Viral diseases have been a major limiting factor threating sustainable potato (Solanum tuberosum L.) production in Pakistan. Surveys were conducted to serologically quantify the incidence of RNA viruses infecting potato; Potato virus X (PVX), Potato virus Y (PVY), Potato virus S (PVS), Potato virus A (PVA), Potato virus M (PVM) and Potato leaf roll virus (PLRV) in two major potato cultivars (Desiree and Cardinal). The results suggest the prevalence of multiple viruses in all surveyed areas with PVY, PVS and PVX dominantly widespread with infection levels of up to 50% in some regions. Co-infections were detected with the highest incidence (15.5%) for PVX and PVS. Additionally the data showed a positive correlation between co-infecting viruses with significant increase in absorbance value (virus titre) for at least one of the virus in an infected plant and suggested a synergistic interaction. To test this hypothesis, glasshouse grown potato plants were challenged with multiple viruses and analyzed for systemic infections and symptomology studies. The results obtained conclude that multiple viral infections dramatically increase disease epidemics as compared to single infection and an effective resistance strategy in targeting multiple RNA viruses is required to save potato crop.
低濃度의 바이러스 조건하에서도 반응의 민감도가 높은 바이러스病의 血淸學的 診斷法을 개발하고자 담배모자이크 바이러스(Tobacco mosaic virus), 보리줄무늬 모자이크 바이러스( Barleys-tripe mosaic virus) 및 大豆모자이크 바이러스(Soybean mosaic virus)의 抗血淸으로부터 電氣泳動에 의해 추출된 Immunoglobulin을 Latex(0.8l$\mu$, Difco)粒子에 흡착시켜 梢子毛細管(1 $\times$ 100mm)내에서 各 罹病組織의 汁液과 반응시킨 결과 寒天沈降法이나 微量沈降法보다 민감도가 매우 높았다. 이 방법은 작업과정이 간편하고 빠른 시간내에 다량의 시료를 檢定할 수 있으며 陽性反應과 陰性反應을 쉽게 구별할 수 있었다.
Fifty young calves, about five to six months old purchased from nation-wide were investigated with the prevelance of neutralizing antibody (Ab) of infectious bovine rhinotracheitis virus (IBRV), parainfluenza 3 virus ($PI_{3}V$), bovine viral diarrhea virus (BVDV) and bovine respiratory syncytial virus (BRSV). The positive detection ratio of neutralizing Ab against IBRV was only 3% and two of positive samples showed low antibody titer (below 2). Ab against BRSV showed 48% of positive ratio and among 24 positive samples, antibody titer of 23 samples were below 3. But in the case of BVDV, 68% of samples were positive and 23 samples appeared to possess high antibody titer, above 4 and the antibody titer of five samples were above 8. The highest positive result came from $PI_{3}V$. The positive ratio in the samples investigated in this study was 72%, but the antibody titer of positive samples were generally below 3 (77.8% in positive samples).
This study was performed to investigate the incidence of Hosta uirus X (HVX), a Potexvirus, from cultivated hosta ornamental plants in Korea and to ascertain seed transmission of the virus from infected parent plant to progeny ones for breeding program of hosta plants. Infection rate of HVX in cultivated hostas was 25.6 % (11 out of 43 collected samples contained HVX) based on Western blot and RT-PCR detection methods. Most of HVX-infected hostas showed visible systemic leaf symptoms (mosaic, mottle, curling, stunting or combinations). Variability of HVX was confirmed by sequences of coat protein gene of individual isolates from different hostas. HVX was seed-transmitted on Hosta 'Blue Cadet'. The virus was detected from seeds, and sprouts and seedlings from the virus-contaminated seed sources. Over 7.5 % of seeds were HVX-contaminated surveyed in this study, Our data suggest that HVX can be transmitted by seed source, and indexing of the virus should be done for breeding program of Hosta.
인간면역결핍바이러스(Human Immunodeficiency Virus; HIV) 진단을 위한 초고속 실시간 PCR법을 개발하였다. 검출 대상의 DNA 염기서열은 495염기 HIV-1 특이 env 유전자(gi_l184090)및 294염기 HIV-2 특이 env 유전자(gi_1332355)를 사용하였다. 초고속 실시간 PCR은 microchip에 $6\;{\mu}l$의 PCR 용액을 탑재하는 $Genspector^{TM}$ (Samsung, Korea)을 사용하였으며, PCR의 각 회전 중 단지 두 단계(denaturation, annealing/extension)를 극단적으로 짧은 시간을 주어 수행하게 하였다. 융점분석을 포함한 30회전의 PCR 검색 시간은 총7분30초 이내에 완료되었으며, HIV-1 특이 117염기와 HIV-2 특이 119염기의 PCR산물은 최소 $2.3{\times}10^3$개의 각 env 유전자로부터 30회전의 2단계 초고속 PCR에 의해 성공적으로 증폭시킬 수 있었다. 이러한 초고속 실시간 PCR법은 HIV의 빠른검색뿐 아니라, 다른 병원채의 빠른 검색에도 유용하계 적용될 수 있을 것이다.
