전통 양조법을 활용하여 인공감미료를 첨가하지 않고 단맛이 보완된 전통주를 개발하기 위하여 고문헌에 기록된 주류 제조 시 쌀의 전처리 8가지 방법 즉, 죽, 범벅, 설기떡, 구멍떡, 물송편, 인절미, 개떡, 고두밥과 누룩에 존재하는 당화효소인 ${\alpha}$-, ${\beta}$-glucoamylase에 의한 당의 생성을 확인하였다. ${\alpha}$-amylase에 의해 생성된 maltose의 경우 반응 초기에는 개떡 > 설기떡 > 범벅 > 물송편 > 죽 > 인절미 > 구멍떡 > 고두밥의 순이었으나 48시간 후에는 인절미 > 범벅 = 고두밥 > 구멍떡 > 개떡 = 물송편 > 설기떡 > 죽의 순서로 생성양의 차이를 보였다. ${\beta}$-amylase 처리구의 maltose 생성은 ${\alpha}$-amylase 처리구와 유사한 결과를 보였으며, glucoamylase는 고두밥에서 약 10 mg/ml의 glucose가 생성되어 maltose의 생성과는 달리 8가지 전처리 방법 중 최대의 glucose 생성을 보였다. ${\alpha}$-amylase, ${\beta}$-amylase, glucoamylase 병행 처리한 경우는 ${\alpha}$-와 ${\beta}$-amylase에 의해 가수분해 되어 생긴 말단에 glucoamylase가 작용하여 glucose의 생성이 증가되었다. 술덧의 당 함량 변화를 보면 쌀의 전처리 방법에 따라 최종 잔당 함량에 차이를 보여 감미료를 첨가하지 않고 멥쌀로도 단맛이 보완된 술을 제조할 수 있는 배합비와 제조공정이 가능하게 되었다.
This work focused on characterization of the starch degradation activity from extremophile strain Deinococcus geothermalis. Glucoamylase gene from D. geothermalis was cloned and overexpressed by pET-21a vector using E. coli BL21 (DE3). In order to characterize starch degrading activity of recombinant glucoamylase, enzyme was purified using HisPur Ni-NTA column. The recombinant glucoamylase from D. geothermalis exhibited the optimum temperature as $45^{\circ}C$ for starch degradation activity. And highly acido-stable starch degrading activity was shown at pH 2. For further optimization of starch degrading activity with metal ion, various metal ions ($AgCl_2$, $HgCl_2$, $MnSO_4{\cdot}4H_2O$, $CoCl_2{\cdot}6H_2O$, $MgSO_4$, $ZnSO_4{\cdot}7H_2O$, $K_2SO_4$, $FeCl_2{\cdot}4H_2O$, NaCl, or $CuSO_4$) were added for enzyme reaction. As results, it was found that $FeCl_2{\cdot}4H_2O$ or $MnSO_4{\cdot}4H_2O$ addition resulted in 17% and 9% improved starch degrading activity, respectively. The recombinant glucoamylase from D. geothermalis might be used for simultaneous saccharification and fermentation (SSF) process at high acidic conditions.
Aspergillus niger No. PFST-38 was grown on complex media in 30L agitated fermentors at various aeration rates and stirrer speeds. We could correlate the mixing time as a function of the Reynolds number and the apparent viscosity, as follows. ${\theta}_M=2.95\;\NRe^{-0.52},\;{\theta}_M=1.88\;{\eta_a}^{0.57}$ Also, the effects of the apparent viscosity (${\theta}_a$), the impeller rotational speed (N), the air flow rate ($V_s$), and the mixing time (${\theta}_M$) on the oxygen transfer coefficient, $K_L a$ were determined experimentally, and equated as follows. $K_La=12.04N^{0.88}Vs^{0.71}{n_a}^{-0.83},\;K_La=30.2N^{0.88}Vs^{0.71}{\theta_M}^{-1.45}$$K_La$ increased as the agitation speed and the air flow rate increased. The rate of $K_La$ increase was dependent more on the rotational speed of impeller than on the air flow rate. The glucoamylase production increased with the increase of the agitation speed upto at 500 rpm and increased with the increase of air flow rate upto at 1.0 vvm. The values calculated from the above equation confirmed that the experimental maximum production of glucoamylase was achieved when the $K_La$ and the apparent viscosity of the broth were $260\;hr^{-1}$ and 1800 cps, respectively.
Starch is an abundant resource in plant biomass, and it should be hydrolyzed enzymatically into fermentable sugars for ethanol fermentation. A genetic recombinant yeast, Saccharomyces cerevisiae GA-7458, was constructed by integrating the structural gene of both $\alpha$-amylase from Bacillus stearothermophilus and the gene (STA1) encoding glucoamylase from S. diastaticus into the chromosome of S. cerevisiae SH7458. The recombinant yeast showed active enzymatic activities of $\alpha$-amylase and glucoamylase. The productivity of ethanol fermentation from the pH-controlled batch culture (pH 5.5) was 2.6 times greater than that of the pH-uncontrolled batch culture. Moreover, in a fed-batch culture, more ethanol was produced (13.2 g/L), and the production yield was 0.38 with 2% of corn starch. Importantly, the integrated plasmids were fully maintained during ethanol fermentation.
