Early leaves within the Viola albida complex were investigated by scanning electron microscopy in order to determine the morphological segments during morphogenesis. The early leaf development of V. albida var. albida could be morphologically divided into the eight stages in the following order: I, the initiation of shoot germination; II, the conical growth directionally of the leaf; III, the adaxial and abaxial formation of the leaf; IV, the initiation of the stipule; V, the formation of a transitional zone between the leaf blade and petiole; VI, the expansion of the upper part of the leaf blade; VII, the formation of almost all parts of the early leaf; VIII, the early simple leaf. Viola albida var. takahashii differs from V. albida var. albida by additional stages, i.e., V-1, the initiation of the first lateral lobe at the both lateral parts of the leaf after the stage V and an early lobed leaf. Viola albida var. chaerophylloides is also distinguished from two taxa by two developmental features, V-2, the initiation of a second lateral lobe below of the first lateral lobe, and an early palmately compound leaf. These findings suggest that the Viola albida complex would be in the process of peramorphosis, showing developmental changes in a chain of events, leading to a different leaf shape. These data would also be useful for isolating genes that give rise to different leaf morphogenesis outcomes among the taxa in the Viola albida complex.
The main objective of this study was to clarify the taxonomic status and the speciation mechanism of Viola albida complex in Korea. The complex includes three very closely related taxa, taxonomic ranks of which are much in dispute. These taxa in the complex are sympatric in distribution, and they are very similar in most morphological characteristics. Comparative morphological analyses revealed that they can be distinguished on the basis of leaf shape, although they show complicated patterns of variation in leaf shape. The variation of leaf shape in each taxon appeared to be maintained through developmental process, and extensive cleistogamy and vegetative reproduction in these taxa are suggested as the mechanisms maintaining the variation. Genetic variation in this complex was monomorphic in all 14 loci examined. Palynological study also showed that these taxa have the same pollen morphology. These results strongly suggested that they should be recognized as varieties of V. albida; var, albida, var. chaerophylloides, and var. takahashii. The results also suggested that some individuals that can be assigned to var. takahashii might be hybrids between var. albida and var. chaerophylloides.
The study aims are to examine the characteristics of artificial and natural hybrids between Viola albida var. albida (= albida, from below) and V. albida var. chaerophylloides (= chaerophylloides, from below), and to confirm if hybrids could be fertile and make populations in their native habitats. The 1st filial (= F1, from below) leaf shape produced by artificial crossing between albida and chaerophylloides was the same as that of V. albida var. takahashii (= takahashii, from below), and F1 bore also both chasmogamous and cleistogamous flowers. F1 seed number was 9.6 per cleistogamous pods, which was remarkably less than the average of 38.2 for albida and chaerophylloides, but the germination rate was all similar. The leaf type of self-crossed 2nd offsprings (= F2, from below) showed all leaf types found in the Viola albida complex, but the ratio of chaerophylloides leaf type was relatively low. Individuals whose F2 leaf type was restored to albida produced an average of 31.4 seeds per capsule, meaning that fertility was restored. On the other hand, individuals of F2 takahashii leaf type come to fruition a low average of 10.4 seeds per capsule, which is similar to that of takahashii. The results of crossbreeding experiment, where is their native habitats, were similar to that of laboratory. Both albida and chaerophylloids in Mt. Bulmyeong distribute extensively, but takahashii make a small population only in places where albida and chaerophylloides grow together. Summarizing the above results is suggesting that the speciation of takahashii was done by hybrid between albida and chaerophylloides, and these have been maintained with relatively small population by cleistogamous capsules.
A taxonomic study of Viola albida complex, containing the representative individuals of three taxa, V. albida var. albida, V. albida var. chaerophylloides, and V. albida var. takahashii, was done based on RAPD data. The amplified loci were 476 in total; obtained with 68 universal primers on seven OTUs. Nei's genetic dissimilarity appeared relatively low within individuals of V. albida var. albida and V. albida var. chaerophylloides (0.118-0.171 and 0.051 respectively), however, it was higher in individuals of V. albida var. takahashii (0.348). On the other hand, there is no specific trend in terms of genetic dissimilartiy among taxa, such as between individuals of V. albida var. albida and V. albida var. takahashii, between those of V. albida var. albida and V. albida var. chaerophylloides, and between those of V. albida var. albida and V. albida var. takahashii. The similarity of OTUs studied is high in clustering analysis, so that this result is compatible with the establishment of this complex. All OTUs are clustered within two groups. The individuals of V. albida var. takahashii, however, are clustered both to the group of V. albida var. albida and to the group of V. albida var. chaerophylloides, meaning that the genetic difference is high which would be commensurate with their morphological variations.
