대한민국 제주도 연안 해수로부터 agarase를 생산하는 균주 S4를 분리하였다. 균주 S4는 그람-음성의 막대형 세포로 부드러운 베이지색 원형 콜로니를 형성하며, 한 개의 극성 편모를 갖는다. S4 균주는 $15-42^{\circ}C$, 0.5-5%(w/v) NaCl, pH 6.0-9.0, 0.5-5%(w/v) NaCl 농도에서 안정된 성장을 보인다. S4 균주의 G+C content는 49.93 mol%, 세포내 주요 지방산 (>15%)은 $C_{18:1}{\omega}7c$, $C_{16:0}$, Summed feature 3(comprising $C_{16:1}{\omega}7c/iso-C_{15:0}$ 2-OH)이다. 16S rRNA 염기서열, 생화학적 및 분류학정 특징에 기초하여 S4 균주를 Vibrio sp. S4로 명명하였다. 0.1% agar를 첨가한 액체배지에서 S4 균주는 72시간에 세포농도와 agarase 활성이 최대치를 보였다. 반면, agar 를 첨가하지 않은 배양액에서의 agarase 활성은 무시할만한 수준이었으며, 이는 균주의 agarase 유전자 발현이 agar에 의해 유도됨을 시사하고 있다. 균주 S4가 세포외부로 분비하는 총 agarase는 $45^{\circ}C$와 pH 7.0에서 최상의 효소 활성을 보였으며, agarose를 분해하여 (neo)agarotetraose와 (neo)agarohexaose를 생산하였다.
본 연구는 수산양식분야에서 용수를 살균하기 위해 제품화되어 있는 UV 및 플라즈마 장치를 100 ℓ 수조에 적용하고 처리수를 1 ℓ씩 채수, 농축하여 시료 내 세균 수의 변화를 확인하여 두 가지 처리 방식에 따른 효과를 비교하였다. 각 장치를 6시간 동안 작동시키면서 일반 해수 내 세균을 MA, TCBS, SS 배지에 배양하여 세균 수 변화를 확인하였고, 살균처리된 해수 내 Edwardsiella piscicida를 인위 접종한 후 처리수 내 E. piscicida 세균 수 변화를 확인한 결과 UV 장치와 플라즈마 장치 간의 세균 저감 효율은 99.5~99.9% 수준으로 거의 유사한 수준으로 확인되었다. 2가지 장치를 적용하여 100 ℓ의 수량을 동일한 시간 동안 처리하였을 때, 플라즈마 방식의 경우 UV 장치와 비교하여 더 짧은 시간 안에 세균을 사멸하는 것으로 나타났다. 하지만 본 연구에서는 단기적(6시간)으로만 세균 수 변화를 확인한 것으로, 사료찌꺼기, 배설물, 연안 오염 등에 따라 수질의 변동이 크고 biofilm과 유기물이 많이 존재하는 실제 양식환경을 고려할 때, 탁도와 유기물의 존재에 따라 한계가 있는 UV 처리 방식보다는 지속적이고 일정한 효과를 유지할 수 있는 플라즈마 처리 방식이 보다 효율적일 것으로 사료된다.
두 종류의 Cronobacter 선택배지(DFI agar, R&F agar)의 분유 및 건조호박 내 Cronobacter의 선택 분리능을 real-time PCR법과 함께 비교하였다. 분유에서의 Cronobacter 검출률은 세 가지 방법에서 유의적인 차이를 나타내지 않았으나(p < 0.05), 건조호박의 경우 R&F배지와 real-time PCR법이 DFI에서보다 유의적으로 높은 검출률을 보였다(p < 0.05). 배지 간 선택성에 있어서도, R&F 선택배지는 건조호박에서 DFI에 비해 유의적으로 높은 선택성을 나타냈다(p < 0.05). Real-time PCR 및 R&F배지의 사용은 분유뿐만 아니라, 건조 호박 등의 높은 경쟁세균총을 갖는 영유아식의 원료로 사용될 수 있는 식품군에서도 Cronobacter를 효과적으로 검출할 수 있는 방법으로 사료된다.
본 실험은 노루궁뎅이버섯(Hericium erinaceus isolate KU-1)의 균사생장에 관한 영양원 실험으로 대량의 균사체 수확을 위한 배양기 조성을 밝히기 위한 기초를 확립하고자 실시하였다. 최적온도는 $25^{\circ}C$이며 pH4에서 160.5 mg으로 가장 건물중이 높았고 탄소원 중 glucose, sucrose, galactose, mannose 순으로 균사생장 및 균사밀도가 우수하였다. 무기태질소원으로는 ammonium acetate 30 mM에서 균사생장이 가장 양호하였다. 아미노산 중 arginine 15 mM에서 우수하였다. C/N율 200에서 35.9 mm로 균사생장의 최대치를 보였다. 상술한 실험의 결과를 토대로 Table 1과 같은 새로운 합성배지를 조제할 수 있었고, 이를 Ko배지라 명명하였다. 이 Ko배지와 기존배지간의 한천배지상에서 균사생장 비교한 결과, Ko배지에 가장 우수한 균사생장과 균사밀도를 나타냈다. Ko배지의 조성은 glucose 18.02g, arginine 3.613g, ammonium acetate 2.313g, $CaCl_2\;0.33g$, $KH_2-PO_4\;8.5g$, $MgSO_4{\cdot}7H_2O\;2.0g$, $FeSO_4{\cdot}7H_2O\;0.02g$, $ZnSO_4{cdot}7H_2O\;0.02g$, $MnSO_4{\cdot}7H_2O\;0.02g$, water 1 liter이다.
