Alpha-viniferin was previously isolated as a cyclooxygenase (COX)-2 inhibitor from Carex humilis (Cyperaceae) and is an oligomeric stilbene compound with benzofuran (BF) moieties in its chemical structure. In the present study, a chemically synthetic BF compound, named as 3,3-dimethyl-2,3,4,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18-hexadecahydro-1H-benzo[b] cyclopentadeca[d]furan-1-one, was discovered to inhibit bacterial lipo polysaccharide (LPS)-induced prostaglandin $E_2$$(PGE_2)$ production in macrophages RAW 264.7. The BF compound exhibited a selectively preferred inhibitory effect on COX-2 activity over COX-1 activity. Furthermore, BF compound inhibited LPS-induced COX-2 expression at transcription level. As a down-regulatory mechanism of COX-2 expression shown by BF compound, suppression of nuclear factor $(NF)-{\kappa}B$ activation has been demonstrated. BF compound inhibited LPS-induced $NF-{\kappa}B$ transcriptional activity and nuclear translocation of $NF-{\kappa}B$ p65, in parallel, but did not affect LPS-induced degradation of inhibitory ${\kappa}B{\alpha}$ protein $(I{\kappa}B{\alpha})$. Taken together, anti-inflammatory effect of BF compound on $PGE_2$ production was ascribed by its down-regulatory action on LPS-induced COX-2 synthesis in addition to inhibitory action on enzyme activity of COX-2.
Glycyrrhizae Radix, the dried roots of Glycyrrhiza glabra or Glycyrrhiza uralensis Fischer(Legumino-sae), has been used as a medicine for treatment of imflammation, arthritis, respiratory ailment, skin diseases and liver problems. The purpose of this study was to examine the effect of 70% ethanol extract, 18-${\beta}$-glycyrrhetinic acid, glycyrol and carbenoxolone disodium from Glycyrrhizae Radix on gastritis and gastric cancer. Using these materials, we tested antibacterial activity against Helicobacter pylori, antigastritic activity for HCI-ethanol-induced gastric lesion and the pylorus ligated gastric secretion with rats, and cell viability in gastric cancer cell. 18-${\beta}$-glycyrrhetinic acid and carbenoxolone disodium decreased the volume of gastric secretion and acid output in pylorus ligated rats. Also, carbenoxolone disodium had a strong effect of antibacterial activity on H. pylori. In addition 18-${\beta}$-glycyrrhetinic acid and glycyrol reduced cell viability in human gastric cancer cells(AGS and SNU638 cell) in dose-dependent manner. The reduction of total acid output and gastric secretion as well as the anti-bacterial activity against H. pylori might account for the antigastritic effects of carbenoxolone disodium.
Objective: This study was performed to investigate the potential effect of wheat phytase on long-chain inorganic polyphosphate (polyP)-mediated interleukin 8 (IL-8) signaling in an intestinal epithelial cell line, HT-29 cells. Methods: Cell viability and the release of the pro-inflammatory cytokine IL-8 in HT-29 cells exposed to polyP1150 (average of 1,150 phosphate residues) treated with or without wheat phytase were measured by the EZ-CYTOX kit and the IL-8 ELISA kit, respectively. Also, the activation of cellular inflammatory factors NF-κB and MAPK (p38 and ERK 1/2) in HT-29 cells was investigated using ELISA kits. Results: PolyP1150 negatively affected the viability of HT-29 cells in a dose-dependent manner. However, 100 mM polyP1150 dephosphorylated by wheat phytase increased cell viability by 1.4-fold over that of the intact substrate. Moreover, the 24 h exposure of cells to enzyme-treated 50 mM polyP1150 reduced the secretion of IL-8 and the activation of NF-κB by 9% and 19%, respectively, compared to the intact substrate. PolyP1150 (25 and 50 mM) dephosphorylated by the enzyme induced the activation of p38 MAPK via phosphorylation to 2.3 and 1.4-fold, respectively, compared to intact substrate, even though it had little effect on the expression of ERK 1/2 via phosphorylation. Conclusion: Wheat phytase could attenuate polyP1150-induced IL-8 release in HT-29 cells through NF-κB, independent of MAP kinases p38 and ERK. Thus, wheat phytase may alleviate inflammatory responses including hypercytokinemia caused by bacterial polyP infection in animals. Therefore, wheat phytase has the potential as an anti-inflammatory therapeutic supplement in animal husbandry.
