Vibrio extracellular metalloprotease (vEP), secreted from Vibrio vulnificus, shows various proteolytic function such as prothrombin activation and fibrinolytic activities. Premature form of vEP has an N-terminal (nPP) and a C-terminal (C-ter100) region. The nPP and C-ter100 regions are autocleaved for the matured metalloprotease activity. It has been proposed that two regions play a key role in regulating enzymatic activity of vEP. Especially, C-ter100 has a regulatory function on proteolytic activity of vEP. C-ter100 domain has been cloned into the E. coli expression vectors, pET32a and pGEX 4T-1 with TEV protease cleavage site and purified using gel-filtration chromatography followed by affinity chromatography. To understand how C-ter100 modulates proteolytic activity of vEP, structural studies were performed by heteronuclar multi-dimensional NMR spectroscopy. Backbone $^1H$, $^{15}N$ and $^{13}C$ resonances were assigned by data from standard triple resonance and HCCH-TOCSY experiments. The secondary structures of vEP C-ter100 were determined by TALOS+ and CSI software based on hydrogen/deuterium exchange. NMR data show that C-ter100 of vEP forms a ${\beta}$-barrel structure consisting of eight ${\beta}$-strands.
Endotoxin from the cell wall of marine V. vujnificus was .extracted using the hot phenol-water method, injected endotoxin into rat, and tested the toxic effect of endotoxin on the blood component In rat blood. The results showed that blood glucose, blood urea nitrogen, white blood cell, and reticulocyte were Increased and red blood cell was the same as the number of control group(normal blood), but platelet was decreased. Above results suggested that endotoxin induced a malfunction of liver and that the Increase of white blood cell was for the removal of foreign toxic substance.
어패류를 날 것으로 즐겨먹는 우리나라와 일본에서는 매년 여름철이면 병원성 비브리오균에 의한 식중독 사고가 많이 발생한다. 현재까지 알려져 있는 40 여종의 비브리오균 중 12종이 사람에게 질병을 일으키는 것으로 알려져 있으며, 우리나라에서 주로 문제를 일으키는 것은 Vibrio parahaemolytius, V. vulnificus 등 이다. 그러나 최근에는 V. cholerae non-Ol의 병원성에 관한 연구도 많으며, 특히 2001년에는 우리나라에서 발생율이 희박하던 V. cholerae Ol에 의한 환자가 140명을 상회하는 대형사고가 발생하기도 하였다. (중략)
LIM MOON SUB;LEE MYUNG HEE;LEE JEONG HYUN;JU HYUN-MOK;PARK NA YOUNG;JEONG HYE SOOK;RHEE JEE EUN;CHOI SANG HO
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제15권3호
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pp.616-625
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2005
It is likely that maltose could provide a good substrate for the bacteria in the intestine, when the pathogenic bacteria invade and colonize in human gut. For better understanding of this organism's maltose metabolism, a mutant that was not able to grow with maltose as a sole carbon source was screened from a library of mutants constructed by a random transposon mutagenesis. By a transposon-tagging method, malPQ genes encoding a maltodextrin phosphorylase and a 4-${\alpha}$-glucanotransferase, were identified and cloned from Vibrio vulnificus. The deduced amino acid sequences of malPQ from V. vulnificus were 48 to $91\%$ similar to those of MalP and MalQ reported from other Enterobacteriaceae. Functions of malPQ genes were assessed by the construction of mutants whose malPQ genes were inactivated by allelic exchanges. When maltose was used as the sole carbon source, neither malP nor malQ mutant was able to grow to a substantial level, revealing that the MalP and MalQ are the only enzymes for metabolic utilization of maltose. The malQ mutant exhibited decreased adherence toward intestinal epithelial cells in vitro, but there was no difference in the $LD_{50}s$ of the wild-type and the malQ mutant in mice. Therefore, it appears that MalQ is less important in the pathogenesis of V. vulnificus than would have been predicted by considering maltose as a most common sugar in the intestine, but not completely dispensable for virulence in mice.
국내 연안의 어패류, 해구 및 환자 등으로부터 Vibrio vulnificus를 분리동정하여 생화학적 성상, 생장조건, 혈천형, 약제 감수성 시험 등 세균학적 특성을 밝혔다. V. vulnificus 균의 생화학적 성상은 유당을 발효(95%)하고 서당은 발효 (4%)않은 균주가 대부분이었으며, ornithine 발효능, gelatine 액화능, mannitol 분해능 등이 다른 연구자들과 동일한 결롸를 나타내지 않았다. 따라서 이들 성상이 V. vulnivicus 동정에 그리 유용하지 않다. o 혈청형은 자연계 분리균주의 경우 o2 혈청형이 제일 많았고 (24%) 환자 분리균주의 경우 04 균(42%)이 제일 많았다. V. vulnificus 의 최적 생상조건은 염농도는 306%였고, 온도는 25-35.deg.C, pH는 8로 나타났다. V. vulnificus균은 chloramphenicol, erythromycin, tetracycline, ampicilin 에 높은 감수성을 지니고 있었고 gentamycin 에 대하여는 내성을 가진 것으로 나타났으며, 자연계 분리균주가 환자 분리균주보다 이들 항생제에 더 높은 감수성을 지니고 있었다. chelating agent EDTA가 V. vulnificus에 대하여 생장억제효과가 있음이 밝혀졌으나 치사적으로 작용치는 않았다.
