One hundred and fifty one mutant strains were obtained from the parent strain Aspergillus oryzae MF by ultra-violet ray irradiation. Among those mutants a strain, Asp. oryzae UM-36 which hyperprodued protease, was selected and its morphological characteristics and the production of enzymes protease, ${\alpha}$-amylase, and glucoamylase on wheat bran koji and on soy-sauce koji were studied. The results obtained were as follows 1. The selected mutant showed slower growth and weak sporulation on malt agar and on Czapek agar than the parent strain. 2. The conidiophores of the mutant were generally shorter than those of the parent when grown on malt agar. 3. Sectoring in colonies was not found when grown on malt agar and on Czapek agar. 4. The level of protease production by the mutant was increased approximately 1,4-fold higher on wheat bran koji and 2-fold higher on soysauce koji than by the parent. 5. The production of ${\alpha}$-amylase and glucoamylase by the mutant were also increased as compared with the parent on wheat bran koji and on soy sauce koji. 6. In the case of parent strain and mutant strain, the highest activity of protease appeared after three days in wheat bran medium at $30^{\circ}C$ incubation, but the highest activities of ${\alpha}$-amylase and glucoamylase appeared after two days.
The most active strain for the amylase activity from the native Youngkwang koji, was isolated and identified as Aspergjllus awamori. The optimal conditions for the production of ${\alpha}-amylase$ and glucoamylase were investigated and the properties of these enzymes were also examined. Maximum yields of ${\alpha}-amylase$ and glucoamylase were obtained at $30^{\circ}C$, pH 5.0 for days. The production of these two enzymes were increased with the addition of maltose, urea, $K_2HPO_4$, $MgSO_4{\cdot}7H_2O$, and $CaCl_2{\cdot}2H_2O$. The activities of these enzymes were maximized at $50^{\circ}C$, $pH\;5{\sim}6$. The heat stabilites of ${\alpha}-amylase$ and glucoamylase were maintained at $50^{\circ}C$ for 20min and 40min, respectively. Also, the addtion of $MgSO_4{\cdot}7H_2O$, $K_2HPO_4$, and $CaCl_2{\cdot}2H_2O$ salt increased the heat stabilities of these enzymes.
This study was activity of ${\alpha}-amylase$, glucoamylase of liquid Nuruk prepared using liquid Nuruk (NK) and Aspergillus kawachii (AK), Aspergillus niger (AN), Aspergillus oryzae (AO), Monascus kaoliang (MK). To investigate the relationship between the enzymatic activity and the total sugar content of liquid Nuruk depending on the types of Nuruk molds and the degree of rice-polishing. The activity of ${\alpha}-amylase$ depending on the types of Nuruk molds was shown to be 8.82, 8.72 units/mL in AN and AK treatments in brown rice liquid Nuruk at 24 hours after incubation, as the degree of rice-polishing increased, the activity of ${\alpha}-amylase$ was significantly lower (p<0.05). When brown rice was incubated in AN, it showed 8.83 units/mL at 48 hours after incubation, which was the highest activity, but there was no significantly difference (p<0.05), as the degree of rice- polishing was higher, the activity of ${\alpha}-amylase$ was lower. The activity of glucoamylase depending on the degree of rice-polishing showed 3,013 units/mL in AO treatment in brown rice liquid Nuruk at 24 hours after incubation, and the enzymatic activity was significantly higher (p<0.05). As the degree of rice-polishing increased, the activity of glucoamylase decreased, so liquid brown rice Nuruk showed the highest enzymatic activity, liquid white rice Nuruk was the lowest enzymatic activity. The highest enzymatic activity appeared in liquid Nuruk with brown rice at 48 hours after incubation. The activity of ${\alpha}-amylase$, glucoamylase showed higher enzymatic productivity as the degree of rice-polishing was lower, and there was an inverse correlation with the total sugar content.
