostreatus showed 82% anti-complementary activity for complement consumption hemolysis. The PO consisted of 42% carbohydrate (w/w), 50% protein (w/w), and 3% uronic acid (w/w). Fifty-eight percent of the anti-complementary activity decreased by periodate oxidation and 22% by protease digestion, suggesting that the sugar and protein moieties are essential for this activity. Two polysaccharide fractions, PO-IIIa-1 and PO-IIIa-2, with anti-complementary activity were isolated from the PO using DEAE-Sepharose FF followed by Sephadex G-75 and Sepharose CL-6B gel permeation chromatographies. The PO-IIIa-2 was found by HPLC to be nearly homogeneous, with the molecular mass of 531 kDa, and showed 96% $ITCH_{50}$ (inhibition against the total complement hemolysis of deionized water as the control) at a concentration of 1 mg/ml. This fraction contained galactose, mannose, fucose, and glucose with molar ratios of 1.75:1:0.65 and 0.59, respectively. The majority of galactose and mannose units in the PO-IIIa-2 were composed of TGalp1 ->, ->6Galp1->, ->2,6Galp1->, and ->Manp1->. The PO-IIIa-1 (molecular mass of 2000 kDa), exhibiting higher activity than the PO-IIIa-2, was further purified into two fractions, unbound proteoglycan (PO-IIIa-1A) and bound glucomannan (PO-IIIa-lB), by affinity chromatography using ConA-Sepharose CL-4B. The anti-complementary activity of each affinity purified fraction decreased as compared to that of the native PO-IIIa-1 fraction, indicating that the formation of complex between both polysaccharide fractions was necessary for full anti-complementary activity.
Pleurotus sajor-caju를 각각 다른 영양원과 배양조건에 따라 배양했을 때 항보체 활성 다당 생산에 미치는 영향을 검토하였다. 그 결과 탄소원으로는 배양액에서는 lactose를 탄소원으로, 균사체로 부터의 열수 추출시에는 탄소원을 maltose로 사용했을 때 가장 높은 항보체 활성 다당을 얻을 수 있었다. 질소원으로는 ammonium phosphate(monobasic), amino acid로는 serine을 배양원으로 하였을 때 활성이 최대치를 나타내었다. 온도조건에서는 $25^{\circ}C$에서 최대활성을 나타내었으며 생산된 다당의 조성을 분석한 결과 Pleurotus sajor-caju의 배양액에서 분리한 다당은 peptidoglycan으로 나타났다.
The anti-complementary activity (immuno-stimulating activity) was tested for the exo-polymers (extra-cellular polymer) produced from submerged mycelial cultures of 21 types of higher fungi. Anti-complementary activity of the exo-polymer from Cordyceps militaris showed the highest (69.0%) followed by Pleurotus ostreatus (63.7%) and Trametes suaveolens (61.4%). The mycelial growth rate and biomass doubling time of C. militaris in a 5 I air-lift fermenter were 0.0255 $h^{-1}$ and 27.2 h, respectively. The yield of the exo-polymer produced from the culture broth of C. militaris was 2.95 mg of dry weight/ml of culture broth. Sugar and amino acid compositions of this exo-polymer were analyzed.
고추에서 추출한 수용성 조다당(CAP-0)에 높은 항보체 활성이 존재함을 발견하였으며, 활성은 pronase 처리에 의해 변하지 않았으나 periodate 산화에 의해 활성이 현저히 감소하였다. CAP-0는 cetyltrimethylammonium bromide 처리에 의해 4획분(CAP-1,2,3,4)으로 분리되었으며, CAP-1에서 가장 높은 황보체 활성이 나타났다. CAP-1은 음이온 교환 chromatography에 의해 활성과 수율이 높은 CAP-1-IV와 V로 분리되었으며, III은 수율은 높았으나 활성이 매우 낮았다. CAP-1-III와 IV는 gel 여과에 의해 고분자량 획분$(M.W.\;III_a\;70,000,\;IV_a\;195,000,\;V\;140,000)$과 저분자량 획분 $III_a,\;IV_b$으로 나뉘어졌다. 이 4획분과 V는 gel 여과와 전기영동상에서 순수하였으며 고분자량 획분에서 항보체 활성이 높았다.
