• 한국가축번식학회지
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• 제20권3호
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• pp.333-341
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• 1996

One of the biggest problems involved in transgenic animal production is lack of appropriate market genes. To overcome this problem, we tested whether the genes of SEAP (secreted alkaline phosphatase) and GFP (green fluorescence protein) on our retrovirus vectors can be applicable to the transgenic animal production. The main advantage of these marker genes over other generally mainpulation can be selected without sacrificing viability. The results obtained in this study are summarized as follows: 1. Removal of zona pellucida from the mouse zygotes did not affect embryo developments to blastocysts. 2. Co-culture of zona-free embryos with virus-producing cells for 6 hours also did not affect embryo developments to blastocysts. 3. Among 58 blastocysts developed from the zona-free zygotes co-cultured with the virus-producing cells, SEAP expression was observed from the 6 blastocysts. 4. Expression of the GFP gene was detected from the virus- producing cells but no embryo expressing the gene was counted among 50 blastocysts developed from the zona-free zygotes co-cultured with the virus-producing cells.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제7권4호
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• pp.259-265
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• 2005

Indian citrus ringspot virus (ICRSV)-free plants of Kinnow mandarin (Citrus nobilis Lour x C. deliciosa Tenora) were raised from virus-infected plants using unfertilised ovules as explants. Plants were tested by indirect ELISA and RT-PCR before using their explant. An amplified product of 539 bp was obtained by RT- PCR in ICRSV infected plants. Unfertilized ovules were excised from unopened flower buds of plants tested postive for virus and were cultured on Murashige and Skoog's (MS) basal medium supplemented with various concentrations of kinetin (KN) or malt extract (ME). Maximum induction (31.94%) of embryogenic callus was observed on MS medium supplemented with KN ($9.29\;{\mu}M$). Transfer of embryogenic calli to similar media composition resulted in somatic embryogenesis in all cultures, with an average number of 60.36 globular, 17.39 heart and 7.71 cotyledonary-shaped somatic embryos per culture. All cotyledonary shaped embryos developed into complete plantlets within 60 days on transfer to similar medium. Embryogenic callus induction, somatic embryo formation, maturation, germination and plantlet formation were achieved on MS medium supplemented with KN ($9.29\;{\mu}M$) alone. The plantlets derived from somatic embryos were transferred to sterilized soil, sand and vermiculite (3:1:1) mixture. After acclimatization, the plantlets were transferred to screen house and were indexed for ICRSV employing indirect ELISA and RT-PCR and found free of virus. A distinct feature of this study is the induction of somatic embryogenesis from unfertilised ovules to produce virus-free plants.

• 한국어병학회지
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• 제19권1호
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• pp.65-72
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• 2006

홍민어의 종묘 생산 중에 자어의 대량 폐사를 일으키는 nervous necrosis virus (NNV)의 감염에 의한 피해를 방지하기 위하여 NNV 미감염 친어의 선발에 의한 종묘 생산을 시도함과 동시에 수정란, 부화자어, 먹이생물, 사육 용수 등의 NNV 감염 여부를 확인하였다. RT-PCR법에 의한 홍민어 친어의 바이러스 감염 여부를 확인한 결과, 총 40마리의 검사어 중에서 양성인 개체가 18마리, 음성인 개체는 22마리였다. 시험어로부터 자연 산란된 수정란 및 경과 단계별 부화 자어로부터 PCR법을 이용한 NNV 감염 확인 결과, 미감염 친어로부터의 수정란에서는 바이러스가 확인되지 않았으나, 감염된 친어로부터의 수정란에서는 바이러스 감염이 확인되었다. 또한 자어의 먹이생물인 클로렐라, 로티퍼, 알테미아 및 사육 용수를 대상으로 한 NNV 검출 결과, 모두 음성으로 나타났다. 부화 후 8주간의 감염 및 미감염 자치어의 사육 결과에 있어서는 초기 2주째까지의 생존율이 각각 80%, 85%로서 양호하였으나, 부화 후 25일째부터 폐사가 일어나기 시작하였다. 감염 친어구의 경우 41일째에 100% 폐사한 반면, 미감염 친어구는 최종적으로 18.3%의 생존율을 보여, 이러한 결과는 친어에 대한 NNV 검사를 실시하여 바이러스에 감염되지 않은 홍민어 종묘를 생산할 수 있다는 것을 제시한다.