As an efffort ot construct LAB (latice acid bacteria), capable of utilizing starch as fermentation substrate without the aid of externally supplied enzymes, plasmid vectors containing the amyL($\alpha$-amylase/pullulansase gene) from Clostridium thermophydrosulfuricum, and glucoamylase cDNA from Asperigillus shirousamii were constructed and introduced itno E. coli and L. lactis. For expression in procaryotes , 1.9kb glucoamylase cDNA encoding the mature form of enzyme was PCR amplified and translationaly fused to a PCR amplified 260 bp fragment containing the promotor and secretion signals of amyl in the same reading frame. The production of $\alpha$-amylase, Apu, and glucoamlase in E. coli and L. lactis was confirmed by enzyme assay and zymography . Enzymeswere detected in both cellpellets and supernatants, indicating theworking of scretion signals in heterologous hosts. The efficiencies of secretion were varibale depending on the gene and host. The highest $\alpha$- amylase acitivity observed was 1.1 units and most activiity was detected from thecell pellets. The degree of gene expression in both hosts and the effect on the growth of hosts were examined.
A fungal strain which produced high levels of acid protease and amylase was isolated from the atmosphere for application to the manufacture of digestive enzme preparation. This study was carried out to elucidate its microbiological characteristics, environmental conditions for production of the enzymes, and relationships between the enzyme activity and acidity. 1. The isolate was identified as a fungal strain which belonged to Aspergillus niger by the manual of Rafer and Fennel, and was found to be a strain producing high levels of acid protease and amylase. 2. The optimal pH of tile enzymes produced by the strain were: protease, 2.0;, ${\alpha}-amylase$, 4 to 5; and glucoamylase, 3 to 5. 3. The optimal culture conditions for production of the enzymes were: protease (at pH 2.5), 2 to 3 days incubation on wheat bran at $30^{\circ}C$; ${\alpha}-amylase$ and glucoamylase(at pH 3.0), 3 days incubation at $30^{\circ}C$. 4. The production of acid protease and glucoamylase was increased approximately by 20 percent when 2 percent of corn starch was added to the wheat bran medium. 5. The addition of 0.3 percent ammonium sulfate to the wheat bran medium resulted in enhancing the enzyme production, especially of acid prctease.
High hydrostatic pressure was applied to Foxtail Millet Takju to investigate the effects of high pressure on inactivation of microorganisms and enzymes. Total bacteria, lactic acid bacteria and yeast in untreated Takju were $6.8{\times}10^7,\;1.3{\times}10^8\;and\;8.4{\times}10^7\;CFU/mL$, respectively. Total bacterial count in Takju reduced to $2.2{\times}10^5\;CFU/mL$, while lactic acid bacteria and yeast were sterilized completely when heated at $65^{\circ}C$ for 30 min. Lactic acid bacteria and yeast decreased with the increase of treatment pressure, and pressurization of 400 MPa for 10 min at room temperature sterilized completely the lactic acid bacteria and yeast in Takju. Total bacteria were not sterilized with pressurization of even 600 MPa at room temperature. Total bacteria were completely sterilized at $66^{\circ}C/400\;MPa/60\;min\;and\;66^{\circ}C/600\;MPa/10\;min$. Pressurization of Takju caused a partial inactivation of ${\alpha}-amylase$, and after pressurization at 600 MPa for 10 min at room temperature, 73.2% of the original activity remained. The activity of glucoamylase increased with the increase of treatment pressure. Treatment at $66^{\circ}C/400\;MPa/10\;min$ reduced the activity of ${\alpha}-amylase$ by 59.7% and glucoamylase by 20.5%. ${\alpha}-Amylase$ was inactivated to less than 1.2% of the original activity at $66^{\circ}C/600\;MPa/30\;min$.