진주근교와 금산, 남지 등의 17개 오이연작재배지역에서 건전식물의 근권토양으로부터 Triple Layer Agar(TLA)법을 변형개량하여, 오이덩굴쪼김병균에 대한 길항균을 효과적으로 분리하였고, 예비실험(in vitro, in vivo)결과에서 길항력이 우수한 세균(15 isolates)과 곰팡이(9 isolates)를 선별하여 동정하였다. 이들 중 Serratia sp., Pseudomaonas fluorescens, P. putida등 세균 3균주와 Gliocladium sp., Trichoderma harzianum, T. viride 등 곰팡이 3균주를 공시하여 얻은 실내실험의 결과는 다음과 같다. Water Agar(WA) 상에서 길하세균에 의한 오이덩굴쪼김병원균의 소형분생포자의 발아율은 $26\~45\%$ 억제 되었으며, 발아관의 길이도 $41\~56\%$ 억제되었는데, P. fluorescens가 그 중 가장 우수한 길항력을 나타내었다. WA상의 대치배양에서 길항곰팡이의 균사가 본병원균의 균사를 Coiling, Penetration, Overgrowing, Lysis 하는 등의 길항현상을 관찰할 수 있었으며, 그 중 T. harzianum이 가장 강력한 길항력을 나타내었다. 배양기의 pH별 길항곰팡이에 의한 오이덩굴쪼김병균의 Lysis정도는 pH4.6에서 가장 높았으며 다음은 3.6, 5.6, 6.6의 순이었는데 pH 6.6에서는 길항현상이 잘 나타나지 않았으나, 길항곰팡이의 후막포자가 다량 형성되었다.
한천을 분해하는 해양미생물을 한천을 유일한 탄소원으로 하는 인공 해수 한천 배지를 이용하여 제부도 개펄에서 분리하였다. SH-1으로 명명한 분리된 균주는 그람음성균이며 한 개의 극성 편모를 가지는 균이었다. 16S rRNA 유전자의 염기서열의 유사성 분석 결과 분리된 균주는 Neiella marina J221 [9]과 가장 높은 상동성을 보였다(96.5%). 분리 균주는 $28-37^{\circ}C$에서 생장하였지만 $42^{\circ}C$에서는 생장하지 못하였고 한천분해효소의 활성은 $37^{\circ}C$보다 $28^{\circ}C$에서 높은 활성을 보였다. 또한 SH-1균주는 1-5% NaCl (w/v)를 포함하는 배양액에서 생장이 가능했으며 3%의 농도에서 가장 좋은 생장을 보였고 한천을 분해하는 효소의 활성도 3% 염분농도의 배양액에서 가장 높았다. 48시간 배양한 세포배양액을 농축하여 조효소액을 준비하여 효소의 적정 pH와 적정 온도를 조사한 결과 pH 7.0에서와 $40^{\circ}C$에서 최적 효소 활성을 보였다. 조효소액을 사용하여 zymogram 분석을 실시한 결과 분자량 15, 35, 52 KD 크기의 3개 이상의 한천 분해효소를 생산하는 것으로 보인다. 박막크로마토그라피(TLC) 분석 결과 아가로스를 분해하여 네오올리고당을 생성하는 ${\beta}$-agarase 를 생산하는 것으로 추정된다.
단감나무와 차나무의 표면에서 분리한 Pseudomonas syringae 2계통 PS8401, PS8402를 $2.5\%$ glycerol이 첨가된 nutrient agar에서 배양한 다음, 증류수로 세포현탁액($10^8$ colony forming unit/ml)을 조제하여 마이크로피펫법으로 동결온도를 측정하여 본 결과, 각각 -2.5와 $-3.8^{\circ}C$에서 동결하여 빙핵활성이 인정되었다. 한편 동일한 방법에 의한 증류수의 동결온도는 $-21.8^{\circ}C$였고 옥수수를 비롯한 8가지 작물즙액의 동결온도는 $-11.6^{\circ}C$ 이하였다. PS 8401의 nutrient broth 현탁액$(10^8\;cfu/ml)$을 살포한 옥수수유묘는 $-2^{\circ}C$에서부터 얼기 시작하여 $-4^{\circ}C$가 되면, 거의 전체 식물이 상해를 입었으나 nutrient broth만 살포한 대조구의 유묘는 온도가 $-9^{\circ}C$로 내려가기 전까지는 피해를 입지 않았다. PS8401 현탁액을 살포한 후 48시간에 측정한 유묘의 피해는 살포한 세균의 량이 증가함에 따라 심해지는 경향이었다. 상기 PS 8401의 빙핵활성은 현탁액내 세포의 수가 많아짐에 따라 증가하였으며 세균을 배양한 배지의 조성이 배양온도에 따라서도 빙핵활성이 변하였는데 $2.5\%$ glycerol 혹은 $2.5\%$ glucose를 첨가한 nutrient agar와 탄소원을 별도로 첨가하지 않은 nutrient agar에서 자란 세균현탁액$(10^2\;cfu/ml)$의 동결온도는 각각 -4.0, -4.4, $-7.2^{\circ}C$였고, 배지를 $2.5\%$ glycerol을 함유한 nutrient agar로 고정하고 온도를 달리하여 생육시킨 세균현탁액 $(10^2\;cfu/ml)$의 동결온도는 $-4.0^{\circ}C$(생육온도가 $15\~25^{\circ}C$인 경우)와 $-7.6^{\circ}C$(생육온도가 $30^{\circ}C$인 경우)였다.