• KSBB Journal
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• 제9권3호
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• pp.272-278
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• 1994

약독화된 수두 바이러스(Varicella-zoster virus: VZV)를 샤람 폐세포(human embryonic lung c cells)에서 배양하였으며, 수두 바이러스의 생산에 미치는 혈청의 종류와 농도의 효과를 조샤하였다. 수두 바이러스는 바이러스 감염 비율이 높을수록 높 은 역가를 보였으며, 배양시간이 경과함에 따라 바 이러스 감염된 세포의 파괴로 인하여 세포수가 감소 되었다 .. Newborn calf serum(NCS), calf serum (CS), horse serum(HS) 등의 혈청을 샤용한 배양에서의 수두 바이러스의 역가는 CSis와 FBS를 사 용한 배양에서보다 낮아서 수두 바이러스 생산을 증 가하기 위해 이들 혈청의 사용은 적합하지 못하였 다. 그러나, calf serum iron supplemented(CSis) 혈청을 첨가한 배지에서의 세포 친화 바이러스(cell­a associated virus)와 세포 유리 바이러스( cell-free v virus)수율은 fetal bovine serum(FBS)을 첨가한 배지에서의 수율과 비슷하였으며, 고농도의 혈청사 용은 고려되어져야 할 요소이었다. 또한, 수두 바이 러스의 증식 벚 감염력 유지가 혈청성분과 농도에 의해서 영향을 받고 있음을 보였다.

• 한국가축번식학회지
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• 제19권2호
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• pp.89-93
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• 1995

In this study was demonstrate that retrovirus-mediated gene transfer is one of the promising alternatives to the conventional pronuclear DNA microinjection approach, especially in transferring the exogenous genes into the boving embryos. By co-culturing of zona of zona-free one-cell stage embryos with the retrovirus-producing cells for 24 hours followed by 6 days of culture in virus-free medium, we could get morulae and blastocysts expressing the E. coli LacZ genes which were transferred by our retrovirus vector. The results obtained in this study are summarized as follows : 1. Addition of 5$\mu\textrm{g}$/ml of polybrene in the embryo and virus-producing cell co-culture medium did not affect development of zona-free one-cell embryo. 2. Compared with the intact embryos removal of zona at one-cell stage before co-culturing with the virus-producing cells for one day caused only slight decrease of embryo develpment. 3. Co-culture of 625 zona-free one-cell stage embryos with the virus-producing cells resulted in 65(10.4%) morulae or blastocysts, and 12.3%(8/65) of the morulae or blastocysts were E. coli LacZ positive.

• 한국식물생명공학회:학술대회논문집
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• 한국식물생명공학회 2002년도 추계학술대회
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• pp.33-40
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• 2002

We, Tong Yang Moolsan Co. Ltd. (TYM) set up the mass-production system for virus-free seed garlic via tissue culture technique. TYM's tissue culture technique is called as 'Multiple shoot propagation technique'. This technique can lead mass propagation of genetically homogeneous seed garlic in a short period because of its highly proliferation rate of in vitro shoots ($15^{10}$ /year). TYM researchers applied the technique to some selected garlic cultivars with superior characteristics and carried out field test of productivity in the inside and outside of the country for several years. According to the yearly results of field test with virus-free seed garlic, we ascertained that virus-free seed garlic can produce the highly yield increase (max. above $50\%$) and also can enhance the product quality. Consequently, we estimated that TYM's seed garlic will contribute to farmers with increase of income and can elevate the national position of garlic market in the world for its competitive power of technical and production cost.

• 식물조직배양학회지
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• 제25권4호
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• pp.273-276
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• 1998

생장점 배양에 의한 바이러스 무병주 생산 여부를 판단하고자 바이러스 감염실태를 조사한 결과 지황1호와 국내재래종 모두 여러 종류의 바이러스에 감염되어 있었고 주종바이러스는 potexvirus와 TMV였다. 생장점 배양시 신초형성은 kinetin 첨가 배지에서 가장 양호하였으며 2.4-D 첨가 배지에서는 캘러스로 발달하였는데 캘러스로부터 다수의 신초를 획득할 수 있었다. 기내 재분화 식물체의 투과전자현미경(TEM)과 지표식물을 이용한 바이러스 검정결과 생장점 배양 유래의 식물체들은 83.3%가 바이러스 무병주임을 확인할 수 있었다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제49권3호
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• pp.222-229
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• 2022

