사람의 위암 조직을 미세구조와 metallothionein (MT)에 대한 면역 조직 및 세포화학적 방법으로 조사하였던 바, 다음과 같은 결과를 얻어냈다. 위암 세포들은 핵 세포질비가 정상세포에 비해 크고, 불규칙한 핵과 이질염색질의 분포가 증가하였으며, 세포질내에서 유리리보솜의 분포가 뚜렷이 증가하였다. 면역 조직 및 세포화학적 방법으로 MT의 발현을 조사하였던 결과, 이 단백질은 위암조직의 암세포에서 반응성이 높게 나타났으며, 주로 핵 부위에 집중되는 경향을 보였으며, 특히 이질염색질과 인 부위에서 면역 금입자들이 주로 분포하는 것으로 관찰되었다. 이러한 결과들은 위암 세포의 미세구조가 미분화세포들이 나타내는 일반적인 특징과 비교되었으며, 위암 세포에서 MT가 증가하는 현상은 이 단백질이 세포질에서 합성되어 핵내로 수송된 후, 세포 증식을 위한 전사과정에 관여할 것임을 시사하는 것이다.
지방세포분화 과정에서 중추적인 역할을 한다고 보고되어지고 있는 PPAR$\gamma$ 유전자를 cloning 하기 위하여 한우 12개월 지방조직을 이용하여 Total RNA를 추출하고 RT-PCR을 수행하여 1515bp, 505 아미노산 서열을 가진 PPAR$\gamma$ 유전자를 cloning 하였다. bovine을 제외한 4종의 다른 동물과의 아미노산 서열을 비교한 결과 모두 90% 이상의 상동성을 나타내었다. 특히 NCBl에 보고된 Norwegian cattle PPAR$\gamma$ (NCBI Accession No. O18971)의 아미노산 서열과 비교한 결과 99.2%의 상동성을 나타내었으며 아미노산 서열중 81번째 이소루신, 140번째 아르기닌, 157번째 글루탐산, 486번째 리신이 각각 트레오닌, 트립토판, 글리신, 이소루신으로 치환된 상태의 아미노산 서열을 나타내었다. 특히 nuclear hormone receptor의 DNA binding domain 영역에 포함 되는 140번째, 157번째 아미노산의 치환은 앞으로 한우PPAR$\gamma$ 유전자가 조절하는 다른 유전자와의 관계를 밝히는데 매우 중요한 점이 될 것으로 사료되어진다. 한우 PPAR$\gamma$ 의 발현은 지방조직에서 매우 높은 발현을 보였으며, 한우 12개월령과 30개월령 지방조직에서의 PPAR$\gamma$ 발현을 비교 분석하였을 때 12개월령에서보다 30개월령 지방조직에서 PPAR$\gamma$ 발현이 약 6배정도 높았다. 이와 같은 결과는 한우 PPAR$\gamma$ 유전자도 사람과 생쥐에서와 같이 지방분화에 관여하고 있다는 보고와 일치하는 결과라고 사료된다.
Full-length cDNA sequences of four novel SPATA4 genes in chimpanzee, cow, chicken and ascidian were identified by bioinformatic analysis using mouse or human SPATA4 cDNA fragment as electronic probe. All these genes have 6 exons and have similar protein molecular weight and do not localize in sex chromosome. The mouse SPATA4 sequence is identified as significantly changed in cryptorchidism, which shares no significant homology with any known protein in swissprot databases except for the homologous genes in various vertebrates. Our searching results showed that all SPATA4 proteins have a putative conserved domain DUF1042. The percentages of putative SPATA4 protein sequence identity ranging from 30% to 99%. The high similarity was also found in 1 kb promoter regions of human, mouse and rat SPATA4 gene. The similarities of the sequences upstream of SPATA4 promoter also have a high proportion. The results of searching SymAtlas (http://symatlas.gnf.org/SymAtlas/) showed that human SPATA4 has a high expression in testis, especially in testis interstitial, leydig cell, seminiferous tubule and germ cell. Mouse SPATA4 was observed exclusively in adult mouse testis and almost no signal was detected in other tissues. The pI values of the protein are negative, ranging from 9.44 to 10.15. The subcellular location of the protein is usually in the nucleus. And the signal peptide possibilities for SPATA4 are always zero. Using the SNPs data in NCBI, we found 33 SNPs in human SPATA4 gene genomic DNA region, with the distribution of 29 SNPs in the introns. CpG island searching gives the data about CpG island, which shows that the regions of the CpG island have a high similarity with each other, though the length of the CpG island is different from each other.This research is a fundamental work in the fields of the bioinformational analysis, and also put forward a new way for the bioinformatic analysis of other genes.
