Biological samples can be fixed either by chemical method by using chemical solution or physical methods by using heat treatment. The problem in traditional heat fixation is unsatisfactory quality due to uneven heat conduction in specimen and loss of inner cell contents. Chemical fixation method also bears several intrinsic problems like the limit in specimen size, time consumption in fixative impregnation, and loss of low molecular weight cell components. These factors deteriorate the quality of fixed specimen, thus limit the magnification and contrast of tissue pictures. Microwave heat has been reported to be a good alternative to current chemical methods to overcome these problem. In this study, we tried to introduce the microwave energy method to routine fixation work in hospital. We replaced chemical fixative with saline to provide moderate reaction condition, and used frozen section to reduce time for sample preparation. Temperature was measured at each experiment. The fixation of rat kidney tissue with 2.45 GHz electromagnetic wave and saline showed similar result to the control group fixed with traditional chemical method. Human tumor tissue fixed with 2.45 GHz electromagnetic in frozen section was improved in terms of histochemistry of PAS and immunohistochemistry of tumor marker like cytokeratin. Total turnaround time was reduced from $24\sim38$ h to to $2\sim4$ h. In conclusion, the quality of samples prepared by microwave heating method was at least as good as that of traditional method. If the condition for the fixation of different specimens is standardized, this new method could be applied to routine work in hospital, and could save working time as well.
Present paper is attempted to introduce the phenomenon of 'after contraction' in isolated cardiac-muscle. Papillary muscles were removed from cat right ventricle and were used as a preparation. The muscle strip was Placed in tissue bath which is kept in steady temperature of around $25^{\circ}C$ and was perfuced by Tyrode solution, saturated with 95% $O_2$ and 5% $CO_2.$ under the condition of high calcium (8.2-10.0 mM/l), low sodium (72.4-70.0 mM/l) perfusion with the administration of epinephrine (1-2 mg/l) into tile tissue bath normally triggered muscle contraction was followed by oscillatory, repetitive contractions - after contraction. The phenomenon of after contraction was augumented by decrease in tissue bath temperature and by increase in number of preceding beats and in driving rate. Authors were able to maintain the phenomenon in prominent and steady state giving proper experimental conditions such as fixed bath temperature (ranged from $22^{\circ}C\;to\;27^{\circ}C$), suitable driving rate (20 per minute in average) and perfusion of high calcium, loll sodium and 1-2 mg/l of epinephrine. In some preparations, the strength of after contraction (second contraction) reached up-to 80% of normally triggered contraction and five repetitive contractions were observed as largest number of after contractions. Intracellular action potential measured in the muscle which was beating regulary showing steady after contraction revealed no oscillating after potential in most parts of the muscle but in few cases oscillating changes of after potentials were detectable. In electrogram of the muscle preparation recorded by means of contact electrode prominent, oscillating after potentials were observable when the recorder was set at highest sensitivity. It still is not clear that whether after contraction is the phenomenon which corresponds to those changes in action potential, oscillating after potential, of the muscle preparation. Possible mechanism of the phenomenon of after contraction relating with after potential changes was proposed. Detailed results obtained from further studies on after contraction and concrete discussion on the phenomenon will be reported by authors.
Intraoperative cytologic examination of intracranial tumors using crush preparation provides useful information in operative decision making. The diminutive nature of many biopsy specimens, particularly those obtained by stereotactic neurosurgical procedures emphasizes the importance of combining the cytologic smear method with conventional frozen section interpretation. The great advantage of the cytologic smear method resides in its suitability for the study of minute fragments of tissue, allowing retention of the majority of the specimen for optimal processing. We present the cytologic features of 3 cases of intracranial germ cell tumors(2 germinomas and 1 endodermal sinus tumor), using crush preparation during intraoperative diagnosis and compare them with histologic findings. The cytologic features of the germ cell tumors were similar to those of the respective gonadal counterparts. The cytologic differential diagnosis of both types of germ cell tumors is described.
Matrix assisted laser desorption ionization (MALDI) mass spectrometry is commonly used to analyze biological molecules such as proteins, peptides and lipids from cells or tissue. Recently MALDI Imaging mass spectrometry (IMS) has been widely applied for the identification of different drugs and their metabolites in tissue. This special feature has made MALDI-MS a common choice for investigation of the molecular histology of pathological samples as well as an important alternative to other conventional imaging methods. The basic advantages of MALDI-IMS are its simple technique, rapid acquisition, increased sensitivity and most prominently, its capacity for direct tissue analysis without prior sample preparation. Moreover, with ms/ms analysis, it is possible to acquire structural information of known or unknown analytes directly from tissue sections. In recent years, MALDI-IMS has made enormous advances in the pathological field. Indeed, it is now possible to identify various changes in biological components due to disease states directly on tissue as well as to analyze the effect of treated drugs. In this review, we focus on the advantages of MALDI tissue imaging over traditional methods and highlight some motivating findings that are significant in pathological studies.
