Alveolar bone destruction is a character-istic of periodontal disease. Treponema denticola are found in significantly increased numbers in the sites affected with periodontal disease. In order to clarify the role of T. denticola in destruction of alveo-lar bone in periodontal disease, this study was undertaken to determine the effect of sonicated extract of T. denticola on osteo-clast differentiation in co-culture system of mouse bone marrow cells and calvaria cells. The ability of osteoclast formation was estimated by counting the number of tar-tartrate resistant acid phosphatase(TRAP) positive cells. Sonicated extract of this bacteria stimulated osteoclast formation in a dose dependent manner(p<0.05). Indomathacin, an inhibitor of prostaglandin synthesis, decreased osteoclast formation induced by sonicated extract of this bacte-bacteria(p<0.05). Extract-induced osteoclast formation was decreased, when sonicated extract of bacteria was heated(p<0.05). These findings suggest that T. denticola induces osteoclast differentiation, and protein component of this bacteria and $PGE_2$ may play an important role in this process.
Bone resorption involves sequential stages of osteoclast precursor migration and differentiation of osteoclast precursors into multinucleated osteoclasts. Stromal cell derived factor (SDF)-1 is a chemotactic factor for osteoclast precursor migration. Matrix metalloproteinase (MMP)-9 is involved in migration of osteoclast precursors and activation of $interleukin(IL)-1{\beta}$. Alveolar bone destruction is a characteristic feature of periodontal disease. Treponema lecithinolyticum is a oral spirochete isolated from the periodontal lesions. The effect of lipopolysaccharide(LPS) from T. lecithinolyticum on expression of SDF-1 and MMP-9 was examined in cocultures of bone marrow cells and osteblasts derived from mouse calvariae. T. lecithinolyticum LPS increased expression of MMP-9 in the coculture. Polymyxin B, an inhibitor of LPS, abolished the increase of MMP-9 mRNA expression by LPS. LPS did not increase the expression of SDF-1, $IL-1{\beta}$ and tumor necrosis $factor(TNF)-{\alpha}$ mRNA in cocultures. Prostaglandin $E_2(PGE_2)$ up-regulated the expression of MMP-9 and NS398, an inhibitor of $PGE_2$ synthesis, down-regulated the induction of MMP-9 expression by T. lecitbinolyticm LPS. These results suggest that T. lecitbinolyticm LPS increases MMP-9 expression in bone cells via $PGE_2$ and that the induction of MMP-9 expression by T. lecitbinolyticm LPS is involved in alveolar bone destruction of periodontitis patients by the increase of osteoclast precursor migration and the activation of bone resorption-inducing cytokine.
Treponema denticola is a gram-negative anaerobe that can cause periodontal disease. The adhesion of this bacterium to host tissues is considered to be the primary event in the colonization and infection of a host. Fibrinogen is generally found in damaged tissues resulting from periodontitis. The binding ability of T. denticola to fibrinogen may therefore be an important virulence factor in inducing periodontal diseases. It has been reported recently that oral spirochetes can be labeled with fluorescent fatty acids and we speculated that this labeling method could be used in an oral spirochete binding assay. The binding of several different strains of T. denticola to immobilized human fibrinogen was therefore tested using the fluorescent fatty acid labeling method. In the case of immobilized fibrinogen, the T. denticola ATCC 35405 strain showed saturable binding to immobilized fibrinogen. Indeed, all four different T. denticola strains tested in this experiment, T. denticola ATCC 35405, T. denticola ATCC 33520, T. denticola ATCC 35404 and T. denticola OTK showed binding to fibrinogen. The fluorescent fatty acid labeling method thus shows utility in binding assays for T. denticola, different strains of which can generally bind to immobilized fibrinogen.
We experienced a rare case of solitary syphilitic osteomyelitis of the skull without any other clinical signs or symptoms of syphilis. A 20-year-old man was referred due to intermittent headache and mild tenderness at the right parietal area of the skull with a palpable coin-sized lesion of softened cortical bone. On radiological studies, the lesion was a radiolucent well enhanced mass (17 mm in diameter). The erythrocyte sedimentation rate (52 mm/h) and C-reactive protein (2.24 mg/dL) were elevated on admission. Serum venereal disease research laboratory (VDRL) and Treponema pallidum haemagglutination assay (TPHA) tests were positive. There were no clinical signs or symptoms of syphilis. After treatment with benzathine penicillin, we removed the lesion and performed cranioplasty. The pathologic finding of the skull lesion was fibrous proliferation with lymphoplasmocytic infiltration forming an osteolytic lesion. In addition, a spirochete was identified using the Warthin-starry stain. The polymerase chain reaction study showed a positive band for Treponema pallidum. Solitary osteomyelitis of the skull can be the initial presenting pathological lesion of syphilis.