인산처리가 근류의 bacteroid 함량과 energy 상태에 미치는 영향을 살펴보기 위하여 Bradyrhizobium japonicum MN10을 접종한 대두식물(Glycine max [L.] Merr.)에 저해농도(0.05 mM-P)와 정상농도(1.0 mM-P)를 처리하여 온실에서 재배하였다. 인산결핍은 식물체의 근류량과 근류량 식물체량의 비에 유의성있는 감소를 보였다. 잎, 줄기, 뿌리의 인산농도는 인산결핍에 의하여 75%가 감소하였으나 근류의 인산농도는 40%만 감소하였다. 근류의 bacteroid 함량과 근류에서 전인산, 전질소의 bacteroid와 식물세포로의 분배는 인산결핍의 영향을 받지 않았으며 전질소의 22%, 전인산의 27%가 bacteroid에 존재하였다. 근류의 ATP농도, 전 adenylate 농도와 energy charge는 인산결핍에 의하여 각각 77%, 46%, 37%가 감소되었다. 인산결핍은 근류내 식물세포의 ATP 농도와 energy charge를 각각 86%, 59%를 감소시켰으나 bacteroid의 ATP농도와 energy charge에는 영향을 미치지 않았다. 이러한 결과는 근류가 인산의 강한 보유원이며, 기주식물에 대한 인산결핍조건하에서 bacteroid는 정상적인 인산 농도와 energy양을 함유한다는 것을 나타낸다.
인체내부의 각 조직은 서로 다른 저항률(resistivity)분포를 가지며, 조직의 생리학적, 기능적 변화에 따라 임피던스가 변화한다. 본 논문에서는 주로 기능적 영상을 위한 임피던스 단층촬영 (EIT, electrical impedance tomography) 시스템의 설계와 구현 결과를 기술한다. EIT 시스템은 인체의 표면에 부착한 전극을 통해 전류를 주입하고 이로 인해 유기되는 전압을 측정하여, 내부 임피던스의 단층영상을 복원하는 기술이다. EIT 시스템의 개발에 있어서는 영상복원의 난해함과 아울러 측정시스템의 낮은 정확도가 기술적인 문제가 되고 있다. 본 논문은 기존 EIT 시스템의 문제점을 파악하고 디지털 기술을 이용하여 보다 정확도가 높고 안정된 시스템을 설계 및 제작하였다. 크기와 주파수 및 파형의 변화 가능한 50KHz의 정현파 전류를 인체에 주입하기 위해 필요한 정밀 정전류원을 설계하여 제작한 결과, 출력 파형의 고조파 왜곡(THD, total harmonic distortion)이 0.0029%이고 진폭 안정도가 0.022%인 전류를 출력 할 수 있었다. 또한, 여러개의 정전류원을 사용함으로써 채 널간 오차를 유발하던 기존의 시스템을 변경하여, 하나의 전류원에서 만들어진 전류를 각 채널로 스위칭하여 공급함으로써 이로 인한 오차를 줄였다. 주입전류에 의해 유기된 전압의 정밀한 측정을 위해 높은 정밀도를 갖는 전압측정기가 필요하므로 차동증폭기, 고속 ADC및 FPGA(field programmable gate array)를 사용한 디지털 위상감응복조기 (phase-sensitive demodulator )를 제작하였다. 이때 병렬 처리를 가능하게 하여 모든 전극 채널에서 동시에 측정을 수행 할 수 있도록 하였으며, 제작된 전압측정기의 SNR(signal-to-noise ratio)은 90dB 이다. 이러한 EIT 시스템을 사용하여 배경의 전해질 용액에 비해 두 배의 저항률을 가지는 물체(바나나)에 대한 기초적인 영상복원 실험을 수행하였다. 본 시스템은 16채널로 제작되었으나 전체를 모듈형으로 설계하여 쉽게 채널의 수를 늘릴 수 있는 장점을 가지고 있어서 향후 64채널 이상의 디지털 EIT시스템을 제작할 계획이며, 인체 내부의 임피던스 분포를 3차원적 으로 영상화하는 연구를 수행 할 예정이다.