Citurs unshiu Markovich is a medicinal product of dried tangerine peel (DTP). It is effective on antioxidation, and getting fame as a medicine and functional food. By utilizing DTP as a feed additive, we aim to enhance the growth rate, innate immunity, and bacterial infection resistance to Tilapia. The DTP extract was added to the feed weight by 0.1, 0.5, 1, 5% and then fed to tilapia for 7 days to evaluate the innate immunity parameter, growth rate and anti-bacterial activity. Innate immunity parameter results showed that the ROI was significantly higher in the 5% group added at high concentration, while showing decrease or no differences in other experimental groups. In other parameters, all the experimental groups showed no significant difference or decreased compared to the control group. The challenge test showed a high survival rate of 71% in the 0.5% group and the lowest in the control group (36%). For the growth rate, the feed efficiency was improved in all groups except for the 0.1% group compared to the control group. In conclusion, DTP extract has bacterial resistant effect in while not affecting innate immune system of fish. Also, it has shown the potential as a possible feed additive as it has brought the improvement on feed efficiency ratio.
Objective: To generate recombinant Bacillus subtilis (B. subtilis) engineered for expression of porcine ${\beta}-defensin-2$ (pBD-2) and cecropin P1 (CP1) fusion antimicrobial peptide and investigate their anti-bacterial activity in vitro and their growth-promoting and disease resisting activity in vivo. Methods: The pBD-2 and CP1 fused gene was synthesized using the main codons of B. subtilis and inserted into plasmid pMK4 vector to construct their expression vector. The fusion peptide-expressing B. subtilis was constructed by transformation with the vector. The expressed fusion peptide was detected with Western blot. The antimicrobial activity of the expressed fusion peptide and the recovered pBD-2 and CP1 by enterokinase digestion in vitro was analyzed by the bacterial growth-inhibitory activity assay. To analyze the engineered B. subtilis on growth promotion and disease resistance, the weaned piglets were fed with basic diet supplemented with the recombinant B. subtilis. Then the piglets were challenged by enteropathogenic Escherichia coli (E. coli). The weight gain and diarrhea incidence of piglets were measured after challenge. Results: The recombinant B. subtilis engineered for expression of pBD-2/CP1 fusion peptide was successfully constructed using the main codons of the B. subtilis. Both expressed pBD-2/CP1 fusion peptide and their individual peptides recovered from parental fusion peptide by enterokinase digestion possessed the antimicrobial activities to a variety of the bacteria, including gram-negative bacteria (E. coli, Salmonella typhimurium, and Haemophilus parasuis) and grampositive bacteria (Staphylococcus aureus). Supplementing the engineered B. subtilis to the pig feed could significantly promote the piglet growth and reduced diarrhea incidence of the piglets. Conclusion: The generated B. subtilis strain can efficiently express pBD-2/CP1 fusion antimicrobial peptide, the recovered pBD-2 and CP1 peptides possess potent antimicrobial activities to a variety of bacterial species in vitro. Supplementation of the engineered B. subtilis in pig feed obviously promote piglet growth and resistance to the colibacillosis.
