• Molecules and Cells
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• 제41권4호
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• pp.301-310
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• 2018

LysR-type transcriptional regulators (LTTRs) contain an N-terminal DNA binding domain (DBD) and a C-terminal regulatory domain (RD). Typically, LTTRs function as homotetramers. VV2_1132 was identified in Vibrio vulnificus as an LTTR that is a homologue of HypT (also known as YjiE or QseD) in Escherichia coli. In this study, we determined the crystal structure of full-length VV2_1132 at a resolution of $2.2{\AA}$, thereby revealing a novel combination of the domains in the tetrameric assembly. Only one DBD dimer in the tetramer can bind to DNA, because the DNA binding motifs of the other DBD dimer are completely buried in the tetrameric assembly. Structural and functional analyses of VV2_1132 suggest that it might not perform the same role as E. coli HypT, indicating that further study is required to elucidate the function of this gene in V. vulnificus. The unique structure of VV2_1132 extends our knowledge of LTTR function and mechanisms of action.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제17권2호
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• pp.234-243
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• 2007

Vibrio vulnificus is an opportunistic pathogen that causes septicemia in humans. To identify the genes associated with its pathogenicity, in vivo expression technology (IVET) was used to select genes specifically expressed in a host, yet not significantly in vitro. Random lacZ-fusions in the genome of V vulnificus strain MO6-24/O were constructed using an IVET vector, pSG3, which is a suicide vector containing promoterless-aph and -lacZ as reporter genes. A total of ${\sim}18,000$ resulting library clones were then intraperitoneally injected into BALB/c mice using a colony forming unit (CFU) of $1.6{\times}10^6$. Two hours after infection, kanamycin was administered at $200{mu}g$ per gram of mouse weight. After two selection cycles, 11 genes were eventually isolated, which were expressed only in the host. Among these genes, VV20781 and VV21007 exhibiting a homology to a hemagglutinin gene and tolC, respectively, were selected based on having the highest frequency. When compared to wild-type cells, mutants with lesions in these genes showed no difference in the rate of growth rate, yet a significant decrease in cytotoxicity and the capability to form a biofilm.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제25권8호
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• pp.1380-1389
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• 2015

Prx1, an AhpF-dependent 2-Cys peroxiredoxin (Prx), was previously identified in Vibrio vulnificus, a facultative aerobic pathogen. In the present study, transcription of the V. vulnificus prx1ahpF genes, which are adjacently located on the chromosome, was evaluated by analyzing the promoter and intergenic region of the two genes. Northern blot analyses revealed that transcription of prx1ahpF results in two transcripts, the prx1 and prx1ahpF transcripts. Primer extension analysis and a point mutational analysis of the promoter region showed that the two transcripts are generated from a single promoter. In addition, the 3' end of the prx1 transcript at the prx1ahpF intergenic region was determined by a 3'RACE assay. These results suggested that the prx1ahpF genes are transcribed as an operon, and the prx1 transcript was produced by transcriptional termination in the intergenic region. RNA secondary structure prediction of the prx1ahpF intergenic region singled out a stem-loop structure without poly(U) tract, and a deletion analysis of the intergenic region showed that the atypical stem-loop structure acts as the transcriptional attenuator to result in the prx1 and prx1ahpF transcripts. The combined results demonstrate that the differential expression of prx1 and ahpF is accomplished by the cis-acting transcriptional attenuator located between the two genes and thereby leads to the production of a high level of Prx1 and a low level of AhpF.

• 한국산학기술학회:학술대회논문집
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• 한국산학기술학회 2011년도 춘계학술논문집 2부
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• pp.937-940
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• 2011

물/유기용매의 혼합용액에 키토산을 분산시키고 이 현탁액에 글리시딜 트리알킬 암모늄염, 글리시딜 아릴염 등의 에테르 시약을 상온에서 현탁상태로 반응시켜 4급화 키토산을 제조하는 새로은 방법을 개발하였다. 이 방법으로 합성한 결과 수득율이 90%이상이었으며 후처리과정이 필요없었다. 4급화 키토산의 균에 대한 최소저지농도(MIC)를 조사한 결과 E. coli O157:H7 균주의 MIC는 0.007%-0.01%(70-100ppm)로 추정되었고 V. vulnificus 균주의 MIC는 0.005%(50ppm)정도이고 V.vulnificus 균주의 MIC는 0.007%(70ppm)이었다. 작물에 대한 항균성을 알아보기 위하여 4N-키토산의 항균 활성만이 검정되었는데, 4N-키토산은 고추 역병균인 P. capsici에 대하여 가장 높은 항균 활성을 보여 4,000 ppm에서부터 키토산 무첨가 대조구에 비하여 항균활성을 보였으며 P. capsici보다는 약하지만 잿빛곰팡이병균 B. cinerea에 대하여도 약간의 항균 활성을 보이고 있어, 16,000 ppm에서는 항균서이 뚜렷이 나타났으나 고추 탄저병균인 C. gloeosporioides에 대해서는 16,000 ppm 이라는 높은 농도에서도 항균 활성을 전혀 보이고 있지 않았다.

