To examine the production of steroids with potential oocyte maturation-inducing activity in the spotted flounder, Verasper variegatus, we have incubated post-vitellogenic oocytes (0.820.95mm in diameters) with radiolabeled pregnenolone and $17\alpha-hydroxyprogesterone$. The resulting metabolites were analyzed by thin layer chromatography (TLC) and high performance liquid chromatography (HPLC). The two main metabolites (progestogens) found in both incubations co-migrated with $17\alpha-hydroxy$, $20\alpha-dihydroprogesterone$$(17\alpha, 20\alpha OHP)$ and $17\alpha-hydroxy,\;$20\beta-dihydroprogesterone$ (17 a20{30HP). Additional chromatography by HPLC and TLC confirmed the presence of radioactive $17\alpha, 20\alpha OHP$ and a large amount of unknown metabolite. The present study did not reveal in vitro formation of $l7\alpha 20\beta OHP$. Although 1$l7\alpha 20\beta OHP$ was found in a small amount, the synthesis of this steroid suggests that it may play a role in regulating the oocyte maturation process in the spotted flounder.
Lee Jeong-Ho;Lee Sang-Jun;Kim Kyung-Kil;Kim Woo-Jin;Park Doo-Won;Park Jung-Youn
Fisheries and Aquatic Sciences
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제6권4호
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pp.180-186
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2003
The full-length cDNA encoding the pre-protein growth hormone (sfGH) from spotted flounder (Verasper variegatus) was amplified by the rapid amplification of cDNA ends (RACE) using degenerated oligonucleotide primers derived from conserved growth hormone sequences. It consists of 901 nucleotides in length, including the coding region of 609 nucleotides, 111 nucleotides of a 5' untranslated region, and 181 nucleotides of a 3' untranslated region. The conserved polyadenylation signal (AATAAA) lies 12 bases upstream from the poly (A) tail. The deduced amino acid sequence shows an open reading frame encoding a pre-protein of 203 amino acids and a putative signal peptide of 17 amino acids, suggesting that the mature hormone consists of 186 amino acids. The analyses of sfGH reveal some unique structural features. The repetitive sequences are located in the 5' untranslated region of sfGH cDNA and consist of tandem arrays of imperfect direct repeat monomers. Moreover, sfGH contains six Cys residues, as opposed to four or five in other GHs, and it is clearly distinguishable from olive flounder (Paralichthys olivaceus) GH, which lacks a region corresponding to residues 175-188 in alignment positions. It has important implications from an evolutionary standpoint, suggesting possible divergence among flatfishes.
넙치(Paralichthys olivaceus) 암컷과 범가자미(Verasper variegatus) 수컷간의 잡종을 유도하여 넙치, 범가자미 및 잡종을 대상으로 변태기 전인 부화후 25일째까지 자어의 생존율 및 성장을 비교 조사하였다. 실험 종료시 잡종의 생존율과 성장은 양친으로 사용된 두 종 중 넙치와 유사하였다(P>0.05). 부화자어의 형태에서 잡종은 난황의 길이 대 폭의 비에서 넙치와 좀 더 많이 닮았고, 수온 $17\pm1^{\circ}C$에서 유구가 완전히 소실되는 기간은 잡종이 18일, 넙치가 14일이었으며 범가자미에서는 유구가 관찰되지 않았다. 조사 결과 변태기전까지의 잡종은 그의 생존율 및 성장에서 범가자미 보다 넙치와 더 유사한 경향을 나타내었다(P>0.05).
범가자미, Verasper variegatus의 황단백 질을 증류수로 침전시킨 후 Sepharose CL-6B column chromatography에 의해 분리하였다. 조난황단백추출액에서 분리한 난황단백질이 암컷 특이 혈청단백질과 공통의 항원성을 가짐을 Ouchterony 면역확산 test와 면역전기영동으로 확인하였다. 분리한 난황단백질의 분자량은 약 550kD이었으며, 난황단백질을 구성하고 있는 subunits은 분자량이 각각 108, 85, 31kD인 3종의 major subunits와 103, 80kD인 2종의 minor subunits이었다. 분리한 난황단백질은 vitellin에 대한 항혈청을 이용하여 western blot으로 확인한 바, 면역화학적 반응을 나타냈다.
