Ginger is an important monocotyledonous plant belonging to the family Zingiberaceae. The objective of this study was to investigate the regeneration potential of ginger using leaf base explants. Auxins such as 2, 4-D and NAA in combination with BA were used for initiation of callus. Different combinations of both ammonium ($NH^{4+}$) and nitrate ($NO^{3-}$) were also studied for efficient callus production. High frequency of white friable calli was observed on modified Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with 2.0 mg/L 2, 4-D, 0.5 mg/L NAA and 0.5 mg/L BA. The highest shoot induction (92.33%), shootlets number ($7.33{\pm}0.33$) and length ($88.33{\pm}4.40$) mm were achieved on MS media containing 0.5 mg/L BA. Regenerated shoots were transferred to in vitro rooting media containing 1.0 mg/L IBA. Afterwards, plantlets with well-developed root and shoot system were subjected to a twostep hardening process. 71% of plantlets survived after secondary hardening without any abnormal morphology.
Yun, Ayoung;Kim, Tae Dong;Kim, Ji Ah;Lee, Na Nyum;Cheong, Eun Ju;Kim, Yong Wook
Journal of Plant Biotechnology
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v.49
no.1
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pp.82-89
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2022
In vitro techniques were developed for propagating Vaccinium oldhamii using shoots with apical buds. Explants having an apical bud were cultured on Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with 1.0, 2.0, and 5.0 mg/L of each zeatin, thidiazuron, 6-benzylaminopurine (BA), and 6-(γ,γ-dimethylallylamino)purine (2-iP) in order to induce multiple shoots. Among the tested treatments, the 2.0 mg/L of 2-iP proved to be most suited for the multiplication and growth of shoots; the multiple shoot induction rate was 100.0%, the average number of shoots was 7.4 per explant, and the average shoot length was 51.7 mm. The in vitro elongated shoots were rooted on half-strength MS medium containing various concentrations of indole-3-butyric acid (IBA) and 1-naphthaleneacetic acid (NAA). However, overall callus overgrowth was observed in all treatments and resulted in necrosis and abnormal shoot growth in root formation. A low concentration (0.5 mg/L) of IBA was appropriate for normal root development and the in vitro rooting rate was 30%. Ex vitro treatments on root formation using various concentrations of IBA with Talc powder and two types of rooting substrates (Flexi-Plugs or Horticultural soil) were examined. The ex vitro rooting rate (80%) and length of roots (32.9 mm) were obtained when the cut ends of the shoots were treated with 1.0 mg/L IBA and cultivated in Horticultural soil for 2 months. These findings suggest that ex vitro rooting is the more effective method for improving root formation in Vaccinium oldhamii than in vitro rooting.
Ruyue Xu;Ji-Hi Son;Hong-Gyu Kang;Hyeon-Jin Sun;Hyo-Yeon Lee
Journal of Plant Biotechnology
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v.50
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pp.248-254
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2023
This study was conducted to establish an efficient plant regeneration system in 'Dayu', a Korean variety of Perilla frutescens developed for seed oil production, in conjunction with the previously studied variety 'Namcheon'. The healthiest callus was formed on the hypocotyl explants cultured on a medium containing 0.1 mg/L NAA and 0.5 mg/L BA, outperforming the leaf and cotyledon samples. In both dark and long-day conditions, Dayu consistently exhibited significantly higher shoot regeneration rates compared with Namcheon. The highest shoot regeneration rates in Dayu were observed from the hypocotyl explants cultured on 0.1 mg/L NAA and 0.5 mg/L BA media, with shoot regeneration rates of 84.4% and 86.7% under dark and long-day conditions, respectively. Various combinations of plant growth regulators were tested to establish the optimal shoot regeneration conditions for Dayu hypocotyl explants. The results demonstrated that the highest shoot regeneration rate (90%) was achieved when 0.5 mg/L of BA was added to the medium without NAA. Among the regenerated shoots, 70.5% were normal plants, while 19.3% were abnormal. The addition of NAA or an increase in its concentration led to a higher occurrence of abnormal plants. After the regenerated shoots were transferred to 1/2 MS medium, roots were observed within 10-15 days. By day 30, they had developed into complete plants. The results obtained from the regeneration experiments with the perilla variety Dayu can valuably inform molecular breeding reliant on transformation techniques such as genome-editing and genetic modification technology.
To improve regeneration efficiency of Brassica campestris ssp. pekinensis (chinese cabbage) in vitro, the effect of ehtylene inhibitors [AgNO$_3$ and silver thiosulfate (STS)] and optimal age of explantse were investigated. On the effect of ethylene inhibitors either 100 $\mu$M of AgNO$_3$ or 5 $\mu$M of STS enhanced shoot regeneration from cotyledons when it was added in basal shoot induction media(MS salts, B5 vitamine, sucrose 2%, BA 2.0mg/L, NAA 1.0mg/L). But at higher concentrations, AgNO$_3$ induced abnormal shoots, and STS greatly reduced regeneration frequency. On the other hand, the maximum regeneration rate was obtained from the cotyledons taken from 3-day old seedlings. However there was no distinctive effect among the containers used for cultivation. The most optimal condition of root induction was a minimal Murashige and Skoog media containing 0.1 mg/L NAA. In order to induce bolting and flowering from in vitro regenerated chinese cabbage, the plant were healed at 4$^{\circ}C$ for weeks in a cold chamber. When they were planted in pots, the plane produced phenotipically normal flowers and seeds. The overall results suggest that ethylene inhibitors promote regeneration of shoot from cotyledons of chinese cabbage without alleviating fertility.
