• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제58권5호
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• pp.459-464
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• 2005

연구 배경 : Adenosine deaminase (ADA)는 퓨린 (purine) 대사에 작용하는 효소로서 림 프구, 특히 T-림프구의 증식과 분화에 관여하며, 결핵성 흉수의 진단에 있어서 중요한 생화학적 표지자 중의 하나이다. 한편, 노인의 경우, T-림프구의 수와 기능의 감소에 의하여 면역 기능이 감소하는 것으로 알려져 있다. 이에 저자 등은 노인 결핵성 흉수 환자에서 흉수내의 ADA 수치가 젊은 환자에서보다 감소하는지를 조사하였다. 방 법 : 4년 동안 세브란스 병원에서 1) 흉수 결핵균 배양 양성 또는 2) 흉막 조직 검사상 결핵에 합당한 소견을 보여 결핵성 흉수로 진단받은 환자 80명을 대상으로 후향적으로 조사하였다. 65세를 기준으로 두 군으로 분류하였으며, 연령과 흉수 ADA 수치의 연관 관계를 독립 표본 t-검정 및 선형 회귀 분석을 이용하여 연구하였다. 결 과 : 80명의 환자 중 65세 이상은 21명 (26.3%)이었다. 흉수 내의 ADA 수치는 65세 이상 및 이하 군에서 각각 $71.2{\pm}27.6IU/L$, $68.5{\pm}5.8IU/L$ 이었다 (p=0.69). 선형 회귀 분석에서도 연령과 흉수 내의 ADA 수치는 상관 관계를 보이지 않았다 ($r^2=0.05$, p=0.59). 결 론 : 본 연구의 결과에 의하면, 결핵성 흉수의 진단에서 흉수 ADA 수치를 보조 지표로 사용하는 데 있어서, 노인환자에서도 젊은 환자와 동일한 임상적 유의성을 가지고 동일한 결정 수치 (cut-off value)를 적용할 수 있을 것으로 판단된다.

• BMB Reports
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• 제39권2호
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• pp.167-170
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• 2006

Bovine adenosine deaminase undergoes a nondenaturational conformational change at $29^{\circ}C$ upon heating which is characterized by a large increase in heat capacity. We have determined the transition state thermodynamics of the conformational change using a novel application of differential scanning calorimetry (DSC) which employs very slow scan rates. DSC scans at the conventional, and arbitrary, scan rate of $1^{\circ}C/min$ show no evidence of the transition. Scan rates from 0.030 to $0.20^{\circ}C/min$ reveal the transition indicating it is under kinetic control. The transition temperature $T_t$ and the transition temperature interval ${\Delta}T$ increase with scan rate. A first order rate constant $k_1$ is calculated at each $T_t$ from $k_1\;=\;r_{scan}/{\Delta}T$, where $r_{scan}$ is the scan rate, and an Arrhenius plot is constructed. Standard transition state analysis reveals an activation free energy ${\Delta}G^{\neq}$ of 88.1 kJ/mole and suggests that the conformational change has an unfolding quality that appears to be on the direct path to the physiological-temperature conformer.

• Journal of Life Science
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• 제9권2호
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• pp.62-66
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• 1999

To overexpress E. coli ADA in host strain E. coli M15, the expression plasmid pQEADD was constructed. To analyze the expression characteristics of ADA, a time course of the expression was first examined. The protein was not detected in no inducted in no induction samples. After the addition of IPTG, a band corresponding to the expected size of ADA was appeared. Its molecular weight was about 36,000 dalton. Maximum expression level was revealed when the cell cultured for 3∼4hrs after induction. This result indicated that the efficient expression of add can be achieved by induction at early logarithmic phase. The effect of different IPTG concentration on the degree of ADA expression was investigated. The expression levels of add were not largely affected by IPTG concentration. Location of overexpression ADA was checked out. A protein band corresponding to the ADA was seen in only crude extract B(insoluble protein). This result suggests that ADA is in E. coli M15. The molecular weight of ADA estimated by SDS-PAGE was approximately 36,000 Da.

