• 제목/요약/키워드: XMP aminase

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Esherichia coli XMP Aminase 유전자의 발현 증대 (High Level Expression of XMP Aminase Gene in Esherichia coli)

  • 조정일;한철주
    • 한국식품위생안전성학회지
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    • 제6권3호
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    • pp.133-137
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    • 1991
  • 5'-XMP를 5'-GMP로 전환하는 효소인 XMP aminase[EC 6.3.4.1]의 활성을 증가시키기 위하여 XMP aminase의 유전자를 함유한 1.7kb gua A gene fragment를 pLC 34-10으로부터 분리하여 pBR 322에 subcloning 한 뒤 trp promoter를 가지고 있는 대장균 발현 벨터 pDR 720에 도입하였다. 재조합된 pXAR 64에 존재하는 gua A 유전자는 trp Promoter에 의하여 발현이 증대되었으며 $3-{\beta}-indoleacrylic$ acid에 의하여 XMP aminase의 생성이 유도되었다. XMP aminase의 비활성은 pLC 34-10을 함유한 균주에 비하여 약 17배 증가되었다.

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효모 Saccharomyces cevevisiae의 ATP 생성계와 XMP aminase에 의한 5'-XMP로부터 5'-GMP 발효생산 (Fermentative Production of 5'-GMP from 5'-XMP by XMP aminase and ATP-generation System of Saccharomyces cerevisiae)

  • 조정일
    • 한국균학회지
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    • 제21권4호
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    • pp.285-292
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    • 1993
  • 에너지 요구 반응 인 5'-XMP 의 5'-GMP 보의 효소적 전환을 위해 Escherichia coli CH 41(guaB mutant)로부터 추출 정제한 XMP aminase에 Saccharomyces cerevisiae의 glycolysis를 통한 ATP 재생계를 도입하였다. 전환 반응의 ATP원으로는 동결 건조 효모가 가장 효율적이었으며, 전환 반응의 최적 온도 및 pH는 각각 $40{\circ]C$, pH 7.4였다. 또한 100 mM glucose, 100 mM inorganic phosphate 및 6mM AMP 에서 가상 높은 전환율을 보였다. 상기의 조건에서 36 unit/ml의 XMP aminase 가 이용될 경우 효모 농도는 60 mg/ml로 충분하였으며, 최적 조건에서 6시간 반응시 1.8 mM(65.6 mg/100 ml) 5'- XMP 의 약 71%가 5'-GMP로 전환되었다.

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미생물에 의한 5′-GMP의 생산에 관한 연구 (제1보) XMP-aminase 생산균주의 분리 (Studies on the Fermentative Production of Guanosine -5′-monophosphate by Microorganism (Part 1) Derivation of XMP-aminase Producing Mutants)

  • 배종찬;손충홍;공운영;유주현
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제7권3호
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    • pp.127-133
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    • 1979
  • 5'-GMP의 직접발효생산균주의 분리목적으로 Breuibacterium ammoniagenes ATCC 6871에 자외선조사 및 NTG, DES 등의 변이제처리를 한 결과 guanine계 핵산관련물질을 직접 배지중에 축적하는 변이주는 분리할 수 없었으며, adenine영양요구주로써 GMP-reductase가 결핍되고 adenosine 및 AMP에 의해 생육저해를 받지 않는 변이주가 XMP-aminase activity가 현저히 높았음을 알았다. 이러한 변이주중 BA-17-2가 XMP-aminase의 activity가 가장 높았으며 또한 전환된 5'-GMP를 GDP나 GTP로 거의 인산화하지 않았으며 그리고 guanosine이나 guanine으로 분해하지 않았다. 생성된 5'-GMP를 anion exchange resin Duolite 102 D를 사용하여 분리하고 ultraviolet 및 Infra-red spectrum을 조사한 결과 5'-GMP로 동정되었다.