사과는 국내 과수산업에서 가장 많이 재배되고 있는 과종이다. 하지만 apple mosaic virus (ApMV), apple stem grooving capillovirus (ASGV), apple stem pitting virus (ASPV), apple chlorotic leaf spot virus (ACLSV), apple scar skin viroid (ASSVd)와 같은 바이러스 및 바이로이드에 감염되면 과실의 수확량 감소 및 품질 저하를 야기시킨다. 본 연구에서는 국내 사과 농가에서 가장 많이 감염되어 있는 ASGV 바이러스를 제거하기 위한 효율적인 무병화 시스템을 확립하고자 하였다. ASGV에 감염된 폿트묘를 36℃, 38℃, 40℃가 유지되는 항온·항습장치에서 4주간 열처리를 수행하였으며, 신초 생장율과 바이러스 제거율을 조사하였다. 신초 생장률은 36℃ 처리구에서 가장 높았으며 신초의 중간부와 상단부는 바이러스가 제거되었으나 하단부는 바이러스가 제거되지 않았다. 38℃, 40℃ 처리구는 신초의 모든 구간에서 바이러스가 제거되지 않았으며, 40℃ 처리구는 신초의 생장 없이 열처리 3주 후 고사되었다. 36℃ 온도에서 열처리된 폿트묘의 경정을 절취하여 기외에서 접목하였으며 94%의 생존율과 20%의 바이러스 제거율을 보였다. 따라서 열처리 및 경정접목을 통해 무병묘 생산이 가능할 것으로 판단되었다.

• The Plant Pathology Journal
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• 제33권4호
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• pp.382-392
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• 2017

This study reports the findings of a distinct Potato virus Y (PVY) isolate found in Northeast China. One hundred and ten samples (leaves and tubers) were collected from potato plants showing mosaic symptoms around the city of Harbin in Heilongjiang province of China. The collected tubers were planted and let to grow in a greenhouse. New potato plants generated from these tubers showed similar symptoms, except for one plant. Subsequent serological analyses revealed PVY as the causing agent of the disease. A novel PVY isolate (referred to as HLJ-C-44 in this study) was isolated from this sample showing unique mild mosaic and crisped leaf margin symptoms. The complete genome of this isolate was analyzed and determined. The results showed that HLJ-C-44 is a typical PVY isolate. Phylogenetic analysis indicated that this isolate belongs to the N-Wi strain group of PVY recombinants ($PVY^{N-Wi}$) and also shared the highest overall sequence identity (nucleotide and amino acid) with other members of this strain group. However, recombination analysis of isolate HLJ-C-44 revealed a recombination pattern that differed from that of other $PVY^{N-Wi}$ isolates. Moreover, biological assays in four different potato cultivars and in Nicotiana tabacum also revealed a different phenotypic response than that of a typical $PVY^{N-Wi}$ isolate. This data, combined, suggest that HLJ-C-44 is a novel PVY recombinant with distinct biological properties.

• 식물병연구
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• 제19권4호
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• pp.288-293
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• 2013

국내외적으로 ACLSV, ASGV, ApMV, ASSVd와 같은 바이러스 및 바이로이드 병의 발생으로 사과 과실의 생산량 감소와 기형적인 외형 등 많은 문제점들이 보고되었다. 하지만 사과 바이러스의 감염에 대한 방제 대책은 거의 알려진 바가 없는 실정이다. 따라서 본 논문에서는 사과 신품종인 '단홍', '홍안', '새나라', '썸머드림'을 분양하기에 앞서 바이러스 무병묘를 생산하는 시스템을 확립하고자 하였다. $37^{\circ}C$가 유지되는 항온 항습장치에서 4주간 열처리를 하였으며 기내에서 경정 배양을 하였다. 열처리된 각각의 사과 신품종들은 바이러스 진단 프라이머를 통해 RT-PCR을 수행하여 바이러스 진단을 수행하였다. 결과적으로 '단홍'은 28%의 바이러스 무병묘를 확보할 수 있었으며 '홍안'은 16%, '새나라'와 '썸머드림'은 12%의 확률로 바이러스 무병 사과를 확보할 수 있었다. 본 연구결과는 열처리 및 경정배양을 통해 사과 신품종에서 바이러스 무병묘 생산 시스템 구축이 가능함을 보여주었다.