여러 가지 난분해성 색소에 대하여 탈색능을 나타내는 Klebsiella pneumoniae WL-5이 염색폐수처리장의 활성슬러지로부터 분리되었다. 이 세균은 정치배양과 at pH 6-8 및 $30-35^{\circ}C$에서 높은 탈색능을 나타내었다. Congo Red색소에 대해서는 $200\;{\mu}M$ 농도에서 12시간 배양하였을 때 90% 이상이 탈색되었고, Malachite Green, Brilliant Green, Reactive Black-5에 대해서는 $10\;{\mu}M$ 농도에서 80% 이상이 탈색되었지만, Reactive Red-120, Reactive Orange-16, Crystal Violet에 대해서는 $10\;{\mu}M$ 농도에서 각각 46%, 25%, 13%의 비교적 낮은 탈색능을 나타내었다. 트리페닐메탄계 색소는 세포표면에의 흡착에 의한 탈색을 나타내었고, 아조계 색소는 지금까지 알려져 있지 않는 새로운 효소반응계에 의해서 탈색된다는 것을 제시하였다.
Triphenylmethane계 염료 탈색균인 E. cloacae MG 82를 이용한 crystal violet의 탈색 특성을 조사하였다. 배지내의 용존산소의 양이 많을수록 crystal violet의 탈색과 E. cloacae MG82의 균생장이 좋았다. 균생장 중기의 세포 군에서 crystal violet의 탈색능이 가장 활발하였고 염료의 농도가 높아짐에 따라 균생장과 탈색능이 억제되었으며, 균생장이 가능한 crystal violet의 최고 농도치는 375 $\mu$M이었다. E. cloacae MG82는 crystal violet을 유일한 탄소원으로 이용할 수 없었고, 균생장 및 염료의 탈색에 또 다른 에너지원을 필요로 하였다.
With an aim to evaluate dye decolorization by white rot fungus on natural living conditions, reproducing by solid-state fermentation, the process of triphenylmethane dyes decolorization using the white rot fungus P. ostreatus BP, cultivated on rice straw solid-state medium, has been demonstrated. Three typical dyes, including malachite green, bromophenol blue, and crystal violet, were almost completely decolorized by the fungus after 9 days of incubation. During the process of dye decolorization, the activities of enzyme secreted by the fungus, and the contents of soluble components, such as phenolic compounds, protein, and sugar, changed regularly. The fungus could produce ligninolytic, cellulolytic, and hemicellulolytic enzymes and laccase was the most dominant enzyme in solid-state medium. Laccase, laccase isoenzyme, and the laccase mediator could explain the decolorization of malachite green, bromophenol blue, and crystal violet by the fungus in solid-state medium, respectively. It is worth noting that the presence of the water-soluble phenolic compounds could stimulate the growth of fungus, enhance the production of laccase, and accelerate dye decolorization.
우리 나라 자연 환경에서 분리 동정된 송곳니구름버섯(Irpex zonatus) BN2 균주의 리그닌분해효소활성과 아조(azo)계, 트리페닐메탄(triphenylmethane)계 및 헤테로싸이클릭(heterocyclic)계에 속하는 몇몇 염료의 탈색능을 조사하였다. 송곳니구름버섯 BN2 균주는 lignin peroxidase(LiP)와 veratryl alcohol oxidase(VAO)를 생산하지 않고 laccase와 manganese dependent peroxidase(MnP)를 생산했다. MnP는 배양 3일부터 생산되었으나 효소활성은 매우 낮았다. 반면 laccase는 배양 초기부터 지속적으로 생산되었고 활성은 대단히 높았다. 균주를 염료와 함께 10일간 배양했을 때 아조계 염료인 orange II, orange G, tropaeolin O 및 congo red의 탈색율은 각각 98.0%, 97.4%, 99.0% 및 95.3%로 나타났고 트리페닐메탄계 염료인 basic fuchsin, malachite green 및 crystal violet 들은 98.5%, 95.7% 및 99.4%로, 헤테로싸이클릭계 염료에 속하는 eosin Y, toludine blue, methyl blue 및 azur B는 각각 97.4% 98.7%, 99.9% 및 94.0%의 탈색율을 보였다. 송곳니구름버섯 BN2 균주에 의한 염료의 탈색은 주로 laccase에 의하여 이루어진다고 생각된다.
Kim, Jeong-Dong;Yoon, Jung-Hoon;Park, Yong-Ha;Fusako Kawai;Kim, Hyun-Tae;Lee, Dae-Weon;Kang, Kook-Hee
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제12권3호
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pp.437-443
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2002
A number of soil and wastewater samples were collected from the vicinity of an effluent treatment plant for the chemical industry. Several microorganisms were screened fur their ability to decolorize the triphenylmethane group of dyes. As a result, a novel crystal violet dye-degrading strain LK-24 was isolated. Taxonomic identification including 16S rDNA sequencing and phylogenetic analysis indicated that the isolate had a $99.5\%$ homology in its 16S rDNA base sequence with Stenotrophomonas maltophilia. The triphenylmethane dye, crystal violet, was degraded extensively by growing cells of Stenotrophomonas maltophilia LK-24 in agitated liquid cultures, although their growth was strongly inhibited in the initial stage of incubation. This group of dyes is toxic, depending on the concentration used. The dye was significantly degraded at a relatively lower concentration, below $100{\mu}g\;ml^-1$, yet the growth of the cells was totally suppressed at a dye concentration of $250{\mu}g\;ml^-1$. The degradation products of crystal violet were identified as 4,4'-bis(dimethylamino)-benzophenone and ${\rho}$-dimethylaminophenol by Gas chromatography-Mass spectrometry. The 4,4'-bis(dimethylamino)-benzophenone was easily obtained in a reasonable yield, as it was not metabolized further by S. maltophilia LK-24; however, the ${\rho}$-dimethylaminophenol was not easily identifiable, as it was further metabolized.
Crystal violet와 malachite green색소 분해에 관여하는 유전자들을 규명하기 위하여 색소분해능을 가진 Citrobacter sp.의 염색체 DNA속에의 transposon 도입에 의해 생성된 무작위 변이주들이 분리되었다. 이들 변이 주들로부터 두가지 색소분해능을 소실한 14개의 변이주들이 선별되었고, 이들로부터 염색체 DNA를 분리하여 EcoRl으로 절단한 후 Tn5 단편을 probe로하여 Southern hybridization을 행한 결과, 염색체 DNA상의 각각 다른 부위에 Transposon이 Single 삽입된 5개의 변이주 (Cmg2, Cmg6, Cmg8, Cmgll, Cmg12)가 최종적으로 분리되었다. 이들 변이주들의 Transposon 삽입부위 주위의 염기서열과 이로부터 유추되는 아미노산서열을 database상에 등록되어 있는 유전자의 염기서열과 단백질의 아미노산 서열에 대한 상동성을 비교한 결과, Cmg2는 대장균 maltose trnasporter (Mal C)이고, Cmg6은 LysR-type 전사조절 단백질이며, Cmg12는 산화환원효소를 코드하는 유전자인 것으로 알려졌고, 나머지 Cmg8과 Cmg11은 아직까지 기능이 알려져 있지 않은 단백질을 코드하는 유전자인 것으로임이 판명되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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