Arylsulfatase는 간단한 Phenols류의 황에스테르 화합물로부터 S $O_{4}$$^{[-992]}$ - 이온의 유리를 촉매한다. 이 효소는 토양센균을 포함한 많은 미생물과 동식물의 조직등에 널리 분포하여 있으며 이와 같은 넓은 분포는 이 효소의 기본적 기능이 환경학적으로 매우 중요한 의미를 갖는다고 하겠다. Arylsulfatase에 대한보고는 Klebsiella sp를 사용하여 몇몇 보고가 있다. 본 연구는 6종의 Serratia sp를 사용하여 arylsulfatase 합성조건을 검토하고 효소의 정제조건과 성질에 대하여 조사하여 Serratia marcescens를 선정하였다. Serratia mrcescens는 탄소원으로서 xylose rhamnose, glucosamine 그리고 arabinose등과 같은 몇몇 당을 이용하지 못했으며 glucose와 mannitol을 잘 이용하였으나 glucose methioniue의 경우 효소 합성을 억제시키었다. 유황원으로서는 무기유황염과 methionine의 첨가는 억제되었으며 tyramine의 첨가에 의해서 효소 함성의 억제효과는 해제되었다. 효소의 정제는 황산암모늄 포화용액의 분획과 DEAE-Cellulose, CM-Cellulose 그리고 DEAE-Sephadex A-25로 연결되는 구분 분획에 의해서 행하여졌다. 효소의 분자량은 SDS-gelelectrophoresis와 Sephadex G-100 column chromatography에 의하여 각각 46,000과 49,000으로 측정되었고 최적 PH는 6.8이었다. P-Nitrophenyl sulfate를 사용한 Km과 Vmak치는 각각 2.5$\times$$10^{4-}$M과 20 nmoles/min/mg protein이었다. 기질에 대한 특성은 phenylsulfte와 ο-, p-nit-rophenyl sulfate 그리고 p-nitro catechol sulfate에 대해서 높은 활성을 보였다. Hydroxylamine, inorganic fluoride, sulfide 그리고 Phosphate등은 강한 효소 저해작용을 나타내었고 무기유산염은 저해작용을 보여주지 않았다. Tyramine, octopamine그리고 dopamine과 같은 amino acid 또한 강한 저해 작용을 보였다.
노랑느타리 Pleuroltus cornucopiae와 사철느타리 Pleurolus florida의 영양요구주(營養要求株)로부터 나출(裸出)한 원형질체(原形質體)를 polyethylene glycol로 융합(融合)하여 종간(種間) 체세포잡종(體細胞雜種)을 얻었다. 이들은 핵융합주(核融合株) nuclear hybrid 또는 이질이배체(異質二倍體) allodiploid, 이핵체(異核體) heterokaryon, 자연적(自然的) 분리성이핵체(分離性異核體) spontaneous segregated heterokaryon로 나누어졌으며, 6융합조합(融合組合)중에서 1조합(組合)에서만 꺽쇠연결체 clamp connection를 가진 것이 나타났다. 총 59 융합주 중에서 꺽쇠연결체를 가진 2균주와 가지지 않은 10균주가 완전한 자실체(子實體)를 형성하였는데 거의 사철느타리 형태(形態)와 유사(有似)하였으나 버섯의 갓 색택(色澤)이 양친(兩親)인 노랑느타리가 어릴때 yellow, 사철느타리가 orange white 인데비해 체세포 잡종은 light blond-greyish brown 으로 다양한 혼합색(混合色)으로 나타났다. 꺽쇠연결체가 없는 융합주로부터 발용(發茸)된 자실체는 두균주를 제외하고 모두 꺽쇠연결체를 가졌으며, 이 자실체(子實體) 조직(組織)을 완전배지(完全培地)에 배양(培養)한 결과 균사생장(菌絲生長)이 빠르고 균사도 꺽쇠연결체를 가져 본래(本來)의 융합주와는 다른 형태로 변하였다.