범가자미, Verasper variegatus의 vitellogenin (Vg)을 분리하기 위하여 수컷에 $etradiol-17\beta(E_2) $를 처리하여 Vg의 합성을 유도하여 SDS-PAGE와 western blot으로 확인 하였다. 분리된 Vg의 분자량은 175 kD 이었으며 암컷 특이단백질이었다. $E_2$ 처리한 수컷 혈청을 찬 증류수로 침전시킨후 Sepharose CL-6B column chromatography에 의해 Vg을 분리하였다. 분리한 Vg에 대한 항혈청을 만들어 특이성을 western blot으로 확인하였고, 또한 Vg를 대한 단클론항체를 만들기 위하여 분리한 Vg을 Balb/c에 면역시켜 비장세포와 NS1 myeloma 세포를 세포융합하여 hybridoma를 만들었다. 세포융합된 18개 clone중 효소면역측정법에 의해 Vg과 가장 반응성이 높은 clone을 4D6으로 명명하였고, 이에 대한 특이성을 $E_2$가 처리되지 않은 수컷 혈청, $E_2$가 처리된 수컷혈청과 분리한 Vg를 사용하여 western blot으로 확인하였다.
범가자미의 인위적인 번식제어를 목적으로 생식소 활성에 따른 혈중 vitellogenin (난황단백전구체)과 성 스테로이드 호르몬의 계절적 농도 변화를 조사하였다. 암컷에 있어서 혈중 vitellogenin의 농도는 난황축적이 활발한 11 월에 연중 최고치를 나타내다가 산란이 시작되는 12월에 감소하기 시작하면서 estradiol의 농도는 이 시기에 연중 최고치를 나타내었다(2.7ng/ml). 산란이 활발히 진행중인 1월에 혈중 estradiol 농도는 급격히 감소하여 5월까지 연중 매우 낮은 농도(0.2ng/ml)로 유지되었다. Testosterone도 estradiol과 유사한 경향을 보였다. 17$\alpha$-hydroxyprogesterone은 난소가 활성화되어 성장되는 시기를 제외하고는 뚜렷한 경향을 보이지 않았다. 수컷의 경우 testosterone과 11-ketotestosterone의 혈중농도는 12월에 최고치를 나타내었으며, 이 시기에 정자변태가 가장 활발하게 이루어지고 있음을 관찰하였다. 이후 완숙 및 방정기 (1월)에 이르러 이들의 농도는 급격히 감소하였다.
1992년 12월부터 1993년 12월까지 매월 1회씩 남해안에서 어획된 범가자미를 대상으로 연령과 성장을 조사하였다. 연령사정은 이식으로 하였으며, 윤문은 투명대에서 불투명대로 이행하는 경계로 하였다. 윤문은 2월부터 3월 사이에 연 1회 형성되었다. 이석경(R)에 대한 전장(TL)의 관계를 보면 암컷은 TL=18.0329R-11.6879, 수컷은 TL=15.1458R-5.6902였다. 전장(TL)에 대한 체중(BW)의 관계는 암컷은 $BW=0.0065TL^{3.2042}$, 수컷은 $BW=0.0146TL^{2.9620}$이었다. 연령(t)에 대한 체장(Lt)의 Von Bertalanffy 성장식은 암컷은$L_t=71.0783(1-e^{-0.3036(t-0.1173)})$, 수컷은 $L_t=57.4414(1-e^{-0.2931(t+0.1590)})$이었다. 채집된 표본 중 암컷은 6세, 수컷은 4세까지 있었지만 대부분 3세 이하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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