Treponema phagedenis KS1, a fastidious anaerobe, was isolated from a bovine digital dermatitis (BDD)-infected dairy cattle in Chungnam, Korea. Initial data indicated that T. phagedenis KS1 exhibited putative virulent phenotypic characteristics. This study reports the whole genome assembly and annotation of T. phagedenis KS1 (KCTC14157BP) to assist in the identification of putative pathogenicity related factors. The whole genome of T. phagedenis KS1 was sequenced using PacBio RSII and Illumina HiSeqXTen platforms. The assembled T. phagedenis KS1 genome comprises 16 contigs with a total size of 3,769,422 bp and an overall guanine-cytosine (GC) content of 40.03%. Annotation revealed 3,460 protein-coding genes, as well as 49 transfer RNA- and 6 ribosomal RNA-coding genes. The results of this study provide insight into the pathogenicity of T. phagedenis KS1.
Feces were collected from pigs of various ages on slaughter house and swinery in the southern area of the kangwon-do. Treponema hyodysenteriae were isolated from the feces by the method of Jenkinson. and the effects of temperature on the survival of these organism were investigated. The results abtained are summerized as follows ; 1. T. hyodysenteriae were isolated from 22 fecal samples of 1, 296 samples, and showed higher incidence at 4-8week age groups than other age groups. 2. The organisms were isolated from 17 samples of 329 diarrhea samples and 5 samples of 967 non-diarrhea samples. 3. T hyodysenteriae survived long at $0-10^{\circ}C$ but survived short at $37^{\circ}C$ or above.
근관내 spirochetes의 존재유무가 명확하게 밝혀져 있지 않았으나 최근 PCR을 사용한 연구에서 Treponema denticola균주가 감염근관의 50% 이상의 경우에서 발견됨에 따라 이 세균이 치수 및 치근단 질환에 관여하는지에 대한 관심 이 높아졌다. 하지만 그 정확한 기전은 아직 밝혀져 있지 않다. 이와 관련하여 Shenker등이 T. denticola의 sonicated extract에서 순수분리된 단백질 (SIP)이 임파구 proliferation을 방해함을 보고한바 있다. 따라서 본 연구의 목적은 면역억제단백질 SIP이 어떤 기전에 의해서 임파구증식을 억제하는지를 밝히는 데 있다. 건강한 혈액 공여자로부터 추출해낸 T세포에 PHA (phytohemagglutinin)로 증식자극을 주게되는데 이 과정에서 SIP을 처리하거나 처리하지 않은 경우를 비교하여 세포주기 진행과정을 유세포분석기 (Becton-Dickinson FACS$^{tarplus}$) 를 통하여 평가하였다. 실험결과 세단계의 chromatography과정을 통해 순수정제된 SIP은 50kDa와 56kDa의 두가지 polypeptide로 구성되어 있고 0.25$\mu\textrm{g}$으로 처리된 T 임파구는 42.5%의 [$^3$H]thymidine incorporation 억제가 그리고, 0.5$\mu\textrm{g}$으로 처리한 경우는 75.1%의 억제가 일어나 dose-dependent한 양상이 나타났다. Propidium iodide와 유세포 분석기를 사용하여 세포주기를 분석한 결과 medium으로만 처리한 경우 97%이상의 임파구는 G$_0$/G$_1$ phase에 머물러 있었으나 PHA자극을 받은 경우 G$_0$/G$_1$ phase에서 58%, S phase에서 34.6%, G$_2$/M phase에서 7.4%로 분포되어 나타났다. SIP으로 전처리한 경우 세포 증식이 감소하여 0.25$\mu\textrm{g}$을 첨가한 경우 75.1%가 G$_0$/G$_1$ phase에 머물러 있었고 더 강한 농도의 0.5$\mu\textrm{g}$을 첨가한 경우는 87.7%가 G$_0$/G$_1$ phase에서 S phase로 진행되지 않고 머물러있었다. 따라서 SIP으로 전처리된 T 임파구는 그 증식이 G$_0$/G$_1$ phase에서 차단된 것으로 보인다. 이러한 면역억제현상이 in vitro 상태뿐 아니라 in vivo에서도 진행된다면 spirochete가 치수 및 치근단 질환의 병인론에 연관된 면역반응저하기전에 중요한 역할을 하는 것으로 추론할 수 있다.