Immature embryos of Glycine max L. was cultured on Murashige and Skoog's (MS) medium supplemented with 1 mg/L 2,4-dichlorophenoxy acetic acid (2,4-D). After 6 to 8 weeks of culture, immature embryos produced somatic embryos. Of somatic embryos, two cotyledonary embryo (14%), one cotyledonary embryo (37%), fused cotyledonary embryo (43%), and stunted globular embryos (6%) were observed. The procambial strand of cotyledons originated from circular procambial tissues of lower hypocotyl. The circular procambial tissues were independently divided into one or two procambial strand at the edge of cotyledonary-node, and then connected to each cotyledon to form somatic embryos with one or two cotyledons. When cotyledon was a fused type, the circular procambial strand in lower hypocotyl was continuously connected to the cotyledon. Also, somatic embryos with two cotyledons developed a functional shoot apex with the tunica-corpus structure. In contrast, somatic embryos with one or fused cotyledon formed an abnormal shoot apex without the tunica-corpus structure or with non-dome shape in the inter-cotyledonary area. These results indicated that the variation of cotyledon in somatic embryos is closely related to procambial differentiation and shoot apical meristem development.
We have evaluated a new mutagenesis strategy called random insertional mutagenesis with subtracted cDNA fragments. The cDNAs from long day Arabidopsis plants were subtracted by cDNAs from short day plants using PCR based cDNA subtraction. The subtracted cDNAs were inserted between 35S promoter and 3'-NOS terminator regardless of orientation. When the cDNA library was used for the random insertion into Arabidopsis genome by Agrobacterium-mediated transformation, approximately 15% of transformants showed abnormal development in leaf, floral organ, shoot apex. When 20 mutants were analyzed, 12 mutants showed single cDNA fragment insertion and 8 mutants showed more than 2 transgene insertions. Only two mutants among 12 mutants that have single cDNA insert showed consistent phenotype at T2 generation, suggesting the genetic instability of the mutants.
Several plant growth regulators were examined for on their effect on the in vitro propagation of Kalopanax pictus$(T_{HUNB}.)$$(N_{AKAI}.)$ on WPM medium. Among the cytokinins tested, BA at $13.32\;{\mu}M$ appeared to be the most effective for multiple axillary shoot formation. Although the addition of $2.89\;{\mu}M\;GA_3$ promoted stem elongation, it produced morphologically abnormal leaves and stems. For rooting of the shoots, $4.9\;{\mu}M$ IBA seemed to be more effective than $2.69\;{\mu}M$ NAA. When the regenerated plants were transferred on artificial mixture containing vermiculite and peat-moss (1 : 1, v/v), 81% of them survived and grew normally.
Noticed that large number of the Korean white pine (Pinus koraiensis S. et Z.) has lost its typical excurrent tree from by removal of apical shoot in the process of cone harvesting, the investigation and analysis for the species were made on the basis of the relationship among DBH, total height, merchantable height, and merchantable volume, compared with normally grown Japanese larch (Larix leptolepis Gordon). One hundred sample trees for each species were selected in the same aged stands for the study. Results have indicated that the pine has shown abnormal height growth pattern mainly by the disturbance of external artificial force. The pine's forked and/or crooked stems by the reason lave led the result of less merchantable volume in the same DBH classes. Consequently, the pine would have undesirable tree form in terms of timber production, unless free from apical shoot disturbances. Considered to the merit of the Korean white pine that can produce timber and pine nuts, management alternatives for the pine stand were suggested to achieve maximum rate of return for the silvicultural investment.
Hypocotyls explants of melon seedling were cultured on Murashige and Skoog's (MS) medium supplemented with 1 mg/L 2,4-dichlorophenoxy acetic acid (2,4-D) and 0.5 mg/L benzyl aminopurine (BA) for 6 weeks to produce somatic embryos. In somatic embryos produced through intervening bright yellow friable (BYF) from the explants, somatic embryos with two-cotyledon (26%) and horn-type cotyledon (74%) were observed. The procambial strand of cotyledons was originated from circular procambial tissues of lower hypocotyls. The circular procambial independently divided into two procambial strand at the edge of cotyledonary-node, and then connected to each cotyledon to form somatic embryos with two-cotyledon. When cotyledon was horn-type, the circular procambial strand in lower hypocotyls would continuously remain connected to the cotyledon. However, somatic embryos with two or horn type cotyledon formed an abnormal shoot apex without the tunica-corpus structure or dome shape in the inter-cotyledonary area. These results demonstrated that the variation of cotyledon in somatic embryos was closely related to procambial tissue differentiation and shoot apical formation.
An efficient micropropagation was established by using axillary bud explants from two-year-old tree(Echinosphorea koreensis Nakai), which has been known as a rare and endangered species. Among various basal media tested, DKW medium was shown to be the best for axillary shoot elongation. The addition of both BA and TDZ to the medium induced 6 to 10 shoots per explant during eight weeks of culture, without showing any abnormal morphology at the shoot proliferation stage. However, high concentration of TDZ(>0.05 mg/L) appeared to cause hyperhydration on either leaf or shoot at the later developmental stage. Approximately 20% of shoots produced roots by the addition of 1.0 mg/L NAA but not by IBA($0.2{\sim}1.0$ mg/L). Ex vitro micro-cuttings were better source for root induction; up to 58.6% of the micro-cuttings rooted when 100 mg/L IBA was applied to the soil(vermiculite). More than 90% of plantlets with roots were successfully acclimatized and grew normally in the field. Therefore, we suggest that this endangered tree species can be effectively micropropagated by axillary bud culture system developed in this study.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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