Pleomorphic adenoma is the most common benign tumor in salivary glands, and occurred in frequency of 60% in parotid gland tumors, and 50% in submandibular gland tumors, and 25% in sublingual gland tumors. Histopathologically, pleomorphic adenoma is composed of epithelial cells and mesenchymal tissues, and called 'mixed tumor' because of morphological divergency. The cell structures of luminal area are composed of polyhedral and cuboidal secretory epithelial cells and modified myoepithelial cells around it, and mesenchymal tissue is composed of some myoepithelial cells and stromal tissue. In stromal tissue, myxoid change, chondroid change, or hyalinization can be seen even if bone tissue. In many studies, tumor cells of pleomorphic adenoma containing modified myoepithelial cell participate in synthesis of glycosaminoglycans. In this study, tissue sample of pleomorphic adenoma of human salivary gland were obtained from 20 surgical specimens, and all specimens were routinely fixed in 10% formalin and embedded. Serial 4-8${\mu}m$ thick sections were cut from paraffin blocks. The histopathologic evaluation was done with light microscopy. And, with immunohistochemical staining, characteristics of glycosaminoglycan were observed. And, for biochemical analysis of glycosaminoglycan, isolation of crude glycosaminoglycan from tumor tissue and immuno-blot analysis were carried out. With transmission electromicroscopy, tumor cells and biologic behavior of pleomorphic adenoma were observed with distribution and expression of glycosaminoglycan in tumor cells, The results were obtained as follows: 1. In immunohistochemical study, chondroitin 4-sulfate is highly postively stained in myxoid stromal tissue, and chondroitin 6-sulfate is highly positively stained in chondroid mesenchymal tissue, both glycosaminoglycans are positively stained in non-luminal cell of ductal area. 2. Dermatan sulfate and keratan sulfate is positively stained in periductal non-luminal tumor cells. 3. In immunohistochemical study, heparan sulfate is weakly stained in luminal cells and non-luminal cells around duct, and chondroid mesenchymal tissue. 4. In transmission electromicroscopic view, the tumor cells are composed of modified myoepithelial cells, and contain many microfilaments and well developed rough endoplasmic reticulum. 5. In Immuno-Blot analysis, the expression of glycosaminoglycans is expressed mostly in chondroitin 6-sulfate and chondroitin 4-sulfate. From the results obtained in this study, tumor cells of pleomorphic adenoma are composed of modified myoepithelial cells, and glycosaminoglycans of chondroitin 4-sulfate and chondroitin 6-sulfate mostly participate in the development of pleomorphic adenoma, but dermatan sulfate, keratan sulfate and heparan sulfate glycosaminoglycans were expressed variably.
The orbicularis oris muscle (OOM) is a very important muscle that originate from the second branchial arch and is innervated by the facial nerve. The aim of this study was to elucidate distribution types of two muscle fibers that composing OOM by using enzyme-histochemical examinations and tried to make a basis for a clinical application. The fresh frozen tissues from the superior and inferior portions of the OOM were taken from post mortem 65-year-old Korean male adult. Total five different sagittal sections were used on the midline of the philtrum, the middle portion of lower lip, the mouth corner, and each midlateral side of upper and lower mouth. We used enzyme-histochemical staining such as Periodic Acid-Schiff (PAS), Succinic Dehydrogenase (SDHase), reduced Nicotinamide Adenine Dinucleotide-Tetrazolium Reductase (NADH-TR), Adenosine Triphosphatase (ATPase) in pH 9.4, 4.6 and 4.3, and Modified Gomori Trichrome. There were about 30.24 % type 1 muscle fiber and 65.40 % type 2 muscle fiber in the midline of the philtrum (p < 0.05). Enzyme-histochemical staining is very useful and innovative method to elucidate characteristics of muscle fibers. We expect that chiloplasty and reconstruction of the lip portions for cleft lip patients, based on these results, are better to recovery function and aesthetic. However, we have some problems as an intramuscular variability and the inter-individual variation etc. Therefore we have to make progress these studies continuously to overcome these problems.
Pharmacokinetic characteristics of recombinant human interleukin-2 (rH IL-2) wre studied in the rat. First, different doses of rH IL-2 ranging from 6,400 to 1,600,000 U/kg were injected intravenously and the effect of dose size on the pharmacokinetics was examined. There was no dose dependency in the pharmacokinetics of rHIL-2 in the dose range of 6,400-40,000 U/kg. But at the dose of 1,600,000 U/kg, there was a severe hemolysis throughout the experiment and the pharmacokinetic parameters such as Vdss and CLt were significantly increased compared to those obtained from lower doses. It also showed that this drug is hardly distributed to the peripheral tissues and hardly eliminated from the body, since the valume of distribution (Vdss) and total body clearance (CLt) were 45-75 ml/kg and 1-2 ml/min/kg, respectively. The Vdss is close to the actual plasma volume and the CLt is less than glomerular filtration rate (GFR). Therefore it seemed that rH IL-2 is distributed only in the plasma pool and hardly filtered in the kidney due to its very large molecular weight. Second, rH IL-2 was administered to the rat via several routes such as hepatic portal vein (PV), intraperitoneal (IP), peroral (PO) and intranasal (IN) routes. The bioavailabilities (BA) of PV, IP, PO and IN routes were 96.8, 4.9, 0 and 0.1%, respectively. The addition of some nasal absorption enhancers such as taurocholate, taurodeoxycholate, glycocholate and glycodeoxycholate did not increase the BA of intranasaly administered rH IL-2. The result is contrast to the effect of these bile salts on the nasal absorption of ${\alpha}-inteferon$. Considering it together with the pharmacokinetic parameters, very large molecular weight of rH IL-2 seemed again to be the cause to very poor membrane permeability.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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