Two antifungal bacteria were selected from forest soils during the screening of microorganisms antagonistic to Cylindrocarpon destructans, a cause of ginseng root rot. The antifungal bacteria were identified as Bacillus subtilis (I4) and B. amyloliquefaciens (yD16) based on physiological and cultural characteristics, the Biolog program, and 16S rRNA gene sequencing analyses. Antagonistic activity of both bacterial isolates to C. destructans increased with increasing temperature. More rapid starch hydrolytic activity of the bacteria was seen on starch agar at higher temperatures than at lower temperatures, and in the higher density inoculum treatment than in the lower density inoculum treatment. The bacterial isolates failed to colonize ginseng root the root tissues inoculated with the bacteria alone at an inoculum density of $1{\times}10^6$ cfu/ml, but succeeded in colonizing the root tissues co-inoculated with the bacteria and C. destructans. Scanning electron microscopy showed that the pathogen was damaged by the low-density inoculum treatment with the bacterial isolates as much as by the high-density inoculum treatment. Both bacterial isolates were more effective in reducing root rot when they were treated at a concentration of $1{\times}10^6$ cfu/ml than at $1{\times}10^8$ cfu/ml. Also, only the former treatment induced prominent wound periderm formation, related to structural defense against pathogen infection. The results suggest that the bacterial antagonists may have high potential as biocontrol agents against ginseng root rot at relatively low-inoculum concentrations.
Kim, Yong-Gyun;Kim, Keun-Seob;Seo, Ji-Ae;Shrestha, Sony;Kim, Hosanna-H.;Nalini, Madanagopal;Yi, Young-Keun
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.19
no.3
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pp.314-322
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2009
Four different bacterial colonies were isolated from an old stock of an entomopathogenic nematode, Steinernema monticolum. They all showed entomopathogenicity to final instar larvae of beet armyworm, Spodoptera exigua, by hemocoelic injection. However, they varied in colony form, susceptibility to antibiotics, and postmortem change of the infected host insects. Biolog microbial identification and 16S rDNA sequence analyses indicate that these are four different species classified into different bacterial genera. Owing to high entomopathogenicity and a cadaver color of infected insect host, Serratia sp. was selected as a main symbiotic bacterial species and analyzed for its pathogenicity. Although no virulence of Serratia sp. was detected at oral administration, the bacteria gave significant synergistic pathogenicity to fifth instar S. exigua when it was treated along with a spore-forming entomopathogenic bacterium, Bacillus thuringiensis. The synergistic effect was explained by an immunosuppressive effect of Serratia sp. by its high cytotoxic effect on hemocytes of S. exigua, because Serratia sp. caused septicemia of S. exigua when the bacterial cells were injected into S. exigua hemocoel. The cytotoxic factor(s) was present in the culture medium because the sterilized culture broth possessed high potency in the cytotoxicity, which was specific to granular cells and plasmatocytes, two main immune-associated hemocytes in insects.
The brown planthopper (BPH), Nilaparuata lugens, is the major pest 01 nce in Asla. Cument control tactics rely pnmalily on chemical ~nsecticides and resistant nce varieties In Korea, the most important biolog~cal conb-ol agent appears to be the naturally-occuning, mermlthid nematode, Agarnermrs unka. Although parasitism of BPH is highly variable from place to place and from year to year. the rnermithid is a promising biological control agent because it reduces the fecundity of the host and ultimately causes its death. The memithid has only one generation per year compared to the three to four generations of BPH, but the mermithid lemales stagger their egg production so that many individuals in all BPH generations are parastized. Augmentation of this rnermithld into BPH populations is only psslble on a limited scale because it is an obligate parasite and mass production technology has yet to be developed. Conservation of naturally-occumng populations through cultural techniques and the use of compatible resistant rice varieties and chemical insecticides may lead to an effective integrated pest management program for BPH.
This study was performed to know whether there is any change of physiological activity in DLMJ which is inoculated by lactic acid bacteria. Lactic acid bacteria were isolated from Dolsan leaf mustard Kimchi (DLMK) at $20^{\circ}C$. In the optimum ripening period, the population of Leuconostoc and Lactobacilli in the DLMK were found to be high. The Leuconostoc, Lactobacilli and Lactococci strains were identified as Leuconostoc mesenteroides, Leuconostoc gelidum, Weissella confusa, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus raffinolactis, Lactococcus lactis and Weissella confusa using the Biolog system. The most predominant strain which was isolated from DLMK was Weissella confusa. As the results of the phylogenetic analysis using 16s rDNA sequence, the Weissella confusa turned out to be Weissella kimchii, with 99.0% similarity. To investigated the change of physiological activity in DLMJ by lactic acid bacteria, 7 predominant strains inoculated to DLMJ (Dolsan Leaf Mustard Juice). The cytotoxicity was found to be under $19.55\%$ all cases. Also, the antioxidative activity of the DLMJ treated with lactic acid bacteria was very low, which might have been due to the reduced antioxidative phytochemicals during the preparation of the sterile sample. The ACE inhibiting activity of DLMJ by inoculation with Weissella kimchii was shown to be the highest ($94.0\%$). This could be that the degradation of sulfur containing materials in DLMJ by Weissella kimchii gave rise to ACE inhibiting activity.
