• 한국식품영양과학회지
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• 제22권6호
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• pp.797-802
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• 1993

The properties of the alcohol-oxidase from yeasts assimilating of methanol(Hansenula polymorpha CBS 4732, Pichia pastoris CBS 2612 and Candida boidinii CBS 8106) as free(cellules, purified enzymes) and immobilized forms(immobilized cellules, immobilized enzymes) were investigated. Immobilization enhanced the activity and stability of alcohol-oxidase to a certain degree. The optimum temperature of the immobilized alcohol-oxidase was lower than those of the free forms. The pH / activi쇼 profiles of alcohol-oxidase did not change by immobilization, but changed by the microorganisms. When the immobilized cellules were stocked at 4$^{\circ}C$ in 10mM potassium phosphate buffer(pH 7.5 or 8.0), alcohol-oxidase was more stable than those were stocked in potassium phosphate buffer containing 0.65M sucrose. The immobilization modifies the conditions of oxidation on the various substrates. alcohol-oxidase in immobilized forms showed some with higher Km value for methanol than that in free ones.

• 한국식품영양과학회지
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• 제22권6호
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• pp.792-796
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• 1993

The synthesis alcohol-oxidase[EC 1.1.3.13] was investigated in the yeasts, Candida boidinii CBS 8106 and C. boidinii CBS 2428, during growth on different carbon sources. Alcohol-oxidase was undetectable in all strains submitted to the test in the mineral salts medium containing 1.0% glucose, but its production was rapidly increased when the carbon source was changed glucose to 1.0% methanol after 24hrs of incubation. When cells were grown on the various carbon sources (glucose, xylose, lactose, glycerol, galactose, saccharose, sorbose, lactic acid or acetic acid), the alcohol-oxidase activity was undetected. These carbon sources together with methanol yielded far better synthesis of alcohol-oxidase than in the case of carbon sources alone. Alcohol-oxidase was active towards alcohol of shorter alkyl-chain length than C5 and unsaturated alcohols. Its affinity for these alcohols decreased with the increasing length of the alkyl-chain. The apparent Km values for the methanol of Candida boidinii CBS 8106 and C. boidinii CBS 2428 were 1.96 and 1.21, respestively.

• 한국식품영양과학회지
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• 제18권4호
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• pp.435-443
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• 1989

Pichia pastoris의 배양조건과 배지의 탄소원에 따른 alcohol-oxidase의 생성기능과 alcohol-oxidase의 기질특이성을 실험하기 위하여 P. pastoris CBS 2612와 P. pastoris CBM 10의 2균주에 대하여 실험하였다. 배양조건에 따른 효소생성은 glucose를 탄소원으로 첨가한 mineral salt medium에서 균체를 정상기까지 배양하여 methanol이 함유된 배지에서 재배양하는 2단계 배양법의 경우가 균체를 직접 methanol배지에 배양한 경우보다 효율적이었으며 생성된 총효소량도 전자의 경우가 후자에 비해 약 1.7배 정도 많았다. 다음 탄소원에 따른 효소생성능을 비교하였다. 먼저 직쇄alcohol을 탄소원으로 사용한 경우 methanol을 제외한 ethanol, propanol, butanol 그리고 pentanol에서는 효소가 생성되지 않았고 또한 이 직쇄alcohol을 methanol과 혼합한 경우에도 극미량의 생성에 그쳤다. 여러가지 탄소화합물(glucose, xylose, lactose, glycerol, galactose, saccharose, sorbose, lactic acid, acetic acid)을 탄소원으로 사용하면 methanol에 의해 생성된 효소량보다 훨씬 작았으나 이들을 methanol과 혼합 사용하면 효소생성량은 급격히 증가하였고, 특히 xylose, lactose 그리고 lactic acid의 경우는 methanol 단독 사용시보다 오히려 다량 생성되었다. 시험 2균주 중에서도 어떤 경우에서든지 P. pastoris CBS 2612가 alcohol-oxidase 생성능이 더 좋은 것으로 나타났다. 효소의 기질특이성은 효소를 기질에 반응시킬때는 교반을, 그리고 효소 활성측정은 alcohol-oxidase가 methanol을 분해하여 생성한 formaldehyde를 직접 정량 하였을 경우 탄소쇄가 7개 이하인 직쇄alcohols과 불포화alcohols, 그리고 일부2급alcohols(isobutyl alcohol, isoamyl alcohol)에도 특이성이 있었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제34권3호
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• pp.216-220
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• 2006

