본 실험은 인산염 분해균을 밀의 근권토양으로부터 분리 동정하고 인산염 분해균의 유기산 생성과 pH와의 관계를 조사하기 위해 실시하였다. 인산염 분해균은 36시간 배양후 선명한 투명대(clear zone)를 형성하였다. API 20E System과 BIOLOG$^{TM}$ analysis를 사용하여 동정한 결과 이 균주는 Entrobacter agglomerans로 동정되었다. Similarity와 distance는 각자 0.656과 4.790로 나타났다. Hydroxyapatite를 함유한 배지에서 E. agglomerans를 배양하는 동안 인산의 농도가 현저히 증가하였으며, pH와 인산의 농도와는 고도의 역상관($r^2=0.933$)을 보였다. HPLC로 분석한 결과 이 균주는 여러 가지 유기산을 생성하였으며 그 중 oxalic acid가 가장 많이 생성되었다. Acid phosphatase는 alkaline phosphatase에 비해서 10-15배의 활성을 보였으며, alkaline phosphatase는 배양 동안 거의 0에 가까운 활성을 보였다. E. agglomerans의 population은 배양 하루 동안 현저히 증가하였으나 그 후 급격히 감소하였다.
spirometra ernacei의 제3기 유충 plerocercoid(sparganum)를 중간숙주인 흰쥐와 종숙주인 고양이에게 감염시켜서 회수한 sparganum과 성충의 non-specific esterase와 acid,alkaline phosphatased의 분포 및 isozyme pattern 변화를 비교하기 위하여 효소조직화학적 방법과 전기영동법을 이용하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 첫째,non-specific esterase는 sparganum과 성체의 근층과 유조직층에 많이 분포하였고 표피층에는 거의 분포가 없었다. 이의 isozyme band pattern은 sparganum에서 7개의 성체에서 8개의 isozyme band로 분리 되었는데 sparganum과 성체의 major band는 각각 3번과 4번 band였다. 둘째,acid phosphatse는 sparganum과 성체의 표피층과 근층에서 많이 부포하였고 유조직층에는 거의 분포가 없었다. isozyme band pattern은 sparganum과 성체에서 각각 3개의 band로 분리되었는데 3번 band가 major band였다.셋째, alkaline phoosphatase는 sparganum과 성체의 표피층과 근층에서 많은 분포를 보였으며 유조직층에서 더 상당한 분포가 있었다. isozyme band pattern은 sparganum에서 2개 성체에서 4개가 분리되었는데 sparganum성체 모두 2번 band가 major band였다.
From the pSKH201 plasmid which had been previously cloned in our laboratory, a 3.0kbp insert DNA encoding the alkaline phosphatase of Kluyveromyces fragilis was cleaved with several restriction endonucleases and ligated int the appropriate sites of M13mp18/19 vectors and sequenced by Sanger's dideoxy chain termination method. The sequence contained a 1,638 bp open reading frame(ORP) whose similarities in nucleotide, when compared with those of Saccharomyces cerevisiae and Escherichia coli by GENETYX program, were found to be 61% and 46%, respectively. The deduced amino acid sequence consists of 546 amino acids and contains several homologous regions in the alkaline phosphatases of E. coli, S.cerevisiae and human placenta.
Journal of the Korean Association of Oral and Maxillofacial Surgeons
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제35권6호
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pp.397-402
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2009
The purpose of this study is to investigate the effects of alendronate and pamidronate on proliferation and the alkaline phosphatase activity of human bone marrow derived mesenchymal stem cells and to relate the results with bisphosphonate related osteonecrosis of the jaw(BRONJ). With the consent of patients with no systemic disease and undergoing iliac bone graft, cancellous bone was collected to obtain human bone marrow derived mesenchymal stem cells through cell culture. 96 well plate were prepared with a concentration of $10^4$cell/ well. Alendronate and pamidronate were added to each well with the concentration of $10^{-6}M$, $10^{-8}M$ and $10^{-10}M$, respectively. Then proliferation capacity of each well was evaluated with the cell counting kit. 24 well plates were prepared with a concentration of $10^5$cell/ml/well and with the bone supplement, alendronate and pamidronate were added with the concentration of $10^{-6}M$, $10^{-8}M$ and $10^{-10}M$, respectively on each plate. The plates were cultured for either 24 or 72 hours. Then the cells were sonicated to measure the alkaline phosphatase activity and protein assay was done to standardize the data for analysis. As the concentration of alendronate or pamidronate added to the culture increased, the proliferation capacity of the cells decreased. However, no statistical significance was found between the group with $10^{-10}M$ of bisphophonate and the control group. Pamidronate was not capable of increasing the alkaline phosphatase activity in all trials. However, alkaline phosphatase activity increased with 24 hours of $10^{-8}M$ of alendronate treatment and with 48 hours of $10^{-10}M$ of alendronate treatment. Cell toxicity increased as the bisphosphonate concentration increased. This seems to be associated with the long half life of bisphosphonate, resulting in high concentration of bisphosphonate in the jaw and thus displaying delayed healing after surgical procedures. Alendronate has shown to increase the alkaline phophatase activity of human bone marrow derived mesenchymal stem cells. However, this data is insufficient to conclude that alendronate facilitates the differentiation of human bone marrow derived mesenchymal stem cells. Further studies on DNA level and animal studies are required to support these results.
