• BMB Reports
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• 제29권4호
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• pp.277-285
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• 1996

In Pseudomonas fluorescens grown on malonate as sole carbon source, acetyl-CoA synthetase was induced, suggesting that malonate is metabolized through acetate and then acetyl-CoA. Acetyl-CoA synthetase was purified 18.6-fold in 4 steps to apparent homogeneity. The native molecular mass of the enzyme estimated by a native acrylamide gel electrophoresis was 130 kDa. The enzyme was composed of two identical subunits with a molecular mass of 67 kDa. Optimum pH was 70. The acetyl-CoA synthetase showed typical Michaelis-Menten kinetics for the substrates, acetate, ATP and CoA, whose $K_m$ values were calculated to be 33.4, 74.8, and 40.7 mM respectively. Propionate. butyrate and pentanoate were also used as substrates by the enzyme, but the rate of the formation of the CoA derivatives was decreased in the order of the increase in carbon number. The enzyme was inhibited by the group-specific reagents diethylpyro-carbonate, 2,3-butanedione, pyridoxal-5'-phosphate and N-bromosuccinimide. In the presence of substrates the inactivation rate of the enzyme, by all of the group-specific reagents mentioned above decreased, indicating the presence of catalytically essential histidine, arginine, lysine and tryptophan residues at or near the active site. Preincubation of the enzyme with ATP, $Mg^{2+}$ resulted in the increase of its susceptibility to diethylpyrocarbonate, suggesting that ATP, $Mg^{2+}$ may induce a conformational change in the active site exposing the essential histidine residue to diethylpyrocarbonate. The enzyme was acetylated in the presence of acetyl-CoA, indicating that this is one of acyl-enzyme.

• 한국식품과학회지
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• 제18권4호
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• pp.270-277
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• 1986

Ammonium sulfate 염분획과 CM-cellulose chromatography로 Fig latex에서 ficin을 분리하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 분리한 crude ficin을 전기영동한 결과 main band 와 3개의 minor band로 나타났으며 main peak의 정제에서 얻은 ficin은 단일 band로 나타났다. 분리한 ficin의 pH 및 열에 대한 영향을 PH7.0, $60^{\circ}C$에서 최적 작용을 나타내었다. 분리한 ficin의 pH에 대한 안정성은 pH $2{\sim}8$로 비교적 넓은 범위로 나타났고 열에 대한 안정성은 $0{\sim}55^{\circ}C$의 범위로 안정성이 나타났다. 분리한 ficin의 분자량은 19500으로 나타났다. 산성 아미노산 21.8%. 염기성 아미노산 3.5%, 중성아미노산74.7%로 나타났으며 cystine과 tryptophan을 제외한 아미노산 잔기수는 174로 나타났다.

• Bulletin of the Korean Chemical Society
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• 제27권4호
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• pp.549-555
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• 2006

Acetohydroxyacid synthase (AHAS, EC 2.2.1.6 also referred to as acetolactate synthase) catalyzes the first common step in the metabolic pathway leading to biosynthesis of the branched-chain amino acids in plants and microorganisms. Due to its presence in plants, AHAS is a target for the herbicides (sulfonylurea and imidazolinone), which act as potent inhibitors of the enzyme. Recently, we have shown [J. Kim, D.G. Baek, Y.T. Kim, J.D. Choi, M.Y. Yoon, Biochem. J. (2004) 384, 59-68] that the residues in the “mobile loop” 567-582 on the C-termini are involved in the binding/stabilization of the active dimer and ThDP (thiamin diphosphate) binding. In this study, we have demonstrated the role of the W573 in the mobile loop of the C-termini of tobacco AHAS. The substitution of this W573 residue caused significant perturbations in the activation process and in the binding site of ThDP. Position W573 plays a structurally important role in the binding of FAD, maintaining the enzyme active site in the required geometry for catalysis to occur. In here we propose that the tryptophan at position 573 is important for the catalytic process.