The effect of water activity ($a_w,\;0.9{\sim}0.995$) and temperature ($18{\sim}30^{\circ}$C) on in vitro growth and interactions between ochratoxin-producing Aspergillus ochraceus and six other fungi (Alternaria alternata, Aspergillus candidus, A. flavus, A. niger, Eurotium amstelodami, E. rubrum) isolated from maize grain were investigated. A. ochraceus and each six other species were paired and their interactions given a numerical score to obtain an index of dominance ($I_D$) for each species. Generally A. ochraceus was very competitive and dominant against other fungi. It was, however, dominanted by Alternaria alternata and A. niger at high $a_w\;(0.995\;a_w)$, and mutually antagonistic when paired with E. amstelodami and E. rubrum at low $a_w\;(0.9\;a_w)$. The growth rates of each species were also calculated under the same range of environmental conditions. They were markedly influenced by aw and temperature. At high temperature ($30^{\circ}C$), A. ochraceus grew most rapidly under slightly drier conditions ($0.95\;a_w$), while A. alternata, A. flavus and A. niger did at high water availability level ($0.995\;a_w$). At $18^{\circ}C\;and\;25^{\circ}C$, and high $a_w$ level ($0.995\;a_w$), A. alternata grew fastest, while A. candidus, E. amstelodami and E. rubrum grew very slowly. Using Biolog plates the effect of $a_w$ and temperature on utilization patterns of carbon sources in maize was evaluated. The niche overlap index (NOI) relative to A. ochraceus was determined and compared with that of each interacting species. Under high water available condition ($0.995\;a_w$). the NOI of A. ochraceus was often >0.9, indicative of the coexistence with other interacting species. However, against E. amstelodami and E. rubrum at $18^{\circ}C$, the species had NOI <0.8, indicative of occupation of different niches. At low $a_w\;(0.95\;a_w)$, NOI for A. ochraceus was <0.8 when paired with A. alternata and A. niger also suggested the occupation of different niches.
In March of 2003, tumors (galls) were observed on ginseng seedling roots in ginseng seedbeds at Yeoju, Gyeonggi province, Korea. Symptoms were spherical or galls with about 0.5-1.0cm in diameter formed on the upper through middle parts of the primary roots. Bacterial isolates obtained from the root galls were Gram-negative, rod-shaped with peritrichous flagella, aerobic, not forming yellow or orange colonies on nutrient glucose agar, yeast extract-dextrose $CaCO_3$ agar and nutrient-broth yeast extract agar, non-fluorescent on King's B agar, and non-spore forming, which were identical to characteristics of the genus Agrobacterium. They were identified as Agrobacterium tumefaciens with 0.732-0.993 similarities in 100% probability by the Biolog analyses. The 16S rRNA gene partial sequences of the six isolates tested (Genbank Accession EF486308-EF486313) were 100% homologous to those of other A. tumefaciens strains (GenBank accession AF501343, AY701900, AY701898, AY701899). The above results confirmed that this bacterium is A. tumefaciens. Pathogenicity of the bacteria was proved by the inoculation test on carrot root discs and tomato seedlings. This is the first description of A. tumefaciens causing root gall in ginseng seedling. The disease occurred locally and sparsely, but considering its appearances in seedbeds suggests that the ginseng root gall may become a threat to ginseng in Korea.
Journal of the Korea Organic Resources Recycling Association
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v.11
no.4
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pp.130-137
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2003
In this study, Isolation was attempted to acquire a phenol utilizing bacterium for PAH degradation and to investigate the characteristics of PAH degradation. The isolate was identified by BIOLOG test as Stenotrophomonas maltophilia. Lower first order reaction constant was detected in the presence of lower phenol concentration. The yield coefficient of phenol was 0.1447mg cell/mg phenol. In the presence of naphthalene and phenol, phenol degradation was favorable. The isolate was capable of utilize naphthalene and phenanthrene as growth substrate but PAH, containing over 4-ring structure such as pyrene, was not degradable. The possible phenanthrene degradation pathway would be the addition of two hydroxy group on C-1 and C-2 position, followed by ortho cleavage, and then decarboxylation.
