Vegetative compatibility groups (VCGs) are determined for many fungi to test for the ability of fungal isolates to undergo heterokaryon formation. In several fungal plant pathogens, isolates belonging to a VCG have been shown to share significantly higher genetic similarity than those of different VCGs. In this study we sought to examine the relationship between VCG and genetic similarity of an important cool season turfgrass pathogen, Sclerotinia homoeocarpa. Twenty-two S. homoeocarpa isolates from the Midwest and Eastern US, which were previously characterized in several studies, were all evaluated for VCG using an improved nit mutant assay. These isolates were also genotyped using 19 microsatellites developed from partial genome sequence of S. homoeocarpa. Additionally, partial sequences of mitochondrial genes cytochrome oxidase II and mitochondrial small subunit (mtSSU) rRNA, and the atp6-rns intergenic spacer, were generated for isolates from each nit mutant VCG to determine if mitochondrial haplotypes differed among VCGs. Of the 22 isolates screened, 15 were amenable to the nit mutant VCG assay and were grouped into six VCGs. The 19 microsatellites gave 57 alleles for this set. Unweighted pair group methods with arithmetic mean (UPGMA) tree of binary microsatellite data were used to produce a dendrogram of the isolate genotypes based on microsatellite alleles, which showed high genetic similarity of nit mutant VCGs. Analysis of molecular variance of microsatellite data demonstrates that the current nit mutant VCGs explain the microsatellite genotypic variation among isolates better than the previous nit mutant VCGs or the conventionally determined VCGs. Mitochondrial sequences were identical among all isolates, suggesting that this marker type may not be informative for US populations of S. homoeocarpa.
Pigments and thylakoid membrane proteins were investigated in wild type and PS I- mutants from Synechocystis sp. PCC6803 Comparing morphological features, B2 was less fluorescent than the other strains. The contents of chlorophyll a were propotional to the FNR activity in thylakoid membrane. The FNR activity of mutants was lower than that of wild type. In the result of pigments analysis, mutants had smaller cholophyll a than that of wild type. The major carotenoid was found to he $\beta$-caroene, but aeaxanthin was barely detected in thylakoid membrane of mutants. The polypeptide, 14.8kD was detected by electrophoresis in mutants. It was considered to be the modification of 15.4kD in wild type. Membrane polypeptides of 17.6 and 19.7kD were not detected in mutants. In the result of western blotting, subunit I was detected in all strains, but subunit II was barely detected in mutants. Subunit II was not detected in B2 at all. In view of the results so far achieved, the changes of contents of chlorophyll and zeaxanthin were affected by the defficiency or modification of functional domain in subunit I. Also the modification in subunit I affected the subunit II- binding site in PS I. As the result, efficiency of photosynthesis was decreased. Key words: Synechoystis sp. PCC6803, PS I - mutant, Photosynthetic efficiency, Pigment,Thylakoid membrane proteins, Subunit I, II.
The influence of respiration on photosythetic electron transport were investigated in the Wid type and psaB mutants from Syneehocystis sp. PCC6803. The amount of glucose uptake in the wild type was proportional to the glucose concentration added in wild type and less than that of psaB mutants in the dark. It was suggested that psaB mutants more depend on the glucose than the wild type. It was investigated how the activities of isocitrate dehydrogenase(IDH) and glucose-6-phos-phate dehydrogenase(G6PDH) were changed. The activities of IDH were very low. While, the ac-tivities of G6PDH were much higher than that of IDH. These results agree to the reports that ex-ogenous glucose was dismilated aerobically via Oxidative Pentose Phosphate Pathway in heterotrophic cyanobacteria. PsaB mutants showed high G6PDH activity in the presence of glucose as well as in the dark and high respiratory activities especially in the dark. It was also investigated how photosynthetic electron transport activities were changed. PsaB mutants showed higher photosynthetic electron tranasport activities than wild type in the presence of glucose as well as in the dark. In the results, it was proposed that photosynthetic electron transport between PS I and PS U was complemented by respiratory electron transport through the NADPH generated by Dxidative Pentose Phophate Pathway in psaB mutant from Synechocystis sp. PCC6803. Key words: Photosynthetic electron transport, Respiration, Synechoystis sp. PCC6803, psaB mutant, Glucose uptake, IDH, G6PDH, Respiratory electron transport activity.