본 연구의 목적은 항 methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) 활성을 가지는 해양미생물을 분리, 동정하고 항MRSA 물질을 분리 정제하여 그 물질의 활성과 시너지 효과를 밝히는 것이다. 본 연구에서 분리한 해양미생물 중에서, YJ-1 분리 균주가 가장 강한 항MRSA 활성을 나타내었다. YJ-1 균주는 생화학적 특성과 16S rRNA 유전자 염기서열에 기초하여 분류 동정되었다. YJ-1 균주의 염기서열은 Pseudomonas stutzeri와 99.2%의 상동성을 나타내어, Pseudomonas sp. YJ-1이라 명명하였다. 이 균주의 최적 성장조건은 $25^{\circ}C$와 초기 pH 농도 7.0이었다. 항MRSA 물질들을 분리정제하기 위하여 YJ-1 균주를 PPES-II 배지에 배양하였으며, 배양 상등액을 ethyl acetate, hexane과 80% MeOH로 순차적으로 추출하였다. 활성을 보인 80% MeOH 분획을 $C_{18}$ ODS 칼럼 크로마토그래피, silica gel 크로마토그래피와 역상 HPLC법으로 순차적으로 정제하여 항MRSA 활성을 가지는 3개의 순수물질 MR1, MR2 및 MR3를 얻었다. $250{\mu}g\;mL^{-1}$ 농도의 MR1 물질을 MRSA 세포에 접종했을 때, MRSA 세포의 95%가 48시간 이내에 사멸하였다. 활성을 vancomycin 및 ampicillin과 비교해 보아도, MR1 물질은 보다 우수한 항MRSA 활성을 나타내었다. 또한 항MRSA 활성은 투여량과 시간에 비례하여 증가하였다. 더욱이 MR1 물질과 vancomycin을 조합하여 시너지 효과를 보았을 때, MR1 물질을 단독으로 투여했을 때보다 신속한 MRSA 세포의 감소를 관찰할 수 있었다. 이상의 결과를 종합해보면, MRSA 감염에 있어서 Pseudomonas sp. YJ-1과 이것이 생산하는 항MRSA 물질은 천연 항균제로서 기여할 수 있으리라 판단된다.
본 연구에서 장류 및 젓갈 유래 균체를 각각 sonication, $100^{\circ}C$에서 30 min, $125^{\circ}C$에서 15 min의 조건으로 추출하여 HMC-1에 처리하였을 때, 이 추출방법에 따른 HMC-1매개 염증반응 억제효과를 조사하였다. 추출방법을 달리하여 추출한 장류 및 젓갈 유래 균체 J80, G147이 HMC-1생존율에 미치는 영향은 대조구 B (Not treated)와 비교하였을 때 86~96%로 유의적 차이를 보이지 않아 장류 및 젓갈 유래 균체에 의한 세포 독성은 나타나지 않았다. 장류 및 젓갈 유래 균체의 모든 전처리구에서 histamine 유리 억제효과를 나타내었으며 특히, $100^{\circ}C$에서 30 min 동안 가열하였을 때 histamine 억제율이 J80에서 28.86%, G147에서 41.14%으로 가장 높게 나타냈다. IL-8 분비량은 J80, G147의 모든 전처리구에서 IL-8 분비억제효과가 나타났으며, J80의 경우 $100^{\circ}C$, 30 min에서 처리한 구에서 분비량이 0.78 ng/ml로 대조구 B (Not treated)에 비하여 약 28.45%의 분비억제효과로 가장 높게 나타내었다. G147의 경우 $125^{\circ}C$, 15 min에서 처리한 구에서 분비량이 0.73 ng/ml로 약 36.52%의 분비억제효과로 가장 높게 나타내었다. IL-6 분비량을 측정한 결과 J80, G147의 모든 실험구에서 IL-6 분비억제효과가 나타났으며, J80에서는 $100^{\circ}C$, 30 min한 D구의 분비량이 0.40 ng/ml으로 대조구 B (Not treated)에 비하여 약 38.46%의 분비억제효과로 가장 높았으며, G147 역시 $100^{\circ}C$, 30 min 동안 처리한 D구의 분비량이 0.27 ng/ml으로 대조구 B (Not treated)에 비하여 56.45%의 분비억제효과로 가장 높게 나타냈다. TNF-${\alpha}$ 분비량 역시 IL-6와 마찬가지로 J80, G147에서 대조구 B보다 낮은 분비량으로 TNF-${\alpha}$ 분비 억제효과가 나타났으며 J80의 경우 $100^{\circ}C$, 30 min 처리한 D의 TNF-${\alpha}$ 분비량이 0.052 ng/ml으로 66.67%의 분비억제효과로 가장 높았으며, G147의 경우 sonication을 처리한 C구의 TNF-${\alpha}$ 분비량이 0.086 ng/ml으로 41.1%의 분비억제효과로 다른 구에 비해 높은 억제효과를 나타내었다. 위의 결과를 통해서 장류 및 젓갈 유래 균체의 3가지 전처리 방법 중 $100^{\circ}C$, 30 min 처리 시 염증 반응 억제 효과가 가장 높을 것으로 예상된다. 결과를 미루어보아 장류를 섭취하는 대표적인 방법인 가열하여 찌개로 조리과정 중 장류 및 젓갈 속의 균체가 열에 가열되면서 염증억제효과 높일 수 있는 가장 좋은 조리 방법으로 사료되며, 이는 대중들이 가장 가깝게 염증반응 억제효과를 볼 수 있는 식품일 것이다. 또한 염장처리과정만을 거친 젓갈을 섭취하는 것보다 열처리과정을 거친 젓갈을 섭취할 경우 염증억제효과를 더 높일 수 있을 것으로 예상된다.