• Molecules and Cells
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• 제43권5호
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• pp.469-478
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• 2020

Hepatitis C virus (HCV) propagation is highly dependent on cellular proteins. To identify the host factors involved in HCV propagation, we previously performed protein microarray assays and identified the LIM and SH3 domain protein 1 (LASP-1) as an HCV NS5A-interacting partner. LASP-1 plays an important role in the regulation of cell proliferation, migration, and protein-protein interactions. Alteration of LASP-1 expression has been implicated in hepatocellular carcinoma. However, the functional involvement of LASP-1 in HCV propagation and HCV-induced pathogenesis has not been elucidated. Here, we first verified the protein interaction of NS5A and LASP-1 by both in vitro pulldown and coimmunoprecipitation assays. We further showed that NS5A and LASP-1 were colocalized in the cytoplasm of HCV infected cells. NS5A interacted with LASP-1 through the proline motif in domain I of NS5A and the tryptophan residue in the SH3 domain of LASP-1. Knockdown of LASP1 increased HCV replication in both HCV-infected cells and HCV subgenomic replicon cells. LASP-1 negatively regulated viral propagation and thereby overexpression of LASP-1 decreased HCV replication. Moreover, HCV propagation was decreased by wild-type LASP-1 but not by an NS5A binding-defective mutant of LASP-1. We further demonstrated that LASP-1 was involved in the replication stage of the HCV life cycle. Importantly, LASP-1 expression levels were increased in persistently infected cells with HCV. These data suggest that HCV modulates LASP-1 via NS5A in order to regulate virion levels and maintain a persistent infection.

• 생명과학회지
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• 제28권10호
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• pp.1140-1146
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• 2018

이중탈인산화효소(DUSP)는 성장인자활성 단백질키나제(MAPK)를 조절해서 세포성장과 분화에 관여하며 암, 당뇨병, 면역질환, 신경질환의 신약개발표적이다. DUSP 단백질군에 속하는 DUSP19는c-Jun N-말단 키나제(JNK)를 조절하며 골관절염의 질환화과정에 관여한다. 우리는 야생형 DUSP19 에 비하여 상당히 활성이 증가된 cavity 형성 돌연변이인 DUSP19-L75A의 결정구조를 규명하였다. 결정구조는 Leu75의 곁가지가 없어진 결과로 cavity가 잘 형성되어 있는 것을 보여주며, 활성부위에 결합한 황이온이 회전된 형태로 존재하는 것을 보여준다. Cavity 형성에도 불구하고 cavity를 둘러싸고 있는 잔기들은 그다지 재조정되지 않은 것으로 나타나며 그 대신에 멀리 떨어진 트립토판 잔기가 소수성결합을 강화하고 있는 것으로 나타나서 L75A 돌연변이의 접힘은 cavity 부위의 재조정이 아니라 글로벌 접힘 에너지 최소화 기작에 의해 안정화 되었음을 발견할 수 있었다. 회전된 활성화부위 황이온의 구조는 인산화티로신 잔기와 유사함이 발견되어 L75A 돌연변이가 최적의 활성화형태를 유도했다는 것을 알 수 있었다. 내부 cavity에 의한 활성증가현상과 이에 대한 구조적 정보는 DUSP19의 알로스테릭 조절과 치료제 개발에 정보를 제공한다.

• 생명과학회지
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• 제33권10호
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• pp.842-850
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• 2023