The purification system of glucoamylase (glucan 1,4-${\alpha}$-glucosidase, EC 3. 2. 1. 3), some characteristics of the purified enzyme and hydrolysis rate of various raw starch were investigated through several experiments. The enzyme was produced on a solid, uncooked wheat bran medium of Aspergillus oryzae NR 3-6 isolated from traditional Korean Nuruk. The enzyme was homogeneously purified 6.8-fold with an overall yield of 28.3% by the criteria of disc- and SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The molecular weight was estimated to be 48 kDa by SDS-PAGE. The optimum temperature and pH were 55$^{\circ}C$ and 4.0, respectively. The enzyme was stable at a pH range of 3.0∼10.0 and below 45$^{\circ}C$. Enzyme activity was inhibited about 27% by 1mM Hg2+. The hydrolysis rate of raw wheat starch was shown to be 17.5-fold faster than the hydrolysis rate of soluble starch. The purified enzyme was identified as glucoamylase because the product of soluble starch by the purified enzyme was mainly glucose by thin layer chromatography.
신품종으로 개발한 양송이 '다향'의 우수성을 조사하기 위하여 총 폴리페놀성 물질, 유리당 및 ${\beta}$-glucan의 함량과 항산화활성 및 ${\alpha}$-glucoamylase 저해활성을 기존 유통되고 잇는 705호 양송이와 비교 분석하였다. 총 폴리페놀 함량은 189${\pm}$12 mg%로 기존 705호 양송이 168${\pm}$8 mg%에 비하여 더 높았고, 유리당은 mannitol, xylose 및 trehalose의 3종이 각각 3.11, 0.12 및 0.08%로 mannitol이 가장 많이 함유되어 있었으며, ${\beta}$-glucan의 함량은 건조물에 대하여 28.34%이었고 705호 양송이는 26.55%의 함량을 보여 대조군에 비하여 높은 함량을 보여주고 있었다. DPPH용액에 의한 전자공여능은 다향은 물 추출물과 80% 에탄올 추출 각각 52.14% 및 57.81%, 705호는 각각 45.27% 및 46.93%를 보였으며, ${\alpha}$-glucoamylase 저해활성은 물 추출물에서는 다향이 705호 양송이보다 저해활성이 더 높은 경향이었으며 80% 에탄올 추출물에서는 거의 비슷한 저해활성을 보였다.
A yeast strain secreting glucoamylase was transformed with an expression vector (pMS12) containing the promoter of yeast alcohol dehydrogenase I gene ADC1, mouse salivary $\alpha$-amylase cDNA, and a segment of yeast $21\mu m$ plasmid. The transformed strain could produce ethanol from starch (4%, w/v) through a direct one-step process with the conversion efficiency of 93.2%, during 5 days of fermentation, while the original, untransformed strain exhibited a conversion efficiency of 38.1% under the same condition. When the regulatory site of the ADC1 promoter region was removed, the production of ethanol increased to 29~37% in the presence of exogenous 3%(v/v) ethanol in the fermentation medium.
Transformed, hybrid strains of the yeast Saccharomyces capable of simultaneous secretion of both glucoamylase and ${\alpha}-amylase$ have been produced. These strains can carry out direct, one-step assimilation of starch with conversion efficiency greater than 93% during a 5 day growth period. One of the transformants converts 92.8% of available starch into reducing sugars in only 2 days. Glucoamylase secretion by these strains results from expression of one or more chromosomal STA genes derived from Saccharomyces diastaticus. The strains were transformed by a plasmid(pMS12) containing mouse salivary ${\alpha}-amylase$ cDNA in an expression vector containing yeast alcohol dehydrogenase promoter and a segment of yeast $2{\mu}$ plasmid. The major starch hydrolysis product produced by crude amylases found in culture broths is glucose, indicating that ${\alpha}-amylase$ and glucoamylase act cooperatively.
The flow behavior of the mycelial broth of glucoamylase hyperproducer Asp. niger No. PFST-38 for the production of glucoamylase were studied. The mycelial broth followed Bingham-pseudoplastic flow model described by Herschel-Bulkley equation. The yield stress increased with the increase in mycelial concentration. The dependency of the consistency index and the flow behavior index on the mycelial concentration could be expressed by a linear relationship. The consistency index increased proportionally with the mycelial concentration while the flow behavior index decreased with the increase in mycelial concentration. The flow property of the broth was related to the morphological data obtain in the previous study. The changes in apparent viscosity of the broth could be expressed as a function of the hyphal thickness as shown below.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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