본 균의 생육 및 효소생산에 유용한 탄소원으로서 자연계의 식물에 풍부한 펙틴을 탄소원으로 할 경우, 그 생육도는 전분보다 뛰어났으며, alcohol oxidase와 catalase의 생산량도 높아지는 것으로 나타났다. 특히 alcohol oxidase의 경우는 전분의 15배 이상의 생산량을 보여 본 균과 펙틴 이용성과의 관계를 시사하였고, 세포외 pectin esterase, pectinase등의 높은 활성이 검출되어 이를 증명하였다. 또한 alcohol oxidase 반응에서 생성되는 물질인 formaldehyde를 산화하는 formaldehyde dehydrogenase와, formate를 산화하여 $CO_2$를 생성하는 formate dehydrogenase의 반응을 발견하여, 본 균의 pectin 이용성과 관련한 일련의 에너지 대사계의 존재를 추정할 수 있었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제17권5호
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• pp.461-467
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• 1989

Hansenula polymoypha의 배양조건과 배지의 탄소원에 따른 alcohol-oxidase의 생성능을 비교하기 위하여 H. polymorpha CBS 4732, H. polymorpha CBM 11, 그리고 H. polymorpha Cooney의 3균주에 대하여 실험하였다. 배양조건에 따른 효소생성은 glucose를 탄소원으로 첨가한 mineral salt medium에서 균체를 정상기까지 배양하여 methanol이 함유된 배지에서 재배양하는 2단계 배양법의 경우가 균체를 직접 methanol 배지에 배양한 경우보다 효율적이었으며 생성된 총효소량은 전자의 경우가 후자에 비해 1.9배정도 많았다. 다음 탄소원에 따른 효소생성능을 비교하였다. 먼저 직쇄 alcohol을 탄소원으로 사용한 경우 mothanol을 제외한 ethanol, propanol, butanoL, 그리고 pentanol에서는 효소가 생성되지 않았고 또한 이 직쇄 alcohol을 methanol과 혼합한 경우에도 극미량의 생성에 그쳤다. 여러 가지 탄소화합물 (glucose, xylose, lactose, glycerol, galactose, saccharose, sorbose, tactic acid acetic acid)을 탄소원으로 사용하면 methanol에 의해 생성된 효소량의 1/10 정도 생성되었고 이들을 methanol과 혼합사용하면 효소생성량은 급격히 증가하였고, 특히 lactose와 tactic acid의 경 우는 methanol 단독사용시 보다 오히려 다량 생성되었다. 시험 3균주 중에서는 어떤 경우에서든지 H. polymorpha CBS 4732가 alcohol-oxldase 생성능이 가장 좋은 것으로 나타났다.

• 한국식품과학회지
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• 제27권2호
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• pp.266-269
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• 1995

알코올 함량을 보다 신속하고 정확하게 측정하고자, 알코올 센서를 사용하였다. Alcohol oxidase를 glutaraldehyde로 nylon net에 고정화시킨 다음 산소전극에 연결하여 기질과의 반응에서 소모되는 용존산소 소비량의 변화를 용존산소측정기로 측정하여 알코올을 정량하였다. 알코올 센서의 최적조건에서 시판되는 각종 주류를 측정해 본 결과, 각각 맥주는 $4{\sim}5%$, 저알코올성 음료는 0.71%, 포도주는 10.06%, 청주는 16.12%, 소주는 25.71%, 탁주는 6.18%로 정량되었으며, 이는 가스 크로마토그래피로 측정한 값과 좋은 상관관계를 가졌다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제23권2호
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• pp.203-208
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• 1995

