충치발생 원인균인 Streptococcus mutans에 대한 각종 천연물질의 항균효과와 GTase 저해활성을 조사한 결과, 미숙사과, 황련, 우롱차, 감초 등에서 항충치 효과를 나타내었으며, 그 중에서 감초를 열수추출한 다음 생성된 박을 75% 에탄올로 추출하여 얻어진 감초박 추출물이 가장 탁월한 생육저해 효과가 관찰되었다. 또한 이들 소재를 중심으로 충치균이 불용성 glucan을 생산하는 GTase 활성 저하에 미치는 영향을 살펴본 결과, 녹차, 오배자, 미숙사과 polyphenol 추출물 및 감초박 추출물이 GTase의 활성을 저해시키는 효과를 보였으며 특히 항충치 효과에서와 같이 감초박을 75% 에탄올로 추출한 감초박 추출물이 가장 뛰어난 GTase 활성억제 효과를 나타내었다. 감초박을 75% 이상의 에탄올로 추출한 추출물보다 chloroform으로 추출한 추출물에서 더욱 탁월한 항충치균 효과가 관찰되었다. 감초박을 75% 에탄올로 추출한 후, 각종 유기용매로 2차 분획하였을 때, chloroform으로 추출한 분획에서 가장 강한 항충치균 활성이 나타났다. 얻어진 추출물을 silicagel column상에서 4개의 분획으로 재차 분리하였고, 첫번째 분획에서 가장 강한 항충치균 활성을 나타내는 분획을 얻었으며, 이들 분획을 HPLC로 분석했을 때 항충치균에 대한 활성은 주로 소수성이 강한 물질에 의한 것이라고 추정되어졌다.
생약제제 중에서 귤피는 항산화작용, 순환기계 질병의 예방, 항염증, 항알레르기, 항균, 항바이러스, 지질 저하 작용, 면역 증강작용, 모세혈관 강화작용 등이 있는 것으로 보고되고 있다. 본 연구에서는 귤피 추출물이 치아우식 원인균으로 알려진 S. mutans에 미치는 항균효과와 GTase활성에 미치는 영향에 대해 알아보고자 하였다. 추출물을 5, 10, 20 mg/ml의 농도로 배지에 첨가한 후 S. mutans의 성장억제효과를 확인한 결과, 농도가 높을수록 colony의 수가 현저히 줄어드는 것을 관찰 할 수 있었다. 8 시간 후 측정하였을때 5 mg/ml에서 92%, 10 mg/ml에서 95%, 20 mg/ml 에서 99%의 높은 성장억제율을 나타내었다. 또한 추출물의 GTase 활성 저해율을 측정한 결과, 추출물의 농도가 높아질수록 저해율이 급격히 증가하는 것으로 나타났으며, 5 mg/ml에서는 42%의 강한 활성 저해 효과를 보였다.
Cacao bean외피로부터 분리된 물질은 anisaldehyde-$H_2SO_4$ 및 $FeCl_3$에 각각 갈색 및 청색반응을 하였고 TLC상에서 monomer 및 dimer의 fIavan-3-ol 물질로 확인되었다. 물질의 구조를 NMR로 검정한 결과 compound I 과 II 는 각각 (-)-epicatechin과 epicatechin-(4${\alpha}$$\rightarrow$8)-epicatechin의 결합 화합물인 procyanidin B-2이었다. 분리된 두 화합물은 GTase에 대해 높은 저해활성이 있었고 특히 procyanidin B-2는 1.0mM에서 완전히 저해시켰다. 이것은 f1avan-3-ol 구조내에 OH가의 증가에 따라 GTase 저해활성도 높아지는 것으로 추정되었다.
충치 예방 물질의 탐색 연구 일환으로, Cacao bean husk(CBH) 추출물로부터 얻어진, gluco-syltransferase(Gtase) 저해 활성 분획을 분리하였 다. 이를 다시 MCI-gel CHP-20와 Sephadex LH 20의 column chromatography법으로 분리, 정제하였으며, 이로부터 얻어진 2개의 GTase 활성 저해 물질에 대한 구조 해석을 행하였다. 분리.정제된 2개의 GTase 저해 활성 물질은 anisaldehyde-$H_2SO_4$ 및 FeCb에서 각각 갈색 및 청색 반응을 하며, 또 TLC상에서 dimer의 flavan-3-ol $R_r$값을 나타내는 단일 물질이었다. NMR(PMR, C CMR) 빛 mass spectrum으로 두 정제 분획에 대 한 화학 구조를 분석한 결과, G Tase 저해능을 나타 내는 단물질은 (-)-epicatechin-($\beta\rightarrow8$)-catechin 으로 결합된 procyanidin B-1 ($C_{30}H_{26}O_{12}$) 및 cate chin의 2량체인 procyanidin B一3($C_{30}H_{26}O_{12}$)이었다.