It was observed that the hot-water extract of the bark of Kalopanax pictus N. had the highest anti-complementary activity among the 11 kinds of forest materials. Methanol-and ethanol-soluble portions had low anti-complementary activities, but crude polysaccharide. HKP-0 had a high activity of 80%. HKP-0 contained 54.8% of total sugar and 27.9% of protein. The neutral sugars of HKP-0 consisted of mainly arabinose, galactose and glucose. HKP-4 fraction obtained by cetavlon treatment of HKP-0 showed the highest anti-complementary activity of 90%. The activity was not changed by pronase digestion bu decreased greatly by periodate oxidation. HKP-4 consisted of mainly arabinose and glucose with molar ratio of 1.0 : 22.4, HKP-4-I, an unabsorbed fraction from HKP-4 on DEAE Sepharose CL-6B column showed higher yield and activity than those of absorbed fractions. HKP-4-I was homogeneous, and its molecular weight was about 25,000. HKP-4-I contained 84.0% of neutral sugar and consisted of arabinose and glucose with molar ratio of 1.0 : 11.2. The anti-complementary activity of HKP-4-I was not decreased by the treatment of polymyxin B, and the polysaccharide activated both classical and alternative pathway in complement system. Void volume fraction obtained from HKP-4-I hydrolyzed with ${\alpha}$-amylase on Sephadex G-25 column only had a high anti-complementary activity.
10종의 식용 버섯 자실체에 대한 항보체 활성 검색에서 가장 높은 활성을 나타낸 양송이버섯 자실체를 대상으로 항보체 활성물질의 추출조건을 조사하였다. 최적조건으로서 5% urea가 함유된 0.1 N NaOH 용액으로 $65^{\circ}C$에서 2시간동안 양송이버섯 자실체를 추출한 후 methanol 가용획분이 제거된 조다당 획분 AB-0를 얻었다. AB-0는 1 mg/ml에서 90% 이상의 높은 항보체활성을 나타내었으며 마우스에 이식된 sarcoma-180에 대하여 74%의 저지효과를 보였다. AB-0를 acetone 농도에 따른 침전 분획을 실시하여 AB-20, AB-40, AB-60, AB-80, AB-A의 5개의 획분을 얻었다. 이중 가장 높은 항보체활성과 수율을 나타낸 AB-20 획분은 탄수화물 39%, 단백질 46%를 함유하였으며, 구성당은 glucose, arabinose, xylose, galactose, mannose가 6.49 : 1.98 : 1.24 : 1.00 : 0.71의 비율로 존재하였고 구성아미노산은 isoleucine(12.60%), glutamic acid+glutamine(12.45%), valine(11.79%), alanine(11.46%), leucine(10.19%)와 aspartic acid, asparagine(10.56%) 등 이었다. Pronase 처리한 AB-20에서는 78.5%의 항보체활성을 나타내고 대조군에 비해 14.5% 감소하였으나, AB-20의 periodate 산화물에서는 활성이 42.6%로 50% 이상 크게 감소하였다. 따라서 양송이 버섯의 알칼리 추출물중 가장 강한 활성을 보인 AB-20의 주요 활성부위는 다당류이며 단백질도 일부 관여하는 것으로 생각되었다.
Sarcodon aspratus (Thelepholaceae), a native mushroom, is distributed in Korea and Japan, and has been widely used in traditional food and fork medicines. To confirm the biological activities of Sarcodon aspratus, the liver protecting activity, anti-clotting activity, and anti-complementary activity of the water extract, EtOH extract, and the water soluble proteoglycan part of S. aspratus were investigated. The EtOH, and water extract of S. aspratus decreased the GOT and GPT releases induced by $CCl_4$ in a dose-dependant manner. On the other hand, the water soluble proteoglycan part of S. aspratus showed weak inhibitory activity. In addition, the EtOH and water extract of S. aspratus prevented $CCl_4-induced$ hepatotoxicity, as described by a liver histopathologic study. To confirm the anti-clotting activity, the APTT and PT assay were carried out. As a result, only the crude proteoglycan part of S. aspratus showed the anti-coagulating activity, and this result might be due to the inhibition of intrinsic clotting system. Also, the crude proteoglycan part of S. aspratus showed the anti-complementary activity, and the $IC_{50}$ value was $50\;{\mu}l/ml$.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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