Purpose: To examine the antibacterial effectiveness of silver nanoparticles (SNP) mixed with commercial orthodontic adhesives. Materials and Methods: SNP was prepared by dissolving silver perchlorate in an organic solvent and reducing it with ultraviolet radiation. SNP was then mixed with four commercial orthodontic adhesives (Light Bond, Blugloo, Transbond XT, and Fuji Ortho LC) (0.05 wt %), which were then formed into disc-shape specimens ($8.0mm{\times}3.0mm$). Commercial orthodontic adhesives containing no SNP were used as the control groups. Specimens of the four experimental and four control groups were incubated with streptococcus mutans and the medium turbidity was assessed at 3, 6, 9, 12, and 24 hours after incubation. The agar diffusion test was also performed to examine the growth inhibition zone of these groups. The data were statistically analyzed using a Wilcoxon rank sum test and t-test with a Bonferroni's correction (P<0.05). Result: The SNP containing groups had a superior antibacterial effect compared to the control groups. In the agar diffusion test, the control groups without SNP did not produce an inhibition zone, whereas the SNP containing groups showed inhibition zone of 10~13 mm. Conclusion: The incorporation of SNP into orthodontic adhesives can inhibit cariogenic bacterial growth.
Objective : Coptis rhizoma is traditional herb in Korean medicine, and Pelargonium sidoides extract has been used for relief of acute bronchitis in Western medicine. The present study examined the antibacterial effect of fusion formulation of Coptis rhizoma extract and Pelargonium sidoides extract against bronchial diseases bacteria. Methods : Test sample, fusion formulation of Korean and Western medicine, was prepared by mixing Coptis rhizoma extract and Pelargonium sidoides extract at a ratio of 1:2 (w/w). Antimicrobial properties of test sample were determined by agar diffusion assay and minimum inhibitory concentration (MIC) against bronchus diseases bacteria. Results : In agar diffusion assay, the highest amount of test sample (4 mg/disk) exhibited antibacterial activity against all microorganisms tested. Test sample showed the high activity for S. aureus (19.5 mm), C. diptheriae (16.5 mm), A. fumigatus (19.3 mm), F. nucleatum (22.7 mm) and Mycobactrium sp. (17.3 mm), whereas it showed a low activity for K. pneumonia (9.7 mm). The MIC value was determined as $250{\mu}g/m{\ell}$ against C. diptheriae. Test sample showed better growth inhibitory effects against S. aureus and A. fumigatus with the MIC valus of $125{\mu}g/m{\ell}$. Conclusion : These results suggest the possibility of application to chronic respiratory diseases of fusion formulation of Korean and Western medicine, which was prepared with Coptis rhizoma extract and Pelargonium sidoides extract.
Papenfussiella kuromo (PK) is a marine plant and an abundant ecological resource for the future; it is found in almost 80% of the terrestrial biosphere. The aim of this study was to investigate the antibacterial activity of PK against methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA), multidrug-resistant pathogen. The minimum inhibitory concentrations (MICs) of PK hexane fraction (PKH) against 7 strains of MRSA ranged from 1.0 to 2.0 mg/mL. In the checkerboard dilution method, a synergistic effect of the PKH and the antibiotics (oxacillin and norfloxacin) was seen. PKH markedly reduced the MIC of each of the 4 antibiotics against MRSA. The time-kill assay showed that the synergistic activity of PKH and an antibiotic reduced the bacterial counts below the lowest detectable limit after 24 h. These findings suggest that PKH has antibacterial activity, and may be important baseline data in future extensive studies of living marine resources as a source of compounds active against MRSA.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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