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미생물(微生物)에 의한 5'-GMP의 생산(生産)에 관한 연구(硏究) - 제2보(第2報). 5'-XMP aminase 생산균주인 Brevibacterium ammoniagenes BA 17-2의 생육도 - (Studies on the Fermentative Production of Guanosine-5'-Monophosphate by Microorganism - Part II. Growth responses of 5'-XMP aminase producing Brevibacterium ammoniagenes BA 12-7 -)

  • 김우연;공운영;손충홍;배종찬;유주현
    • Applied Biological Chemistry
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    • 제24권2호
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    • pp.105-111
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    • 1981
  • 전보(前報)에서 변이처리에 의해서 얻은 Brevibacterium ammoniagenes BA 17-2로부터 5'-XMP aminase를 생산(生産)하기 위하여 인산염, 마그네슘이온, 망간이온, thinamine의 예비적정농도를 정(定)하고자 생육도(生育度)를 조사했다. 본실험(本實驗)에서 배지중(培地中)의 인산염의 농도(濃度)가 균(菌)의 생육(生育)에 중요한 영향을 미치는 것을 보여주었다. $MgSO_4{\cdot}7H_2O$, 0.2% $MnSO_4{\cdot}H_2O$ 3mg/l, $thiamine{\cdot}HCl$를 포함한 배지(培地)를 사용하면 최대 균체량은 $KH_2PO_4$, $K_2HPO_4$ 각각 0.4%의 농도에서 얻어졌다. 이러한 인산염 농도 이상에서 균생육(菌生育)은 인산염 농도가 1%까지 증가함에 따라 저해되었지만 저해작용은 1%의 $MgSO_4{\cdot}7H_2O$와 3mg/l의 $thiamine{\cdot}HCl$을 첨가하여 해소되었다. 5'-XMP aminase 역가도 역시 인산염, 마그네슘이온, 망간이온, thiamine의 농도에 영향을 받았다. 그밖에 효소역가에 대한 배양 최적 pH와 온도는 각각 6.8과 $32^{\circ}C$로 밝혀졌다.

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고정화 미생물에 의한 뉴크레오타이드 생산 (Production of Nucleotide by Immobilized Cell)

  • 조정일;정승원
    • 한국수산과학회지
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    • 제24권2호
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    • pp.111-116
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    • 1991
  • 5'-XMP의 효소적 전환에 의한 효율적인 5'-GMP의 생산을 위하여 동결 건조한 Bevibacterium ammoniagenes ATCC 19216을 K-carrageenan, polyacrylamide, Ca-alginate 및 agar등 4가지 담체에 고정화시켜 XMP aminase 효소원으로 사용하였다. 최적담체로서 선정된 $3\%$ K-carrageenan에 고정화한 균체를 이용하여 5'-GMP를 생산하였다. 고정화되지 않은 전환균주에 의한 5'-GMP의 최적 생산 조건은 $42^{\circ}C$, pH 7.0, 100mg/ml의 glucose, 8mg/ml의 $MgSO_4\cdot7H_2O,$ 5mg/ml의 POESA, 120mg/ml cell, 5mg/ml의 phytic acid으로 나타났으며, 이때 전환율은 $94.5\%$이었다. 고정화균체에 의한 5'-GMP의 최적생산 조건은 $37^{\circ}C$, pH 7.5, 50mg/ml의 glucose, 1mg/ml의 $KH_2PO_4,$ 10mg/ml 의 phytic acid, 60mg/ml의 고정화균체, 8mg/ml의 $MgSO_4\;\cdot\;7H_2O,$ POESA이며 이때 전환율은 $64.7\%$이었다.

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Studies on the Fermentative Production of 5′-Guanylic Acid by Microorganism Part 1. Derivation of XMP Aminase-Producing Mutants form Brevibacterium ammoniagenes

  • Goong, Kyung-Nam;Son, Choong-Hong;Kong, Un-Young
    • 한국미생물생명공학회:학술대회논문집
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    • 한국미생물생명공학회 1978년도 춘계학술대회
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    • pp.97.5-98
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    • 1978
  • By the treatment of various mutagens, a number of 5'-guanylic acidproducing from 5'-xanthylic acid were obtained from Brevibacterium ammoniagenes ATCC 6871. The indispensable genetic characters of the mutants were adenine requirement, lack of GMP-reductase and mutation to adenosine resistance from adenosine sensitiveness. Main product of these mutants from 5'-xanthylic acid was 5'-guanylic acid. The substance was isolated in a crystalline form the culture broth of BA 17-2, and identified as 5'-guanylic acid by means of paper chromatography, ultra violet, absorption spectra, and infra red spectrum.

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