The Polyvinyl alcohol (PVA) oxidase is a key enzyme involved in degradation of PVA with PVA hydrolase. The PVA oxidase has been purified to homogeneity from the culture broth of PVA grown Pseudomonas cepacia G5Y strain by ammonium sulfate precipitation, DEAE-cellulose column chromatography, and Sephadex G-150 gel filtration. The molecular weight of the purified enzyme was estimated about 60, 000 daltons by SDS-polyacrylamid gel electrophoresis. The enzyme is most active at 45$\circ$C and at pH 8.5, and is stable below 55$\circ$C and between pH 6 and 9. The enzyme activity was strongly inhibited by Ag$^{2+}$ and Hg$^{2+}$.

• KSBB Journal
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• 제21권6호
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• pp.456-460
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• 2006

효소는 환경과 조건에 따라 상이한 활성도를 나타내며, 전기 자극에 의하여 비활성화된 알콜 산화효소는 당, 계면활성제, 히드로젤 들에 의하여 안정화되었다. 이들 효소는 trehalose, TritonX-100, Brij에서 보다 안정하였으며, 이들 효소의 안정도는 Hansenula sp., P. pastoris, C. boidinii에서 분리된 효소가 순서적으로 보다 안정하였다. 전기자극하에서 효소의 안정화에 대한 이 연구는 생물공학, 단백질공학, 의료공학 분야에 널리 이용될 수 있으리라 사료된다.

• 대한전기학회:학술대회논문집
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• 대한전기학회 1999년도 추계학술대회 논문집 학회본부 C
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• pp.984-986
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• 1999

In the case of immobilizing of glucose oxidase in organic polymer using electrosynthesis, the glucose oxidase obstructs charge transfer and mass transport during the film growth. This may lead to short chained polymer and make charge-coupling weak between the glucose oxidase and the backbone of the polymer. That is mainly due to insulating property and net chain of the glucose oxidase. Such being the case, it is useless to increase in amount of glucose oxidase more than reasonable in the synthetic solution. We establish by means of qualitative analysis that amount of immobilized glucose oxidase can be improved by adding a hole ethyl alcohol in the synthetic solution. As ethyl alcohol was added by 0.1mol $dm^{-3}$ in the synthetic solution, the faradic impedance of resultant electrode was increased about five times as much as the case of ethyl alcohol free in the solution, and mass transport was limited more than over. That is due to insulating property and net chain of the glucose oxidase. Moreover, in ultraviolet spectra of the synthetic solution, the adsorption peak at 285nm corresponding to glucose oxidase was decreased. It suggests increase in amount of immobilized glucose oxidase.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제23권1호
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• pp.60-67
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• 1995

Methanol assimilating yeast, Hansenula sp. MS-364 that has high productivity with methanol as carbon and energy source has been preserved at dept. of Microbiological engineering. Purification and properties of alcohol oxidase (E.C.1.1.3.13: oxygen oxidoreductase) were investigated in the methanol assimilating yeast, Hansenula sp. MS-364. Alcohol oxidase is related to the catalytic reaction that degrades alcohol to aldehyde and peroxide. The methanol oxidizing enzyme was purified by ammonium sulfate precipitation, DEAE-Sephadex A-50 chromatography and gel filtration on Sepharose 6B from cell-free extract. The purified enzyme preparation gave a single band in the sodium dodesyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). The molecular weight of the enzyme was calculated to be about 576,000 and molecular weight of subunit was also calculated to be 72,000. The optimal pH and temperature of the enzyme reaction were pH 7.5 and 37$\circ$C, respectively. The enzyme was unstable in acidic pH and higher temperature. The enzyme was not specific for methanol and also oxidized lower primary alcohols. The Km value for methanol was 2.5 mM and that for ethanol was 1.66 mM. The enzyme was heavily inhibited by metal ions such as Hg$^{2+}$, Ag$^{2+}$, Cu$^{2+}$. The high concentration of EDTA and sulfhydryl reagents strongly inhibited the enzyme activity. The component of coenzyme was determined to flavin adenine dinucleotide.