해마다 반복되는 식중독 발생을 예방하기 위한 한 접근 방법으로써 시판품의 다양한 도마(항균처리 plastic 재질 3종, 항균처리 않은 plastic재질 1종, 나무재질(홍송, 고무나무, 편백나무, 박달나무, 대나무)를 대상으로 세균성 식중독의 주요한 원인균인 Escherichia coli O157:H7, S. Typhimurium, V. vulnificus, V. cholerae, V. parahaemolyticus 및 S. aureus의 6종 미생물에 대하여 저지환 시험과 real-time PCR을 이용한 정량법을 이용하여 항균력을 평가하였다. Plastic 재질의 도마들은 E. coli O157:H7, S. Typhimurium, S. aureus의 식중독균에 대해 항균력을 나타내었고, 항균력이 표시된 도마와 표시되어있지 않은 도마들 간의 항균력 차이는 크지 않았다. 나무 재질의 도마는 V. vulnificus에 대해서 항균력을 나타내었고, 5종의 나무 재질의 도마들 중 대나무 도마는 E. coli O157:H7, S. Typhimurium, V. cholerae, V. vulnificus의 4종의 균에 대해 저지환 시험에서 항균력을 나타내었으며, real-time PCR로 정량한 결과에서는 S. aureus에 대해 생육억제력을 나타내어 5종의 식중독균에 대하여 가장 광범위한 항균력을 보였다. 이는 대나무에 함유된 polyphenol과 organic acid 등의 작용으로 추측된다. 항균력이 있다고 표시된 도마에서도 시험 대상 균들 중 일부에 대해서만 항균력이 나타났으며, 재질별로 항균력에 차이가 나타났던 결과들로부터 도마에 대한 위생상의 지나친 신뢰는 큰 위험을 초래할 가능성이 있음을 인식하고, 조리의 최종관리자들에 의한 일상적인 철저한 관리가 필요하다고 판단된다.
Kim, In-Hwang;Kim, Byung-Soo;Lee, Kyung-Shin;Kim, Ik-Joong;Son, Jee-Soo;Kim, Kun-Soo
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제21권12호
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pp.1228-1235
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2011
We compared the gene expression among four clinical and five environmental V. vulnificus isolates, using a cDNA microarray containing 131 genes possibly associated with pathogenicity, transport, signal transduction, and gene regulations in the pathogen. cDNAs from total RNAs of these isolates were hybridized into the cDNA microarray using the cDNA of the wild-type strain MO6-24/O as a reference. We focused on selecting differentially expressed (DE) genes between clinical and environmental isolates using a modified t-statistic. We could detect two statistically significant DE genes between virulent isolates and less-virulent isolates with a marginal statistical significance (p-value of 0.008). These were genes putatively encoding pilin and adenlyate cylase. Real time-PCR confirmed that these two selected genes transcribed in significantly higher levels in virulent isolates than in less-virulent isolates. Mutants with lesions in the gene encoding pilin showed significantly higher $LD_{50}$ values than that of wild type.
VvpM, one of the extracellular metalloproteases produced by Vibrio vulnificus, induces apoptotic cell death via a pathway consisting of ERK activation, cytochrome c release, and activation of caspases-9 and -3. VvpM-treated cells also showed necrotic cell death as stained by propidium iodide (PI). The percentage of PI-stained cells was decreased by pretreatment with Necrostatin-1, indicating that VvpM-mediated cell death occurs through necroptosis. The appearance of autophagic vesicles and lipidated form of light-chain-3B in rVvpM-treated cells suggests an involvement of autophagy in this process. Therefore, the multifarious action of VvpM might be one of the factors responsible for V. vulnificus pathogenesis.
서울시를 비롯한 6개 도시의 음식점과 활어를 판매하는 어시장 등에서 활어조에 사용하는 해수에 대하여 병원성 비브리오균의 분포, 이화학적특성 및 위생지표세균 등 환경인자와의 관계를 비교하였다. 시험해수에서 전염병균인 Vibrio cholerae O1은 전혀 검출되지 않았고, V. parahaemolyticus는 가장 빈번한 검출되었는데 검출율은 69.2%이었다. 그리고 V. vulnificus 및 V. cholerae non-O1 등 병원성 비브리오균이 검출된 활어조의 해수는 그렇지 않은 해수에 비하여 수온과 탁도는 높았고, 염분과 pH는 낮았으며 생균수, 대장균군 및 분변계 대장균이 휠씬 높게 검출되어 이러한 환경인자들과의 관련성이 시사되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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