피롤니트린, 피롤로마이신, 피오루테오린 등은 미생물 유래의 다양한 항균활성을 갖는 기능성 할로겐화 페닐피롤 유도체들이다. 그 중에서 피롤니트린은 Pseudomonas fluorescens, Burkholderia cepacia, Serratia plymuthica 등에서 L-트립토판으로부터 4단계 반응을 거쳐 만들어내는 이차대사산물이다. 현재 표재성 피부 사상진균 감염의 치료용으로 사용되며, 토양유래 및 엽면 진균감염에 높은 길항작용을 하며, 인체에 무해하여 산업적 응용가치가 높다. 한편 피롤니트린은 빛에 의해 잘 분해되기 때문에 야외에서 광범위하게 사용하는데 어려움이 있다. 그 대안으로 구조적으로 유사하고 광 안정성이 우수한 합성으로 생산되는 비침습성 표면 살균제인 플루디옥소닐이 개발되어, 주로 식물의 종자 및 엽면 처리용으로 광범위하게 사용되고 있다. 그러나, 수생생물에 높은 독성을 야기하며, 인간 세포주에서 잠재적인 내분비 교란물질로 작용할 수 있는 위험요인이 있어 각국에서 잔류허용 기준량을 설정하여 관리하고 있다. 한편, 천연 피롤로마이신, 피오루테오린과 같은 화합물이 미생물에서 분리, 확인되었으며, 각각. 그람양성균에 대한 항생/항생물막 활성, 식물 병원 난균류 Pythium ultimum에 높은 항균활성을 갖는다. 본 총설은 여러 기능성 할로겐화 페닐피롤 유도체 중 세균 유래의 피롤니트린의 생합성에 관한 특징과 생산, 합성 플루디옥소닐의 특징, 그 외 천연 페닐피롤 유도체들의 특징등을 요약하였다. 우리는 다양한 천연 HPD의 미생물에 의한 생산과 화학합성법에 의한 다양한 합성 HPD의 개발을 통해 인간과 환경에서 높은 치료 효능과 안전성을 제공하는 새로운 HPD의 개발을 기대한다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제13권3호
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• pp.231-237
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• 1984

서해산(西海産) 큰구슬우렁이의 보다 효율적(效率的)인 이용방안(利用方案)을 모색하기 위하여 시도(試圖)한 보일드통조림의 가열살균조건구명(加熱殺菌條件究明) 결과(結果)는 다음과 같다. 1. 큰구슬우렁이생육(生肉)은 고단백(高蛋白), 저지방식품(低脂肪食品)이었으며, 특(特)히 탄수화물함량(炭水化物含量)은 1% 전후(前後)였다. 2. 가열처리시(加熱處理時) 응고성물질(凝固性物質)은 액즙(液汁) 1ml당(當) $0.37{{\sim}}0.40g\;N$. 이상에서만 응고현상(凝固現象)이 일어났다. 따라서 $105^{\circ}C$, 20분(分), $110^{\circ}C$, 40분(分), $115^{\circ}C$, 20분(分)이상 처리시에만 발견(發見)할 수 있었다. 3. 유효성(有效性) lysine은 $110^{\circ}C$, 20분(分)보다는 $125^{\circ}C$, 20분(分)에서 12% 감소(減少)하는 반면, 20분(分)에서 109분(分)까지는 약(約) $17%{{\sim}}22.8%$의 변화(變化)를 보였다. 4. 각 처리구(處理區)의 생균검출(生菌檢出)은 $110^{\circ}C$, 80분(分), $115^{\circ}C$, 40분(分) 이상에서는 검출(檢出)되지 않았다. 5. 큰구슬우렁이 생육(生肉)에서는 tryptophan이 제한(制限)아미노산이었으며, 다른 패류(貝類)의 약(約) 57%(0.83g/16g N.) 밖에 되지 않았고, 보일드육(肉)에서는 methionine (보유율 87%)이 가장 많이 손상(損傷)되었다. 또한 PPDRI치(値)는 생육(生肉) 63.16, 보일드육(肉) 65.85($115^{\circ}C$, 40분(分) 처리(處理)로 생육(生肉)보다 가열처리육(加熱處理肉)이 높았다. 6. 이상의 결과(結果)로 보아 최적가열살균온도(最適加熱殺菌溫度) 및 시간(時間)은 생균수(生菌數), 응고성물질(凝固性物質), 유효성(有效性) lysine을 감안하여 $115^{\circ}C$, 40분(分) 처리(處理)가 바람직하다고 생각되었다.