• Fisheries and Aquatic Sciences
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• 제6권3호
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• pp.105-109
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• 2003

Fifty four strains of pathogenic vibrios were isolated from the Gwangan Beach from May to October, 2002. The isolated vibrios were composed of 7 different species: Vibrio parahaemolyticus, V. cholerae non-O1, V. alginolyticus, V. vulnificus, V. hollisae, V. fluvialis, ane V. mimicus. In the detection rate, V. parahaemolyticus was most predominant as $46\%$(25/54). From the isolated strains, only 25 strains have hemolytic activity or 25 strains only proteolytic activity on agar plates. Eleven strains showed both hemolytic and proteolytic activity. No strains showed urease activity. All strains of V parahaemolyticus did not show hemolytic activity, while V. cholerae non-O1 strains showed $\beta$ hemolytic activity. Kanagawa phenomena of pathogenic vibrios did not accord with hemolytic activity of the culture supernatant at the late log phase. Some strains showed high hemolytic activity despite having proteolytic activity, but some weak hemolytic activities despite having no proteolytic activity.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제23권4호
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• pp.527-533
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• 2013

Polyclonal antibodies labeled with a tracer have been commonly used as secondary antibodies in immunochemical assays to quantify the concentration of antibody-antigen complexes. The majority of these antibodies conjugated with a tracer are commercially available, with the exception of few untouched targets. This study focused on the production and application of mouse anti-quail IgY as an intermediate antibody to link between quail egg yolk IgY and goat anti-mouse IgG-HRP as primary and secondary antibodies, respectively. Subsequently, the produced mouse anti-quail IgY was labeled with horseradish peroxidase (HRP) and its efficiency on enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) was compared with that of commercial rabbit anti-chicken IgY-HRP. As an intermediate antibody, mouse anti-quail IgY was successfully produced with good affinity and sensitivity (1:10,000) to the primary and secondary antibodies. Subsequently, mouse anti-quail IgY was effectively conjugated with HRP enzyme, resulting in a secondary antibody with good sensitivity (1:10,000) to quail anti-V. parahaemolyticus and V. vulnificus IgY. The detection limit was $10^5$ CFU/ml for both V. parahaemolyticus and V. vulnificus. The efficiency of the produced conjugate to detect quail IgY on ELISA was comparable to that of the commercial rabbit anti-chicken IgY-HRP, and hence the produced and labeled mouse anti-quail IgY-HRP can be used as a secondary antibody to detect any antibody produced in quail.

• 생명과학회지
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• 제22권2호
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• pp.245-250
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• 2012

Vibrio속의 core 균주(Vibrio alginolyticus, Vibrio parahaemolyticus)를 포함하여 총 6 종의 Vibrio 균주(V. fluvialis, V. proteolyticus, V. vulnificus, V. mimicus)와 Grimontia (Vibrio) hollisae의 16S rDNA를 PCR 증폭하여 Alu I, Cfo I, Dde I, Hae III, Msp I, Rsa I의 6 종의 제한효소를 처리 후 RFLP 분석을 수행하였다. 2 종의 core 균주와 V. proteolyticus는 4 종의 제한효소(Cfo I, Dde I, Msp I, Rsa I)에서 동일한 제한효소 패턴을 나타내었다. 제한효소의 패턴의 조합에 의해 6 종의 Vibrio 종은 6 개의 RFLP type으로 구분되었다. 특히 Alu I의 경우, 실험된 6 종의 Vibrio속에 대하여 각기 다른 6 개의 종 특이적 RFLP type을 나타내었다. 제한효소 패턴에 근거하여 작성한 덴드로그램에서 Vibrio core group 균주인 V. alginolyticus 와 V. parahaemolyticus는 90% 이상의 매우 높은 유사도를 나타내었다. 반면 Grimontia hollisae는 실험된 모든 제한효소 패턴에서 Vibrio속 세균과는 분명히 구분되는 RFLP type을 나타내었다. 따라서 PCR-RFLP는 제한효소를 적절히 선택한다면 Vibrio 속 세균의 신속한 구분에 여전히 유용하다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제36권1호
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• pp.6-11
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• 2008