To explore the possible usefulness of ${\beta}$-glucans as natural antioxidants, the antioxidant profiles of ${\beta}$-glucan, extracted from Saccharomyces cerevisiae KCTC 7911, and water soluble and insoluble mutant ${\beta}$-glucan, isolated from yeast mutant S. cerevisiae IS2, were examined by five different in vitro evaluation methods: lipid peroxidation value (POV), nitric oxide (NO), 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical, reducing power, and ${\beta}$-carotene diffusion assay. The antioxidant activities of all ${\beta}$-glucans evaluated in POV test were comparable to or better than that of the known antioxidant, vitamin C. Remarkably, the ${\beta}$-glucan and water insoluble mutant ${\beta}$-glucan possessed 2.5-fold more potent activity than vitamin C at a dosage of 2 mg. Although vitamin C showed 100-fold greater activity than all ${\beta}$-glucans in NO and DPPH tests for measuring the radical scavenging capacity, all ${\beta}$-glucans revealed higher radical scavenging activity than the known radical scavenger, N-acetyl-L-cysteine (NAC), in DPPH test. The water insoluble mutant ${\beta}$-glucan had 2.6- and 5-fold greater antioxidative activity than water soluble ${\beta}$-glucan in NO and DPPH tests, respectively, showing that all ${\beta}$-glucans were able to scavenge radicals such as NO or DPPH. While all ${\beta}$-glucans revealed lower antioxidant profiles than vitamin C in both reducing power activity and ${\beta}$-carotene agar diffusion assay, the ${\beta}$-glucan and water insoluble mutant ${\beta}$-glucan did show a marginal reducing power activity as well as a considerable ${\beta}$-carotene agar diffusion activity. These results confirmed the potential usefulness of these ${\beta}$-glucans as natural antioxidants.
The maintenance of physiological activity during dilution is very critical for the accurate enumeration of Vibrio spp. in marine samples. We investigated the effect of various diluents on the recovery of Vibrio parahaemolyticus using the direct plate counting and most probable number (MPN) methods. The effects of NaCl (0.85 and 3%) and pH (from 6.6 to 7.4) in diluents based on distilled water or phosphate buffered saline (PBS) were evaluated with three V. parahaemolyticus strains. PBS-3% NaCl (pH 6.6), as opposed to PBS, was the most effective diluent at maintaining viable cell numbers up to 2 log CFU/g during dilution for direct plate counting using on thiosulfate citrate bile salts sucrose (TCBS) selective agar, as well as minimizing the difference in cell numbers between TCBS and non-selective nutrient agar. It also increased counts of V parahaemolyticus inoculated into oysters relative to PBS (p<0.01), suggesting that PBS-3% NaCl (PH 6.6) can reduce the problem of underestimating V. parhaemolyticus counts using PBS alone.
Kim, Joo-Sung;Lee, Eun-Jung;Cho, Eun-Ah;Kim, Yun-Ji
한국축산식품학회지
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제33권3호
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pp.317-324
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2013
Radio-frequency driven atmospheric pressure plasma using argon gas was studied in the inactivation of Campylobacter jejuni in order to investigate its applicability. First, the inactivation study was conducted on an agar surface. C. jejuni NCTC11168 was reduced by more than 7 Log CFU after an 88 s treatment. Another strain, ATCC49943, was studied; however, the inactivation was less efficient, with a 5 Log CFU reduction after a 2 min treatment. Then, chicken breast ham was studied at the $10^6$ CFU inoculation level. The inactivation efficiency was much lower for both strains compared to that on the agar plates. C. jejuni NCTC11168 and ATCC49943 were reduced by 3 Log CFU after a 6 min treatment and by 1.5 Log CFU after a 10 min treatment, respectively. The scanning electron microscopy analysis indicated that C. jejuni cells were deformed or transformed into coccoid form under the plasma treatment. During the plasma treatment, the temperature of the samples did not rise above $43^{\circ}C$, suggesting that heat did not contribute to the inactivation. Meanwhile, water activity significantly decreased after a 10 min treatment (p<0.05). This study conveyed that radio-frequency atmospheric pressure plasma can effectively inactivate C. jejuni with strain-specific variation.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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