토양 방선균 Streptomyces scopuliridis KR-001의 개량 균주인 N-29 균주 배양 여액의 돼지풀에 대한 방제효과를 온실 및 포장조건에서 수행하여 돼지풀 방제제 후보소재로서의 가능성을 검토하였다. N-29 균주 배양 여액은 온실조건에서 돼지풀초 중 후기 경엽처리 시 처리된 농도범위에서 대부분 완전 방제되었으며, 자연상태에서 발생한 돼지풀에 대해서도 매우 탁월한 방제효과를 나타내었다. 선발 균주 N-29 배양 여액의 돼지풀에 대한 살초특성은 매우 속효성일 뿐만 아니라 약효지속기간도 매우 길게 유지되었으며, 외형적으로 발현되는 주요 증상으로는 처리 초기에 황화 증상이 발현되었다가 고사로 진행되어 궁극적으로 낙엽화되어 사멸되었다. 토양 방선균 N-29 균주는 친환경적인 생태계교란 광엽잡초 돼지풀 방제제로서 유용하게 활용할 수 있을 것으로 기대된다.
동전마름병을 일으키는 Sclerotinia homoeocarpa는 한국에서 가장 일반적인 한지형 잔디 병원균이다. 경기도, 충청남도, 전라북도, 경상북도 등 다양한 지역에서 분리한 13개 균주로부터 유도된 nit 변이균주를 이용하여 의한 체세포화합성군(vegetative compatibility group, VCG) 평가가 이루어졌다. 돌연변이주는 질소동화작용에 근거하여 nit1, nit2, nit3, NitM 등 4가지 유형으로 분류되었다. 균주간에 돌연변이주 발생정도는 크게 차이가 있었으며 최대 15개의 변이주를 생산한 균주가 있는 반면에 전혀 형성하지 못한 균주도 존재하였다. 선택배지에서 4가지 돌연변이주 유형 중에 nit1과 NitM의 발생빈도(80%)가 높았으며, nit2와 nit3은 발생빈도가 매우 낮았다. 한 개의 큰 체세포화합성군 그룹과 4개의 작은 그룹이 18개 돌연변이주로부터 결정되었다. Nit 변이균주를 이용하여 의한 VCG 평가는 매우 효율적이었으며, 향후 한국의 Sclerotinia homoeocarpa균의 효율적 관리를 위한 생태학적 역학적인 면을 연구하기 위해서는 보다 많은 지역으로부터 분리된 균주의 평가가 필요하다.
Polymorphic bands of two fine-leaf zoysiagrass mutants (CNU 70-1, CNU 70-2) induced via a gamma-ray irradiation on seeds of Zoysia japonica were obtained by using randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) primers. The genotype-specific fragments were then converted into PCR-based sequence characterized amplified region (SCAR) markers, which are now amenable to detecting them among other zoysiagrass species widely noticeable in Korea. The CNU 70-1-specific primer set amplified about 900 bp successfully, while the CNU 70-6 marker produced the expected 1,500 bp band, by which those markers were nominated by CNU 70-1_900 and CNU 70-6_1500 SCARs, respectively. The developed SCAR markers can be an applicable tool in sod industry where illegal appropriation hampers breeder's right and profits due to the turfgrass plant vegetatively propagating.
광합성 전자전달저해제의 탐색을 위한 biorational biorational screening 방법으로 광합성 박테리아의 일종인 cyanobacteria의 표준형과 $D_1$단백질의 구성 아미노산이 변환된 변이주 Di-1, G-264, Di-22, TRY-5를 사용하여 기존 약제의 혼합효과와 몇가지 합성화합물의 Hill반응 저해활성을 측정 조사하였고, 또한 시금치로 부터 분리한 chloroplast와 cyanobacteria로 부터 분리한 thylakoid membrane에 대한 기존 제초제의 반응성을 조사하였다. 1. 광합성억제형 제초제에 대한 반응성 비교에서 cyanobacteria로 부터 분리한 thylakoid membrane이 시금치로 부터 분리한 chloroplast보다 약제에 대하여 민감한 반응을 나타내어 광합성 전자전달저해제의 탐색을 위한 재료로 보다 적합하였다. 2. Diuron에 대하여 wild type보다 Di-22와 D-5 변이주는 각각 약 2,000배와 800배의 저항성을 나타내었고 atrazine에 대하여는 G-264 변이주만이 약 1,000배의 저항성을 나타내었으며, 기타 네 약제에 대하여는 뚜렷한 저항성을 나타내는 변이주가 없었다. 3. D1 단백절의 264번 위치의 serine이 다른 아미노산으로 치환된 Di-1과 D-22 및 G-264 변이주에 대한 diuron과 atrazine의 혼합처리 효과를 검토한 결과 상호 경합적으로 작용하였으며 그 정도는 G-264 변이주에 대해서 가장 뚜렷하게 나타났다. 그러나 diurone과 atrazine의 혼합처리에 의한 thermoluminescence band의 변화는 인정할 수 없었다. 4. 변이주 Di-1과 D-22는 dinoseb에 대해서 저항성을 나타내지 않았으나. dinoseb과 diuron의 혼합처리시 diuron에 대한 저항성이 크게 약화되었다.