• Bulletin of the Korean Chemical Society
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• 제30권11호
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• pp.2523-2531
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• 2009

Effects of some diacid, diamine and dinitro aromatic compounds on the structure and activity of adenosine deaminase (ADA) were investigated by UV-Vis spectrophotometry in 50 mM phosphate buffer at pH = 7.5 and 27 ${^{\circ}C}$ and molecular docking studies. The results showed that all tested ligands are showing inhibition; five ligands are uncompetitive and other two ligands are mixed of competitive and noncompetetive inhibitors with majority of competitive behavior. For the later case analysis was done based on competitive inhibition. Diacids have larger size and higher inhibition constant ($K_I$) relative to others. A logical correlation between calculated free energy of binding and experimental values was obtained for un-competitive. Experimental and calculated data showed that competitive inhibitors are distributed near the active site of enzyme and form several cluster of ranks, whereas uncompetitive inhibitors bind to the enzyme-substrate complex and distributed far from the active site. Results of structure-activity relationship showed that, larger, more hydrophobe, less spherical and more aromatic ligands have higher inhibition constants.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제9권4호
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• pp.429-435
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• 1999

An adenosine 5'-monophosphate deaminase (AMP aminohydrolase, EC 3.5.4.6) was purified to homogeneity from the cell-free extract of Saccharomyces cerevisiae DKCTC7248. The molecular mass of subunit was estimated to be 80 kDa on SDS-PAGE, and that of the holoenzyme was shown to be 240 kDa by gel filtration. The isoelectric point of the enzyme (AMP deaminase D) was determined to be 6.2. The AMP deaminase D was specific towards AMP with an apparent $K_m$ value of 4.1 mM and a Hill coefficient, $n_H$, of 2.2. Both ATP and ADP were positive allosteric effectors of the AMP deaminase D: The apparent $K_{m}$ was decreased to 1.6 mM and 3.3 mM in the presence of 0.1 mM ATP and ADP, respectively, lowering $n_{H}$ to 1.0. Univalent cations like $K^+, Na^+ and Li^ +$ activated the enzyme but some divalent cations such as $Cu^{ 2+} and Cd^{2+}$ showed strong inhibitory effects. This enzyme displayed optimum activity at $30^{\circ}C$ and pH 7.0. In addition, it was stable up to $45^{\circ}C$ and over a wide pH range(pH 5.5-9.0). Amino acid sequences of its N-terminal region were analyzed to be ADYKMQMFADDA.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제44권3호
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• pp.611-620
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• 1997