Diarrllea and death of chicken have been brought about by fowl typhoid caused by Salmonella gallinarum, which causes a great loss of chicken farms. For the development of the probiotic which can control a fowl typhoid of S. gallinarum without any adverse effect of commercial existing antibiotics, we isolated antagonistic intestinal bacteria against S. gallinarum from a bowel of the chicken which was pastured in a chicken farm of Gumi, Kyoungbuk. An Y3 strain which had a strong antagonistic ability to S. gallinarum was selected as a candidate of chicken probiotic microorganism among isolated strains. It was identified as a Bacillus amyloliuefaciens by 98% similarity by the result of cultural, physiological, biochemical test and Biolog system$(Microlog^{TM} 4.0)$, and named as Bacillus amyloliquefaciens Y3. The strain showed the strongest antagonistic activity and a good growth at pH 5-9, $37^{\circ}C.$
Kim, Yong-Ki;Lee, Seong-Don;Ryu, Jae-Gee;Ryu, Jae-Dang
Research in Plant Disease
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v.9
no.4
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pp.229-236
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2003
The 1080 epiphytic bacteria obtained from 370 samples of pome and stone fruits including apple, pear, peach, grape, apricot and Chinese quince were screened for antagonistic activity against postharvest pathogens, Penicillium expansum, Alternaria alternata and Botrytis cinerea. Among tested antagonistic bacteria, eight bacterial isolates inhibited mycelial growth of the postharvest pathogens and were identified as Bacillus amyloliquefaciens (three strains), B. megaterium, B. subtilis var. gladioli, B. licheniformis, B. pumilus and Serratia marcescens based on biochemical characteristics and utility of carbon and nitrogen compounds (Biolog system). Eight carbohydrates were evaluated for their effect on mycelial growth and germination of the postharvest pathogen, P. expansum to select nutrients for enhancing bio-control efficacy. The growth of four selected antagonists, B. amyloliquefaciens P43-2, B. amyloliquefaciens A71-2, B. licheniformis P94-1, and S. marcescens P76-9 were also tested. As a result, 1% glucose (w/v) strongly stimulated growth of the antagonists, suppressed mycelial growth of the postharvest pathogen, and had a little comparatively stimulatory effect on germination of the the postharvest pathogen. It was confirmed that the addition of 1% glucose (w/v) greatly enhanced biocontrol effect of B. amyloliquefaciens P43-2, B. licheniformis P94-1, and S. marcescens P76-9. Application of B. amyloliquefaciens P43-2, B. licheniformis P94-1, and S. marcescens P76-9 with the addition of 1% glucose (w/v) increased the control efficacy up to 48%, 46%, 14% compared with those of the antagonists without glucose, respectively. When the antagonists were applied to control postharvest disease caused by P. expansum in apple wounds, the population of B. amyloliquefaciens P43-2 and B. licheniformis P94-1 increased until 4 days after inoculation (DAI) of the antagonists and then decreased from 10 DAI. Meanwhile the population of S. marcescens P76-9 decreased at early stage (4 DAI), but increased from 7 DAI, and finally maintained constantly until 10 DAI in apple wounds.
Park Ji Hyun;Choi Gyung Ja;Lee Seon-Woo;Jang Kyoung Soo;Lim He Kyoung;Chung Young Ryun;Cho Kwang Yun;Kim Jin-Cheol
Microbiology and Biotechnology Letters
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v.33
no.1
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pp.16-23
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2005
In order to develop a new microbial fungicide using endophytic bacteria for the control of anthracnoses occurring on various crops, a total of 260 bacterial strains were isolated from fresh tissues of 5 plant species. After they were cultured in broth medium, their antifungal activities were tested for in vivo antifungal activity against cucumber anthracnose caused by Colletotrichum orbiculare. As the results, liquid cultures of 28 strains showed potent antifungal activities more than $90\%$ against cucumber anthracnose. At 3-fold dilutions of liquid cultures, 18 strains inhibited the development of cucumber anthracnose of more than $70\%$. They were further tested for in vivo antifungal activity against red pepper anthracnose caused by C. coccodes and in vitro antifungal activity against C. acutatum, a fungal agent causing red pepper anthracnose. Among 18 strains, a bacterial strain EB215 isolated from cucumber roots displayed the most potent antifungal activity against Colletotrichum species. It was identified as Burkholderia cepacia based on its physiological and biochemical characteristics, Biolog test and 16S rDNA gene sequence. It also controlled effectively the development of rice blast (Magnaporthe grisea), rice sheath blight (Corticium sasaki), tomato gray mold (Botrytis cinerea), and tomato late blight (Phytophthora infestans). Studies on the characterization of antifungal substances produced by B. cepacia EB215 are in progress.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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