광합성 전자전달저해제의 탐색을 위한 biorational screening 방법으로 광합성 박테리아의 일종인 cyanobacteria의 표준형(wild type)과 $D_1$ 단백질의 구성 아미노산이 변환된 변이주 Di-1, G-264. Di-22 등 4종을 사용하여 신규합성 화합물에 대한 광합성 전자전달저해활성을 조사하여 구조-활성간의 특성을 검토하였고, 이들의 thermoluminescence band를 이용하여 결합부위를 비교하였다. 1. Phenol 화합물(E-series)들은 cyanobacteria를 이용한 광합성 전자전달 저해활성의 양상을 볼 때 diuron보다는 dinoseb과 비슷하였다. 2. 합성한 Phenol화합물에서 나타난 구조활성간의 특정으로는 치환기의 phenyl ring에 C1이 치환되지 않은 경우 Hill반응 저해활성이 나타나지 않았고, 화합물에 있는 두개의 ring을 연결하는 bridge의 길이가 길어질수록 Hill반응 저해활성은 약하게 나타났다. 3. Triazine 화합물(T-series)의 경우 T-27, T-28화합물은 대조약제 atrazine보다 각각 10, 30배 강한 저해활성을 나타내었고, 변이주 G-264에 대 한 저항성 비율이 atrazine보다 더욱 크게 나타나 이들 화합물들의 결합부위가 $D_1$ 단백질의 264번 위치와 깊은 관계가 있을 것으로 생각되었다. 4. Triazine 화합물에 있어서 치환기 -C-NH-는 전자전달계에 중요한 작용기로 생각되었다. 5. Thermoluninescence band를 이용하여 결합부위를 비교할 수는 있었지만, 명료하게 구분되지 않았다.
본 연구에서는 들잔디와 돌연변이체에서 Glyphosate 내성 관련 유전자인 EPSPS를 코딩하는 cDNA를 분리하여, 시퀸스 비교분석과 발현 양상 차이 등에 관하여 조사하였다. 5'/3' RACE를 통하여 밝혀진 EPSPS의 cDNA는 각각 1176bp의 open reading frame으로 이루어져 있으며 391개의 아미노산을 코딩하고 있었다. 이는 보고된 다른 EPSPS 유전자들과 높은 유사성을 가지고 있다. Genomic southern 결과 들잔디 내에 EPSPS 유전자는 단일copy로 존재하였다. Wild type과 제초제 내성 변이체의 EPSPS 유전자는 6개의 아미노산 시퀀스의 차이를 보였으며 기존에 보고된 EPSPS active site에서 시퀀스의 차이를 나타냈다. 한편 glyphosate의 독성기작의 하나인 EPSPS 효소활성 저해 작용을 알아본 결과, 내성 개체에서 높은(1.5배 이상) EPSPS 활성을 확인할 수 있었다. Northern 분석과 RT-PCR로 제초제 처리 시간에 따른 EPSPS의 발현량을 살펴본 결과, 제초제 처리 후 시간이 경과할수록 발현량이 증가하다가 7일 이후에는 감소하였고, wild type에 비해 glyphosate 내성 선발개체에서 전체적인 발현량이 높음을 알 수 있었다. 본 연구 결과 선발된 glyphosate 내성 돌연변이체는 높은 EPSPS 효소활성 증가 및 EPSPS active site의 아미노산 시퀀스 변화를 통해 원할하고 지속적인 방향족 아미노산의 합성이 가능한 것으로 보여졌다. 본 실험을 통해 얻어진 glyphosate 내성 잔디 돌연변이체와 방법은 앞으로 유용한 제초제 저항성 돌연변이 품종개발 연구에 활용될 수 있을 것으로 기대된다.
단일식물인 수수의 개화에 지베렐린이 관여하는지를 조사하기 위하여 지베렐린 생합성 억제제인 ancymidol을 처리한후 내생 지베렐린의 함량과 개화 및 생육에 미치는 영향을 조사한 결과는 다음과 같다. 1. 지베렐린 생합성 억제제 ancymidol은 공시한 두 품종 모두의 생육을 억제함과 동시에 개화를 지연시켰다. 2. $GA_3$를 Ancymidol과 동시에 처리할 경우 생육억제와 개화지연이 모두 회복되어 지베렐린이 수수의 개화에 관여함을 보였다. 3. Ancymidol 10ppm은 수수의 모든 지베렐린 ($GA_{12}$, $GA_{53}$, $GA_{44}$, $GA_{19}$, $GA_{20}$, $GA_1$ 합성을 현저히 억제하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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