Lee Sang-Yup;Shon Won-Jun;Lee WooCheol;Baek Seung-Ho;Bae Kwang-Shik;Lim SungSam
Restorative Dentistry and Endodontics
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v.29
no.5
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pp.479-484
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2004
Immunoinhibitory protein extracted from sonicated Treponema denticola have been shown to suppress cell cycle progression of human lymphocytes. To study in detail about the effect of this microorganism on the function of lymphocytes. we investigated the levels of Interleukin-2 (IL-2) and Interleukin-4 (IL-4) production by T lymphocytes before and after the addition of $12.5{\;}\mu\textrm{g}/ml$ T. denticola sonicated extracts. In this study. levels of IL-2 and IL-4 produced from T cells pretreated with sonicated extracts were evaluated by using the quantitative sandwich enzyme immunoassay technique. In response to phytohemagglutinin (PHA) stimulation. T cell produced increased levels of IL-2 and IL-4. However. the expressions of both cytokines were significantly inhibited when PHA activated-T cells were pre-exposed to sonicated T. denticola extracts (p < 0.05). These findings suggest that the T. denticola sonicated extracts induced-immunosuppression in Th1 and Th2 cell functions could be a part of the pathogenic mechanism of the endodontic failure associated with this microorganism.
치주질환은 세균감염에 의해 치조골이 파괴되는 염증성질환으로서 치아상실의 주된 원인이다. Treponema denticola는 성인성 치주염의 병소에서 자주 발견되는 세균으로서 부착능 및 단백분해효소생성능과 같은 독성 인자가 밝혀져 치주조직 파괴에 있어서 중요성이 강조되어 왔다. 골개조는 조골세포의 골형성및 파골세포에 의한 골흡수의 균형에 의하여 유지되며 치주염시 야기되는 치조골파괴는 조골세포 및 파골세포 기능의 불균형에 의하여 야기되는 것으로 설명되고 있다. 골세포에 대한 영향으로서 T. denticola는 파골세포의 형성을 촉진시키는 것으로 보고되었으나 조골세포에 대한 영향은 아직 밝혀져 있지 않다. 따라서 본 연구에서는 T. denticola가 골형성에 미치는 영향을 알아보고자 마우스의 두개골세포로부터 조골세포를 분리한 후 T. denticola분쇄액으로 처리하여 본 세균이 조골세포의 alkaline phosphatase(ALPase) 활성, 석회화결절 형성 및 Prostaglandin $E_2\;(PGE_2)$ 생성에 미치는 영향을 평가하였다. ALPase활성은 p-nitrophenylphosphate분해능, 석회화결절형성은 Von Kossa 염색법, 그리고 PGE2의 농도는 효소면역측정법으로 측정하였다. T. denticola분쇄액 (2.5 ug/ml)은 마우스 두개골세포의 ALPase활성을 억제하였으며 석회화결절의 형성을 감소시켰다. 또한 동일한 농도의 균분쇄액은 마우스 두개골세포의 $PGE_2$ 생산을 증가시켰다. 균분쇄액과 prostaglandin의 합성억제제인 indomethacin으로 세포를 동시에 처리한 경우 T .denticola분쇄액에 의한 $PGE_2$의 생산은 감소되었으나, ALPase의 활성억제에는 변화가 없었다. 균분쇄액을 열처리하여 마우스 두개골세포에 처리하였을 때에도 ALPase의 활성이 억제되는 것에는 변함이 없었다. 이러한 결과는 T. denticola의 구성성분 중 열에 안정한 물질이 prostaglandin과 무관한 경로를 통해 조골세포의 분화를 억제함을 시사하며 이와 같은 T. denticola에 의한 골형성억제가 치주염시 야기되는 치조골 파괴에 관여할 수 있을 것으로 생각된다.
This study utilized an analysis method for detecting six microorganisms, such as Actinobacillus actinomycetemcomitans, Campylobacter rectus, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythus, Treponema denticola, and Prevotella intermedia, triggering periodontal disease, using multiplex real-time polymerase chain reaction (PCR). The analysis including internal control was made by dividing the six species into two groups using four fluorescence dyes, and it was verified that there was no interference or cross-reaction between the target species and different kinds of oral microbial species. Qualitative and quantitative analyses were conducted on each microorganism in various samples, such as saliva and the plaque, using the multiplex real-time PCR and comparative analysis between periodontitis patients and healthy people, revealing obvious differences between them.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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