Dental caries is one of the most common oral diseases in the world. Glucosyltransferase (Gtase) of Streptococcus mutans (S. mutans) plays an important role in the develo pment of dental caries. For the purpose to develop anti- caries, we examined the effect of metabolites isolated from Streptomyces sp. M-20 on Gtase and the growth of S. mutans. Streptomyces sp. M-20 isolated from Mongolian soil showed 95~96% sequence homology with that of Streptomyces lin- colnensis. The metabolites of Streptomyces sp. M-20 were partially purified by extraction with ethyl acetate, silica gel column chromatography and preparative TLC. Partially purified metabolite, red colored component (MR-20) in ethyl acetate fraction showed potent antibacterial activitiy against S. mutans and inhibitory activity against Gtase purified from S. mutans, while another isolated yellow component (MY-20) showed no activity against S. mutans. The inhibitory activity of MR-20 against Gtase was confirmed by activity staining on SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The concentration of MR-20 for 50% inhibition $(IC_{50})$ against Gtase activity was $60{\mu}g/ml$. These results suggest that MR-20 can be developed for antibacterial agent and anticaries.
Yam, Prunella was stepwise extracted with hexane, chloroform, ethyl acetate, butanol, and water. Anti-microbial activity of each extract was investigated. Hexane extract was tested for anti-microbial effect on Streptocaccus mutans, one of causative factor of dental caries. Methanol extracts of 7 plants were investigated to anti-microbial effects on S. mutans KCTC 5316, P. gingivalis KCTC 5352, S. aureus KCTC 1927 by means of agar diffusion method. Methanol extract of Yam and Prunella revealed anti-microbial activity against S. mutans, P. gingivalis, and S. aureus. Also, hexane fraction of Yam revealed anti-microbial activity against S. mutans. In sequence of hexane, chloroform, ethylacetate, butanol fraction by Prunelia acted as potent anti-microbial agent on P. gingivalis. The measured MIC of hexane fraction of Yam and Prunella on S. mutans KCTC 5316 strain was 0.25 mg/ml and 0.5 mg/ml and the MIC of hexane fraction of Prunella on S. aureus was 0.5 mg/ml. The hexane fraction of Yam and Prunella suppressed viable ceil counts(VCC) of S. mutans, especially after 24 hrs. The Prunella hexane fraction suppressed VCC of S. aureus, after 12 and 24 hrs. Tested concentrations were 0.1, 0.25 and 0.5 mg/ml. the results were compared with control (0 mg/ml). The pH of S. mutans media and GTase activity were determined to evaluate the anticariogenic activity of Yam, Prunella hexane fraction. The pH were increased from 5.6 to 7.0-7.2 in concentration of 2.0 mg/ml. Yam hexane extraction revealed 35% inhibition to GTase activity and Punella inhibited 25% of GTase. These results suggest that the hexane extracts of Yam and prunella have Antibacterial activities against S. mutans, P. gingivalis, S. aureus and have preventive effect on dental caries.
버섯류는 기호식품으로서의 성격과 기능성식품으로서의 성격을 동시에 갖는 매우 독특한 식품소재로서 본 연구에서는 국내에서 자생하는 8종류의 버섯에서 항충치 활성성분을 조사해 보았으며, 더불어 높은 항충치활성을 가진 추출물을 얻고자 다양한 용매를 이용, 최적의 용매조성을 탐색해 보았다. Chloroform, methanol, acetone, ethyl acetate 및 증류수를 용매로 사용하였으며, 이들 추출물의 S. mutans에 대한 항균 효과와 glucosyltransferase (GTase) 활성 억제효과를 살펴보았다. 표고버섯, 영지버섯 및 만가닥버섯 추출물이 상대적으로 높은 항충치활성을 나타내었으며, 추출용매에 의한 항균효과를 조사해본 결과, chloroform, methanol, ethyl acetate로 추출한 버섯 추출물에서 상대적으로 높은 항균효과를 보여주었다. 8종의 버섯 중 항균효과가 뛰어나고 GTase 활성 억제효과가 높은 만가닥(Lyopyllum ulmarium) 버섯으로부터 chloroform, methanol 및 ethyl acetate 추출물을 얻어 항충치활성을 조사하였다. S. mutans에 대한 만가닥 버섯의 최대 항균효과를 얻기 위해 심플렉스 중심 합성 계획법(simplex centroid design)을 이용하여 최적의 추출용매조성을 살펴본 결과, chloroform, methanol 및 ethyl acetate 3가지 용매를 모두 동일한 비율(1:1:1)로 혼합하여 추출한 추출물에서 가장 높은 항균효과가 나타났다. 만가닥버섯추출물은 항충치 소재로서 중요한 역할을 할 수 있을 것으로 기대되며, 버섯추출물의 항충치 효과는 추출용매에 의해 영향을 받으므로 버섯에서 항충치활성물질을 얻고자 할 때에는 추출용매선택이 매우 중요할 것으로 사료된다.