연구배경 : 결핵성 흉막염의 감별 진단 목적으로 널리 이용되고 있는 검사는 adenosine deaminase와 INF-$\gamma$를 세포성 면역에 또다른 중요한 매개체로 알려진 TNF-$\alpha$의 진단적 의의를 조사하고, 현재 임상에서 유용한 지표로 사용되고 있는 adenosine deaminase와의 감별력을 비교하고자 본 연구를 시행하였다. 방 법 : 삼출성 흉막염 80예(결핵성 : 39예, 암성 : 31예, 부폐렴흉막염 : 10예)를 대상으로 흉수의 기본적인 세포조성, 화학 검사와 더불어 ADA와 TNF-$\alpha$(Medgenix IRMA kit)를 측정하였다. 결 과 : 흉수내 ADA농도는 결핵성 흉막염에서 $48.7{\pm}32.7U/L$로 비결핵성 흉막염 $26.0{\pm}41.3U/L$에 비해 유의한 차이로 높았고(p < 0.05), TNF-$\alpha$치 또한 결핵성 흉막염에서 $184.1{\pm}214.2pg/mL$로 비결핵성 흉막삼출액 $44.1{\pm}114.2pg/mL$에 비해 유의하게 높았다(p < 0.01). ROC 곡선을 이용하여 ADA와 TNF-$\alpha$의 감별력을 가장 높일 수 있는 기준치를 정하였을 때, ADA는 30U/ml, TNF-$\alpha$는 15pg/ml로 측정되었고, 각각의 기준치를 이용하여 감수성과 특이도를 구하였을때, ADA는 감수성 66.7%, 특이도 85.0%, TNF-$\alpha$는 감수성 69.2% 특이도 87.1%를 보였다. 두 검사의 민감도와 특이도를 비교하기 위한 ROC 곡선에서, ROC 곡선아래의 면적(area under curve)은 ADA와 TNF-$\alpha$사이에 유의한 차이가 없었다(ADA 0.83, TNF-$\alpha$ 0.82). 다중회귀분석(multiple stepwise regression)에서 ADA가 가장 유용한 지표로 계산되었으나 TNF-$\alpha$의 추가가 분별력에 더 이상의 기여함은 없었다. 결 론 : 결핵성 흉막염과 비결핵성 흉막염을 감별 진단하는데 ADA와 함께 TNF-$\alpha$도 유용한 지표로 이용될 수 있으나 두가지 검사를 함께 시행함에 따른 진단에 있어서의 잇점은 없었다.

• 한국수산과학회지
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• 제7권3호
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• pp.163-168
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• 1974

진주담치의 건조중의 nucleotides의 변화를 알기 위하여 생체시료, 열풍건조시료 및 자숙열풍건조시료에 대하여 분석 검토하였다. 1. ATP 함양은 $8.2{\mu}moles/g(dry basis)$ 로서 높았고, 건조후외 잔존율도 $30\%$ 이상으로 많았다. 2. ADP 및 AMP는 건조중에 축적되는 결과를 보여 nucleotides 총량(ATP+ADP+AMP)으로 볼때는 건조중에 크게 감소하지 않았다. 3. 분획물중 UMP 및 adenosine이라고 추정되는 성분이 있었으나 동정하지 못하였다. 4. IMP의 생성은 볼 수 없어 AMP deaminase 활성은 없다고 보며, inosine 및 hypoxanthine 함양은 건조중에 증가하므로 adenosine deaminase 활성은 있다고 볼 수 있다. 5. 진주담치의 ATP 주분해경로는 그 분해생성물로부터 볼때 $ATP{\to}ADP{\to}AMP{\to}adenosine{\to}inosine{\to}hypoxanthine$이라고 추정된다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제25권1호
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• pp.46-52
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• 1996

The present study was undertaken to investigate the effect of the water extract of the puffer fish Fugu xanthopterus(FXH) on the alcohol induced hyperuricemia. The normal group and the FXH treated group showed no sigbificant changes in the levels of blood uric acid but, the blood uric acid significantly decreased in the FXh treated rats with 100mg/kg for two weeks compared to the ethanol treated group. There were no significant changes in the activities of uricase, adenosine deaminase, guanine deaminase, and purine uncleoside phosphorylase, among all the test group. But the activitis of liver xanthine oxidase were recovered to the normal level in ethanol +FXH treated group comparing to the ethanol treated group. Furthermore, ethanol+FXH treated rats showed the similar pattern in the levels of blood uric acid and urinary allantoin with normal group. These results indicate that the decreased blood uric acid by the FXH treatment of the alcohol induced hyperuricemia rats may result from decreased activity of hepatic xanthine oxidase.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제45권2호
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• pp.388-396
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• 1998