인간면역결핍바이러스(Human immunodeficiency virus; HIV) 진단을 위한 다중, 초고속실시간 PCR법을 개발하였다. 검출대상의 DNA 염기서열은 env 유전자를 기반으로 설계되었으며, 각기 HIV-1 특이 495염기(gi_1184090) 및 HIV-2 특이 294염기(gi_1332355)의 DNA를 안정상의 이유로 PCR을 이용한 유전자합성법으로 제작하여 사용하였다. 초고속 실시간 PCR은, PCR의 회전 중 각 단계별 설정시간을 극단적으로 축소하여, $1\;{\mu}l$의 PCR 용액용 microchip을 탑재할 수 있는 $Genspector^{TM}$을 사용하여 수행하였다. DNA 증폭과 융점분석을 포함한 총 PCR 검색 시간은 HIV_1 및 HIV-2 모두에서 15분 이내로 완료되었으며, 각기 최소 2.3개의 합성 env 유전자로부터도 HIV-1 특이 117염기와 HIV-2 특이 119염기의 PCR산물을 성공적으로 증폭시킬 수 있는 민감성을 보여주었다. 이런 형식의 실시간 PCR법을 본 연구에서 초고속실시간 PCR (Ultra-rapid real-time PCR)이라 명명하였다. 이는 본 연구의 대상인 HIV에 대한 보조적 진단방법일 뿐 아니라 PCR 검색법이 사용되고 있는 다른 병원체에 대하여도 적용될 수 있을 것이나, 우선 HIV 임상시료에 대한 본 검색법의 효용성 실험 등 추가 연구가 필요할 것으로 사료된다.
우리나라에서 주로 재배되는 십자화과 작물(상추, 콜라비, 무, 배추, 양배추)의 종자 전염 병원균 중에서 세균성 병원균 Xanthomonns campestris pv. campestris(Xcc)와 바이러스 병원균 Lettuce Mosaic Virus(LMV)를 종자에서 동시검출하기 위한 One-step multiplex RT-PCR을 개발하였다. 각각의 병원균을 특이적으로 증폭시키는 병원균 검출용 프라이머 2종(Xcc-F/R, LMV-F/R)을 primerblast 프로그램을 이용하여 제작하였고 이들 프라이머 세트는 프라이머간 또는 병원균 cDNA간의 간섭없이 특이적으로 타겟 병원균만을 검출하였다. PCR을 이용한 병원균의 검출 최소 민감도는 1 ng이었다. 십자화과 작물중에서 유통 중인 콜라비 10품종, 상추 50품종, 무 20품종, 배추 20품종 그리고 양배추 20품종에 대한 종자 감염 병원균 검출을 위한 One-step multiplex RT-PCR 수행 결과, LMV는 전체 120품종 중에서 39품종에서 검출되었고, Xcc는 2개 품종에서 검출되었다. 그리고 50품종의 상추 종자 시료 중에 8품종의 시료에서 LMV와 Xcc가 동시 검출되었다.
Larvae, nymphs, and adult stages of 3 species of ixodid ticks were collected by tick drag methods in Seoul during June-October 2013, and their infection status with severe fever with thrombocytopenia syndrome (SFTS) virus was examined using RT-PCR. During the period, 732 Haemaphysalis longicornis, 62 Haemaphysalis flava, and 2 Ixodes nipponensis specimens were collected. Among the specimens of H. longicornis, the number of female adults, male adults, nymphs, and larvae were 53, 11, 240, and 446, respectively. Ticks were grouped into 63 pools according to the collection site, species, and developmental stage, and assayed for SFTS virus. None of the pools of ticks were found to be positive for SFTS virus gene.
The studies on detection of the Strawberry mottle virus (SMoV) have been conducted in Poland for breeding programme purpose and for producers of strawberry plant material. Leaf samples collected from infected strawberry plants were grafted on Fragaria sp. Indicators which were maintained in greenhouse for further study. Seven Fragaria vesca var. semperflorens 'Alpine' indicators infected by SMoV were used for the study aimed on molecular characterization of virus isolates. Partial RNA2 was amplified from total nucleic acids using the RT-PCR method. The obtained amplicons separately digested with BfaI, FauI, HaeIII, HincI, and TaqI enzymes showed different restriction profiles. The nucleotide sequences analysis of RNA2 fragment confirmed the genetic diversity of the SMoV isolates as their similarity ranged from 94.7 to 100%. Polish isolates shared 75.7-99.2% identity with sequence of the virus strains from the Czech Republic, the Netherlands, and Canada. Phylogenetic analysis resulted in grouping of the isolates found in Poland together with one of the Czech strain whereas two other from the Czech and the strains from the Netherlands and Canada created the separate cluster.
우리나라의 격리재배는 102속, 약 250여종의 식물에 대해 실시하고 있으며, 직접경검법, 배양법, 선택배지, 생리생화학, ELISA 및 PCR 검사방법을 사용한다. 2005-2012년, 우리나라에서 수행된 격리재배는 총 8,307건이며 이중 구근류가 5,165건(62.2%)로 가장 많았고, 묘목류가2,119건(25.0%), 종자 796건(9.6%), 삽수 150건(1.8%), 접수 70건(0.8%) 및 기타 7건(0.1%) 이었다. 불합격 사례는 총 413건으로 약 4.97%였고, 발견된 병의 종류는 총 47종으로 나타났다. 종류별로는 바이러스가 27종으로 가장 많은 수를 차지했으며, 곰팡이 16종, 바이로이드 1종, Chromalveolata 1종 및 기타 2종으로 나타났다. 가장 많은 검역건을 올린 병원체는 Arabis mosaic virus (77건), Tobacco rattle virus (70건), Lily symptomless virus (46건), Penicillium expansum (46건)이다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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