In the course of surveying the anti-plaque agents for dental caries prevention, the extract of Korean green tea leaves (KGTL) was tested for inhibitory activity against Streptococcus mutans adhering to glass surfaces in the presence of crude glucosyltransferase (GTase). The extracts of KGTL showed a positive inhibitory activity against GTase. The active compound was purified through Sephadex LH-20 and MCI gel CHP-20P columns. A positive reaction was shown in the anisaldehyde-$H_2SO_4$ test, which confirmed the condensed tannin. The inhibitory compound was identified as 3-galloylprocyanidin $B_3$ through IR, negative FAB-mass, and $^{1}H$-NMR spectroscopic analyses. Acetone extract and 3- galloylprocyanidin $B_3$ of KGTL showed inhibitory effect against GTase. The percent of inhibition was determinated to be 71.84% (P<0.01) with 10 mM 3-galloylprocyanidin B3. The 3-galloylprocyanidin $B_3$, which possessed a galloyl, showed a higher inhibitory activity against glucosyltransferase than monomeric (+)-catechin and procyanidine $B_3$ which had no galloyl group.
The antimicrobial and glucosyltransferase(GTase) inhibition activity were searched for 30 species of various folk drugs and by products of food industry. Among them, two species, gallnut and red grape husk water extracts, were selected for the powerful antimicrobial and GTase inhibition activity. The polyphenol fractions of gallnut and red grape husk were showed very greater antimicrobial activity on both Gram(+) and (-), B. subtilis and E. coli. The minimum antimicrobial activity of gallnut polyphenol fraction were 1.0mg for B. subtilis and 3,0mg for E. coli. Red grape husk was 2.0mg for B. subtilis and 3.0mg for E coli. The polyphenol fractions of gall nut and red grape husk were showed powerful GTase inhibition activity. The concentrations of these fractions for 80% inhibition of GTase activity were 1.08$\times$10$\^$-3/mg/㎖ and 1.08$\times$10$\^$-2/mg/㎖, respectively. The most abundant compound in these fraction seems to be polyphenol derivatives. From these results, we think that the gallnut and the red grape husk polyphenol fraction had more antimicrobial and anti-plaque activities than artificial synthetic preservatives as an economic point of view.
Several medicinal plants are ethnomedically used in Korea as agents for treating infection, anti-inflammation, and pain relief. However, beyond typical inhibitory effects on cell growth, little is known about the potential anti-biofilm activity of these herbs, which may help to prevent cavities and maintain good oral health. This study aimed to investigate the antimicrobial and anti-biofilm activities of the methanol extracts of 37 Korean medicinal plants against dental pathogens Streptococcus mutans and Candida albicans, which synergize their virulence so as to induce the formation of plaque biofilms in the oral cavity. The antimicrobial activities were investigated by broth dilution and disk diffusion assay. The anti-biofilm and antioxidant activities were evaluated based on the inhibitory effect against glucosyltransferase (GTase) and the DPPH assay, respectively. Among 37 herbs, eight plant extracts presented growth and biofilm inhibitory activities against both etiologic bacteria. Among them, the methanol extracts (1.0 mg/ml) from Camellia japonica and Thuja orientalis significantly inhibited the growth of both bacteria by over 76% and over 83% in liquid media, respectively. Minimum inhibitory concentration (MIC) values of these methanol extracts were determined to be 0.5 mg/ml using a disk diffusion assay on solid agar media. Biofilm formation was inhibited by more than 92.4% and 98.0%, respectively, using the same concentration of each extract. The present results demonstrate that the medicinal plants C. japonica and T. orientalis are potentially useful as antimicrobial and anti-biofilm agents in preventing dental diseases.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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