연구배경: 흉수의 원인을 규명하는 방법으로는 임상소견, 흉수 분석, 그리고 흉막생검 등이 있다. 그러나 이와 같은 적극적인 검사에도 불구하고 약 20%의 환자에서 흉수의 원인을 모르는 것으로 알려져 있다. 결핵성 흉막염은 우리나라에서 가장 흔히 보는 흉막질환이지만 흉수에서 결핵균 양성율은 20-30%에 불과하고 흉막생검 양성율도 50%를 넘지 않아 감별진단이 어려운 경우를 임상에서 종종 경험하게 된다. 본 연구에서는 흉수의 감별진단에 있어 흉수에서의 ADA(adenosine deaminase) 및 동종효소의 활성도 측정의 유용성을 평가하고자 하였다. 방 법: 1996년 1월 부터 6월까지 단국대병원 내과에 흉수로 입원한 54명의 환자들의 흉수와 혈청에 대해 ADA 및 동종효소의 활성도를 측정하였다. 흉수의 원인으로는 결핵성 흉수가 25명, 부폐렴성 흉수가 10명, 악성 흉수가 14명, 여출성 흉수가 5명이었으며, 이들 중 소방형 흉수를 보인 경우는 결핵성 흉수가 5명, 부폐렴성 흉수가 6명이었다. 총 ADA 활성도와 동종효소 활성도 측정은 spectrophotometry로 시행하였으며, ADA2 동종효소의 활성도 측정은 ADAl의 강력한 억제제인 EHNA(erythro-9-(2-hydroxy-3-nonyl) adenine)을 이용하여 측정하였다. 결 과: 결핵성 흉수에서의 총ADA 활성도는 악성 흉수보다 높았으나 (p<0.l), 결핵성 흉수와 부폐렴성 흉수사이에는 유의한 차이가 없었다(결핵성 흉수 : $148.9{\pm}89.9IU/L$, 부폐렴성 흉수 : $129.0{\pm}119.4IU/L$, 악성흉수 : $60.7{\pm}17.8%$). 흉수에서 총 ADA에 대한 ADA2 동종효소의 활성도의 비 (ADA2%)는 결핵성 흉수에서 부폐렴성 흉수에 비해 유의하게 놓았으나(p<0.05), 결핵성 흉수와 악성 흉수 사이에는 유의한 차이가 없었다(결핵성 흉수: $57.2{\pm}10.7%$, 부폐렴성 흉수 : $35.9{\pm}17.8%$, 악성 흉수 : $60.7{\pm}17.8%$). 소방형 흉수의 경우 총 ADA 활성도는 결핵성흉수와 부폐렴성 흉수 사이에 유의한 차이가 없었으나(결핵성 흉수 : $157.8{\pm}100.8$ IU/L, 부폐렴성 흉수 : $164.3{\pm}132.3$ IU/L), ADA2% 는 결핵성 흉수에서 부폐렴성 흉수보다 유의하게 높았다(p<0.005)(결핵성 흉수 : $53.3{\pm}3.9%$, 부폐렴성 흉수 : $27.8{\pm}7.9%$). 결 론: 흉수에서 ADA동종효소의 측정은 결핵성 흉수와 부폐렴성 흉수의 감별진단에 유용하며 특히 소방형 흉수의 경우와 같이 임상적으로 강별이 용이치 않은 경우에 더욱 유용할 것으로 생각된다

• 대한기계학회:학술대회논문집
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• 대한기계학회 2008년도 추계학술대회A
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• pp.1687-1689
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• 2008

In the detection of pathogenic microorganisms ATP-bioluminescence reaction is a fascinating method. ATP(adenosine triphosphate) is an energy source of all kinds of living organism and ATP-bioluminescence reaction uses this ATP. However, ATP exists not only in the cells but also outside the cells. Therefore ATP-bioluminescence reaction only with intracellular ATP is very important in pathogenic microorganism detection. Because of that reason we developed a microfluidic channel containing Dielectrophoretic zone which capture microorganisms and eliminating and washing extracellular ATP with ATP-degarading enzymes, adenosine phosphate deaminase and apyrase. Microorganisms are captured by pDEP force at the DEP electrode zone and only extracellular ATPs are washed and eliminated outside the zone.