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
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v.32
no.8
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pp.1221-1226
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2003
High hydrostatic Pressure was applied to Foxtail Millet Yakju to investigate the effects of high pressure on inactivation of microorganisms and enzymes. Total bacteria, lactic acid bacteria and yeast in untreated Yakju were $1.5{\times}$10$^4$,1.9${\times}$10$^4$ and 1.4${\times}$10$^4$ CFU/mL, respectively. Total bacterial count was reduced to 4.1${\times}$l0$^2$ CFU/mL, while lactic acid bacteria and yeast were sterilized completely in Yakju heated at $65^{\circ}C$ for 15 min. Lactic acid bacteria and yeast decreased greatly with the increase of treatment pressure, and were sterilized completely in Yakju treated at more than 300 ㎫ for 10 min/$25^{\circ}C$. Total bacteria were not completely sterilized with pressurization of even 600 ㎫ at room temperature and reduced to 2 log cycle even at $65^{\circ}C$. Total bacteria decreased by 2∼3 log cycle with the increase of treatment time from 10 to 60 min at $25^{\circ}C$/300 ㎫. Pressurization of Yakju caused a partial inactivation of $\alpha$ -amylase and glucosamylase, and the activities of $\alpha$ -amylase and glucoamylase decreased by 18.1% and 21.1%, respectively at $25^{\circ}C$/600 ㎫/10 min. Activities of $\alpha$ -amylase and glucoamylase decreased with the increase of temperature, and 22.2% and 32.1% of the original activity were remained with the treatment at $65^{\circ}C$/300 ㎫/10 min, respectively. Enzyme activities decreased slightly with the increase of treatment time at $65^{\circ}C$/300 ㎫.
This study was conducted to investigate the effect of rice powder m tile enzyme (protease, $\alpha$-amylase, $\beta$-amylase and glucoamylase) activities of soybean meju fermented by Monascus prepureus and Monascus pilosus. The activities of the enzyme in the rice meju and the soybean meju fermented by M. pilosus were higher than those by M. perpureus. Protease activity of powdered rice meju was higher than that of granular rice meju, while $\alpha$-amylase, $\beta$-amylase and glucoamylase activities were higher in granular rice meju. Protease activity in soybean meju fermented by adding of the cultured medium of Monascus strains(CMM) as a seed inocula were higher than those of the rice powder meju, while $\alpha$-amyulase, $\beta$-amylase and glucoamylase activiities were lower than those of soybean meju by CMM. The concentration of rice powder to show maximum protease activity in soybean meju was also 10% against steamed soybean. But $\alpha$-amylase activity of soybean medju by the CMM added 2% powdered rice showed lower but the activity increaed with an increase in powdered rice, whereas $\beta$-amylase and glucoamylase activiities decreased with an increase in powdered rice. Protease activity of soybean meju fermented by 10% rice meju fermented by M. pilo년 as a seed inocula was higher than that of the meju fermented by Aspergillus oryzae, whereas $\beta$-amylase and glucoamylase activities of the soybean meju showed less than 50%.
To find microorganisms of producing $\alpha$-amylase inhibitors, actinomycetes were isolated from soil samples that were collected at different locations in Korea and screened for enzyme inhibitory activity. A strain of these microbes had a high inhibitory activity and was identified as one of the genus Streptomyces by morphological, biochemical and physiological studies according to the methods of the International Streptomyces Project (ISP). The medium used consisted of 3 % corn starch, 0.2% yeast extract and 0.8% peptone (pH 7.0). When this strain was aerobically cultured in the medium on a rotary shaker, the highest inhibitory activity was obtained after four days. This inhibitor had inhibitory activities on various $\alpha$-amylases and glucoamylase, but not on $\beta$-amylase.
Isomaltooligosaccharides in Sikhye were digested with enzyme (30unit/ml) of $\alpha$-amylase, $\alpha$-glucosidase and glucoamylase from Aspergillus awamori, sweet potato $\beta$-amylase and human salivary $\alpha$-amylase at 37$^{\circ}C$ for 1 hour, respectively. These amylases acted on these saccharides to give hydrolysis products with less than 20% of degree of hydrolysis, except the case of glucoamylase with 62% of high degree of hydrolysis. $\alpha$-Glucosidase plus human salivary $\alpha$-amylase hydrolyzed it to attain the hydrolysis value up to 25%, but further increment of hydrolysis was not observed. Rice residue in Sikhye has similar sugar composition and structure, judging from sugar analyses by the enzymatic hydrolysis. These results suggest that isomaltooligosaccharides and rice residue in Sikhye can be a growth factor for Bifidobacterium and dietary fiber which is useful for human health.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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