방사선 조사 후에 생존한 병원성 미생물의 안정성을 연구하기 위하여 패혈증을 일으키는 Vibrio vulnificus ATCC 29307의 병원성 인자인 metalloprotease (vvp) 유전자의 발현과 효소 활성의 변화를 감마선 조사 후에 시간대별로 확인하였다. V. vulnificus는 다른 병원성 미생물들에 비하여 비교적 높은 방사선 감수성을 보였으며 방사선 조사 직후 유도기를 거친 후에 성장이 다시 시작되었다. 감마선을 조사하였을 경우 vvp 유전자의 발현은 비조사구에 비하여 $3{\sim}6$시간 정도 빨리 유도되었으나 총 metalloprotease의 활성은 감소하였다. 또한, vvp 유전자의 발현이 최대로 증가한 시점에서 metalloprotease의 활성을 비교한 결과 감마선이 조사된 균의 경우 감마선이 조사되지 않은 균에 비하여 약 $70{\sim}80%$ 수준으로 생산량이 감소하는 것을 알 수 있었다. 결론적으로, 감마선 조사 후 생존한 Vibrio vulnificus에서 병원성 인자 (vvp)의 발현 및 활성은 증가하지 않았으며 본 연구결과는 감마선 조사 식품의 미생물학적 안정성을 보여주는 기초 자료중의 하나로 활용될 수 있을 것으로 판단된다.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제15권2호
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• pp.173-175
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• 2000

V. parahaemolyticus 종류들이 gelatin분해 확인 실험에서 큰 clear zone을 형성했고, V. alginolyticus 분리균주도 V. parahaemolyticus와 비슷한 clear zone을 형성했다. V. fluvialis KCTC 2473은 clear zone을 형성하지 못했다. Hemolytic activity측정 실험에서는 V. parahaemolyticus 분리균주(2)가 가장 활성이 크게 나타났고, V. parahaemolyticus ATCC 17802, V. parahaemolyticus 분리균주(1)과 V. mimicus ATCC 33653도 높은 활성을 나타냈으며, 나머지 다른 비브리오균은 활성이 나타나지 않았다. Azocasein분해 활성 실험에서는 V. parahaemolyticus ATCC 17802, 분리균주(1), 분리균주(2)는 200EU/m1전후로 활성이 높게 나타났고, 나머지는 110EU/ml전후로 활성이 상대적으로 낮게 나타났다.

• 환경생물
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• 제17권4호
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• pp.439-448
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• 1999

1997년 11월부터 1998년 6월까지 총 4회에 걸쳐 군산인근 해역을 대상으로 Vibrio 속의 분포와 특성을 조사하였고, 분리동정된 Vibrio 속 3종(V. anguillarum, V. vulnificus, V, metschnikovii)을 대상으로 해수에서 수온 변화에 따른 생존을 관찰하였다. 조사 기간 중 총 해양 종속영양 세균의 분포는 평판도말법으로는 1.2$\pm$0.6$\times$$10^3$~2.0$\pm$1.5$\times$$10^4$CFU ml­$^1$을 나타냈으며, 형광현미경에 의한 직접측정법으로는 6.0$\pm$4.0$\times$$10^{5}$ ~1.9$\pm$1.5$\times$$10^{7}$ cells ml­$^1$의 범주에서 변화하여 측정방법에 따라 커다란 차이를 보였다. 해양 Vibrio의 분포는 1$\times$10~6$\pm$2.2$\times$$10^2$CFU ml­$^1$의 범주에서 변화하여 전반적으로 총 해양종속영양 세균의 수에 대하여 차지하는 비율은 0.l~6%였다. 최종 분리된 51균주를 Biolog Identification System$^{TM}$에 의해서 동정한 결과 V. mediterranei(11균주), V. anguillarum(13균주), V. netschnikovii(5균주), V. parahaemolyticus(5균주)등이 우점속으로 밝혀졌다. 분리 동정된 51균주들 간의 통계학적 유사도를 70%이상을 기준으로 grouping한 결과 26 group으로 나뉘어 본 조사해역에서 Vibrio 속의 다양성을 간접적으로 보여 주고 있다. 동정된 균주들에서 plasmid의 존재를 확인한 결과 65%에 해당하는 33균주가 plasmid를 갖고 있었으며 그 크기는 12kb이상으로 나타났다. 또한 분리된51균주들에 대하여 7종의 항생제 (gentamicin, ampicillin, chlorarnphenicol, streptomycin, kanamycin, tetracycline, carbenicillin)에 대한 내성을 측정한 결과 51균주들 중 96%가 한 종류 이상의 항세균제에 대하여 내성을 나타냈다. 분리 동정된 균주들 중 V. angulliarum, V. vulnificus, V. metschnikovii를 대상으로 여과된 해수에 접종시켜 생존율을 4, 15, $25^{\circ}C$에서 30일간 측정한 결과 15$^{\circ}C$에서 가장 높은 생존율을 보였다.