To investigate the postmortem changes in hepatic cell membrane, the rats were sacrificed with cervical dislocation and kept in an incubator at $25^{\circ}C$, 70% of humidity for 12 hours. The biochemical experiments in postmortem were done at 2, 4, 8 and 12 hours. The degree of rigor mortis and algor mortis were increased with the time during 12 hours. The contents of hepatic malondialdehyde were rapidly increased ai 2 hours, and gradually decreased afterward. In histological findings, after 8 hours, the clotted blood was seen in central vein and sinusoids, and especially portal veins were dilated a1though the structure of hepatic lobules was preserved well. Furthermore, both in the histochemical and enzymatic examinations, membrane bounding alkaline phosphatase activities were gradually decreased with the time. In conclusion, the activity of membrane bounding alkaline phosphatase was linearly decreased with time in the early postmortem period and so it might be referred to the possibility fur the estimation of death time in the early postmortem period.
진도개와 삽사리 혈청 lactate dehydrogenase와 혈청 alkaline phosphatase의 동위효소 및 효소활성도를 분석하였다. 전기영동결과 진도개와 삽사리의 혈청에서는 5두지 종류의 LDH의 동위효소가 모두 확인되었다. LDH의 활성도는 진도개의 경우 522.53 $\pm$ 279.96(U/L)이었고 삽사리는 534.10 $\pm$ 280.35(U/L)이었다. 진도개와 삽사리의 혈청 alkaline phosphatase전기 영동상에서 는 한 종류의 동위효소만 관찰되었고 활성도는 진도개의 경우 7.61 $\pm$ 4.52(K-A unit)였고 삽사리는 10.46 $\pm$ 7. 10(K-A unit) 였다. 삽사리의 ALP 활성도는 연령에 따라 커다란 차이를 나타내었다.
In this study, we investigated the immunopotent activities of lepidan, a water soluble proteoglycan from Lentinus lepideus. To examine whether lepidan may affect nonspecific immune responses, we determined the effect on the production of nitric oxide (NO). Lepidan effectively increased the NO production in IFN-${\gamma}$ and LPS triggered RAW 264.7 cells. To further demonstrate the evidence that lepidan activates various immune cells, we determined the alkaline phosphatase activity, plaque-forming cell number and secretion of interleukine-4 (IL-4) and granulocyte/macrophage-colony stimulating factor (GM-CSF) after lepidan treatment in murine splenocytes. The results showed that lepidan increased alkaline phosphatase activity and the number of plaque-forming cells, which indicates that lepidan can lead B lymphocytes to late stage of differentiation. Also, when the splenocytes were cultured with lepidan for 48 hr, the level of IL-4 and GM-CSF in the supernatant dramatically increased. Taken together, these data suggest that lepidan is a biological response modulator that is able to activate immune responses.
This observation was carried out to investigate the phosphatase activity and the calcium contents of periapical granuloma in patients of both sex and different age. The results were as follows : 1. Acid phosphatase activity was considerably increased with bone absorption. 2. Alkaline phosphatase activity was also remarkably increased in periapical granuloma. 3. In case of periapical granuloma, differences of phosphatase activity by age and sex were not observed. 4. Calcium contents in periapical granuloma was of very small quantity, showing remarkable decrease when compared with the normal bone tissue.
Plants response to phosphate starvation include the changes of activity of some enzymes, such as phosphatases, fructose-1,6-bisphosphatase, sucrose-phosphate synthase and nitrate reductase. In this study, to determine the effects of phosphate starvation on the change of activities of acid and alkaline phosphatase, fructose-1,6-bisphosphatase, sucrose-phosphate synthase, and nitrate reductase were studied in melon seedlings (Cucumis melo L.). The content of the protein and chlorophyll tended to relatively reduced in melon seedlings subjected to phosphate starvation. Acid phosphatase activity in first and second leaves of melon seedlings was relatively higher than that of third and fourth leaves of seedlings in 14 days after phosphate starvation treatment, respectively. Active native-PAGE band patterns of acid phosphatase in melon leaves showed similar to activities of acid phosphatase, whereas alkaline phosphatase activity was different from the change in the activity of acid phosphatase. Inorganic phosphate content in melon seedlings leaves was constant. The changes of Fructose-1,6-bisphosphatase and sucrose phosphate synthase activities showed similar patterns in melon seedlings leaves, and between these enzymes activities and phosphate nutrition negatively related. Fructose-1,6- bisphosphatase and sucrose phosphate synthase activities showed significant difference in second and fourth leaves, but nitrate reductase showed significant difference in first and second leaves in 14days after phosphate starvation treatment. We concluded that phosphate nutrition could affect the distribution of phosphate, carbon and nitrogen in melon seedlings.
The movement of teeth during orthodontic treatment requires bone remodeling process of bone formation and bone resolution. To find out the changes occuring in the cell itself, mechanical stress was applied to the cell populations involved in the bone metabolism. Bone tissue cell populations were isolated from fetal rat calvaria and divided into OC and OB groups. Following results were obtained from measuring the changes in acid & alkaline phosphatease activity, cyclic AMP and $PGE_2$ production in time lapse after the application of mechanical stress. 1. In case of the marker enzyme of specific bone tissue cell, acid phosphatase activity was high in OC group and alkaline phosphatase activity was high in OB group. 2. After the mechanical stress was applied, acid phosphatase activity was decreased in both OC and OB groups and alkaline phosphatase activity was increase in OB group. 3. When the mechanical stress was applied for 15, 30 and 60 minutes, the production of $PGE_2$ increased in both OC and OB groups, as the time span increased. 4. When the mechanical stress was applied for 20 and 40 minutes, the production of $PGE_2$ increased in both OC and OB groups, as the time span increased.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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