We tested a set of conditions for obtaining optimal tissue quality in preparation for histology in samples of mouse brain. C57BL/6J mice were sacrificed and perfused with 4% paraformaldehyde, after which the brains were removed and dehydrated in 30% sucrose solution. The brains were then divided into four groups according to freezing temperature and usage of optimal cutting temperature (OCT) compound. Next, we stained the sectioned brain tissues with Harris hematoxylin and eosin Y and immunohistochemistry was performed for doublecortin. The best quality tissue was obtained at $-25^{\circ}C$ and by not embedding with the OCT compound. When frozen at $-25^{\circ}C$, the embedded tissue was significantly damaged by crystals, while at $-80^{\circ}C$ there were no meaningful differences between qualities of embedded- and non-embedded tissues. Overall, we identified a set of conditions to obtain quality frozen brain sections. Our developed protocol will help resolve matters associated with damage caused to sectioned brain tissue by crystal formation during freezing.
Sarcolemmal membrane fraction from canine ventricle was isolated from the discarded pellet after the first homogenization in the isolation procedure of sarcoplasmic reticulum (Method 1) and the protein yield, purity, and sidedness of this preparation were compared to those of sarcolemmal fraction prepared by method of Lee et al. (Method 2) and a slight modification of original protocol of Jones et al. (Method 3). Method 1 differed from Method 2 essentially only in that vigorous homogenization was carried out by omnimixer and homogenization medium containing 30mM Tris-maleate was used in the first step. The sarcolemmal fraction was enriched from 45 to 50 and 29-fold in [$^3H$] ouabain, [$^3H$] DHA, [$^3H$] QNB binding and $Na^+$, $K^+$-ATPase activity, respectively, compared to homogenate. Total $Na^+$, $K^+$-ATPase activity of highly sarcolemma enriched fraction was 144.6$\pm$16.4$\mu\textrm{mol}$ Pi/mg protein/hr, which was about 85%, of total ATPase activity, and the yield of the preparation was 15.7 mg protein per 100g of starting ventricular tissue. The sarcolemmal preparation supported $^{45}Ca^{2+}$-uptake in the presence of ATP but this uptake was not dependent on oxalate. Sarcolemmal $Na^+$, $K^+$-ATPase activity and detectable [$^3H$] ouabain binding were increased about 32% and 35%, respectively, by pretreatment of sarcolemmal fraction with optimal concentration of sodium dodecylsulfate (0.3-0.4mg/mg protein), suggesting that this preparation contained about 24% of sealed rightside-out vesicles, 26% of sealed inside-out vesicles, and 5001o of freely permeable (leaky) form. This procedure showed the highest protein yield and leaky population, compared to Method 2 and 3. On the other hand, sarcolemmal fraction prepared by Method 2 and 3 showed low value in protein yield but comtained high population of inside-out (46%) and rightside-out (49%) vesicles, respectively, compared to present procedure (Method 1). The results indicate that vigorous homogenization decreases the population of sealed sarcolemmal vesicles but increases the sarcolemmal protein yield per gram tissue and that this procedure is available for further purification of sarcolemmal fraction and for the receptor binding study of sarcolemma.
Bencherif, Sidi A.;Braschler, Thomas M.;Renaud, Philippe
Journal of Periodontal and Implant Science
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제43권6호
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pp.251-261
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2013
A paradigm shift is taking place in medicine and dentistry from using synthetic implants and tissue grafts to a tissue engineering approach that uses degradable porous three-dimensional (3D) material hydrogels integrated with cells and bioactive factors to regenerate tissues such as dental bone and other oral tissues. Hydrogels have been established as a biomaterial of choice for many years, as they offer diverse properties that make them ideal in regenerative medicine, including dental applications. Being highly biocompatible and similar to native extracellular matrix, hydrogels have emerged as ideal candidates in the design of 3D scaffolds for tissue regeneration and drug delivery applications. However, precise control over hydrogel properties, such as porosity, pore size, and pore interconnectivity, remains a challenge. Traditional techniques for creating conventional crosslinked polymers have demonstrated limited success in the formation of hydrogels with large pore size, thus limiting cellular infiltration, tissue ingrowth, vascularization, and matrix mineralization (in the case of bone) of tissue-engineered constructs. Emerging technologies have demonstrated the ability to control microarchitectural features in hydrogels such as the creation of large pore size, porosity, and pore interconnectivity, thus allowing the creation of engineered hydrogel scaffolds with a structure and function closely mimicking native tissues. In this review, we explore the various technologies available for the preparation of macroporous scaffolds and their potential applications.
The dimensional stability of tissue conditioners characterizes the ability of the materials to yield accurate functional impressions of oral mucosa. This study evaluated the viscoelastic property and the linear dimensional changes with the factor of time and thickness of tissue conditioners ($COE-COMFORT^{TM}$, Visco-gel. $COE-SOFT^{TM}$, Soft-Liner). The thickness of these materials were changed (1.5mm, 3.0mm) and the percentage changes in dimension were measured at 1h, 12h, 24h, 36h, 3day, 7day after specimen preparation. From the results large differences appear between the various tissue conditioners. The results suggest that the period recommended for forming functional impression would be 2-3days after insertion in the mouth. in addition. it is important to select tissue conditioners suitable for functional impression because of the wide range of dimensional stability among the materials.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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