Molecular phylogenetic studies were conducted to evaluate interspecific relationships in 40 populations of Viola including 35 Korean taxa, four Japanese populations and one outgroup using nuclear ribosomal ITS sequences. The phylogenetic analyses were conducted using parsimony and neighbor-joining methods. Subsection Trigonocarpae of section Nomimium appeared as the most basal clade within the Korean Viola. Section Dischidium and Chamaemelanium was monophyletidbootstrap 100%) and placed between subsect. Trigonocarpae and three other subsections of sect. Nomimium. Sect. Nomimium was paraphyletic. Although each subsectional grouping was in accordance with previous infrageneric classification based on morphological characters, yet discordance remained at the series level. Two evolutionary trends observed in the ITS tree were as follows. First, subsect. Trigonocarpae(x=10) was derived from the outgroup(x=6); Second, subsects. Bilobatae and Vaginatae(x=10 or 12), and subsect. Patellares(x=12) of sect. Nomimium were originated from sects. Dischidium and Chamaemelanium(x=6). Viola albida complex including three very closely related taxa was recognized as independent group within subsect. Patellares in parsimony tree. This result suggested that they should be treated as a taxa in series Pinnatae. Phylogenetic position of a putative hybrid species, Viola woosanensis was not supported with previous morphological hypothesis.
ITS DNA sequences from five individuals, representative of five groups designated according to the degree of leaf teeth and lobes from simple to palmate compound leaf in the Viola albida complex, established and further analysed in order to solve the taxonomic difficulty. A total 702 bp was sequenced at the 5.8S ribosomal DNA and internal transcribed spacer 1 and 2. The 5.8S coding region is 163 bp, and has no sequence variations. The ITS1 and ITS2 noncoding regions have a little bit sequence variations, and those were further analysed by the methods of the analysis of variance (ANOVA), the analysis of sequence divergence and the phylogenetic analysis. The result of ANOVA showed no significant differences among individuals investigated. The analysis of sequence divergence with Kimura 2-parameter distance revealed that in-groups showed much less than 0.05 in absolute value among individuals, while two out groups more than 0.05, V. grypoceras and V. orientalis. This result appeared that the sequence divergence among in-groups was not yet occurred in the species level but situated at somewhere below the species level. In the phylogenetic analysis, two outgroups formed the basal clades in order. Five individuals in-groups formed a clade. The clade was, however, not very robust as around 50% in bootstrap value, suggesting that this result was not meaningful in the phylogenetic point of views.
Molecular taxonomic studies were conducted to evaluate interspecific relationships in Korean Viola 34 taxa including two Japanese populations using RAPD(randornly amplified polymorphic DNA), ISSR(inter simple sequence repeat) and PCR-RFLP(restriction fragment length polymorphism) analysis. Only six and four primers out of 40 arbitrary and 12 ISSR primers were screened for 34 taxa, and were revealed 70 (98.6%) and 28 (96.6%) polymorphic bands, respectively. Fifteen restriction endonucleases produced 80 restriction sites and size variations from the large single copy region of cpDNA, 16 (20%) of which were polymorphic. The separate analyses from the RAPD, ISSR and PCR-RFLP data were incongruent in the relationships among 34 taxa, but combined data was in accordance with previous infrageneric classification system based on morphological characters, especially the subsection and series level. Section Chamaemelanium placed between subsect. Patellares and Vagimtae of section Nomimium was not formed as a distinct group. Viola alb ida complex including three very closely related taxa was recognized independent group within subsect. Patellares in combined data tree. This result strongly suggested that they should be treated to series Pinmtae. RAPD analysis was very useful to clarify the interspecific relationships among the species of Korean Viola than ISSH and PCR-RFLP analyses.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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