• BMB Reports
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• 제43권2호
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• pp.110-114
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• 2010

The yeast three-hybrid system (Y3H), a powerful method for identifying RNA-binding proteins, still suffers from many false positives, due mostly to RNA-independent interactions. In this study, we attempted to efficiently identify false positives by introducing a tetracycline operator (tetO) motif into the RPR1 promoter of an RNA hybrid expression vector. We successfully developed a tight tetracycline-regulatable RPR1 promoter variant containing a single tetO motif between the transcription start site and the A-box sequence of the RPR1 promoter. Expression from this tetracycline-regulatable RPR1 promoter in the presence of tetracycline-response transcription activator (tTA) was positively controlled by doxycycline (Dox), a derivative of tetracycline. This on-off control runs opposite to the general knowledge that Dox negatively regulates tTA. This positively controlled RPR1 promoter system can therefore efficiently eliminate RNA-independent false positives commonly observed in the Y3H system by directly monitoring RNA hybrid expression.

• 대한수의학회지
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• 제49권3호
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• pp.195-200
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• 2009

Avian pathogenic Escherichia coli (APEC) is an important bacterial pathogen of chickens and causes colibacillosis such as airsacculitis, perihepatitis, omphalitis, peritonitis, salpingitis, and pericarditis. As the transfer of antibiotic resistance from animal to humans can be possible, surveillance on antibiotic resistance of APEC is very important. A total 34 APEC isolates from diseased chickens during the period from 2007 to 2009 were obtained. The susceptibility of the isolates to 13 antibiotics was determined by disc diffusion assay. Resistance to erythromycin was found in 97.1% of APEC isolated, followed by resistance to tetracycline (85.3%), doxycycline (82.3%), ampicillin (73.5%), sulfisoxazole (67.6%), enrofloxacin (67.6%), ciprofloxacin (64.7%), norfloxacin (61.7%) trimethoprim/sulfamethoxazole (52.9%), gentamycin (26.5%), amoxicillin (8.8%), colistin (5.9%), and amikacin (2.9%). The blaTEM genes were detected in 25 (100%) of the 25 ampicillin-resistant APEC isolates. Among the 29 tetracycline-resistant APEC isolates, tetA and tetB genes were detected in 18 (62.1%) and 9 (31%) isolates, respectively. Twenty six (76.5%) isolates were multiresistant to at least 6 antibiotics and seven (20.1%) isolates were multiresistant to at least 10 antibiotics. This results indicated that multiple antibiotic-resistant APEC is widespread in chicken flocks in Korea.

• 한국가금학회지
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• 제36권2호
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• pp.177-186
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• 2009

형질전환 동물에 있어서 외래 유전자의 조절되지 않은 과다 발현은 생리적인 부작용이나 독성을 나타내게 된다. 본 연구에서는 이러한 문제를 해결하기 위하여 외래 유전자 발현 조절 system인 tetracycline-inducible expression system(Tet system)을 도입하였다. 그러나 종래의 Tet system을 이용한 유전자 발현 조절은 system 자체의 구성 요소로 인한 미미한 leaky 현상 때문에 완벽하게 이루어지지 않는다. 본 연구에서는 보다 완벽한 외래 유전자의 발현 조절 system을 구축하기 위하여 rtTA 대신 진일보한 형태의 $rtTA2^SM2$를 도입하고 TRE 부분을 TRE-tight로 대체하였다. 확립된 retrovirus vector system을 이용하여 다양한 표적세포와 형질전환 닭으로부터 혈소판 생산의 일차적인 조절자이며, 조혈간세포의 생존과 증식에 있어서 매우 중요한 역할을 하는 human thrombopoietin(hTPO)를 생산하고자 하였다. In vitro 상의 연구에서, CEF 세포에서 발현되는 hTPO가 가장 높은 발현량과 발현 유도율을 나타내었으며, 상업적으로 판매되고 있는 hTPO나 다른 표적세포에서 생산된 hTPO에 비해 생물학적 활성이 가장 높은 것으로 확인되었다. 고농도로 농축한 재조합 retrovirus를 stage X단계의 계란의 배반엽 층에 미세주입하여 대리 난각 방법으로 배양한 결과, 미세주입한 138개의 계란 중 21일 후에 15개의 계란에서 병아리가 부화하였으며, 그 중 8마리가 형질전환 개체로 확인되었다. 이 형질전환 닭은 사료 1 g 당 0.5 mg의 doxycycline을 첨가하여 2주간 식이하였으며, 그 후 혈액을 채취하여 hTPO 농도를 측정한 결과 200ng/mL로 확인되었다. 또한 형질전환 개체 중 수컷의 정자에서 hTPO 유전자의 존재를 확인함으로써 germLine transmission의 가능성을 입증하였다. 이상의 연구 결과는 사람의 cytokine 단백질의 대량생산을 위한 생체반응기로서의 형질전환 닭의 생산 가능성을 제시한 데 의의가 있다.

• Reproductive and Developmental Biology
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• 제28권3호
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• pp.197-202
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• 2004

골다공증 치료제로 이용되고 있는 hPTH는 체내의 혈중 칼슘 농도를 조절하는 인간의 부갑상선 호르몬이다. 본 연구에서는 hPTH를 효율적으로 생산하는 돼지세포를 구축하고자 다양한 retrovirus vector를 이용하였는데 다음과 같은 결과를 관찰하였다. 1) hPTH 유전자의 전이를 확인하기 위해 RT-PCR을 수행한 결과, 형질전환된 모든 돼지세포에서 420 bp의 hPTH에 해당하는 단편을 확인할 수 있었으며, WPRE가 도입되지 않은 실험군보다 WPRE서열이 도입된 실험군에서 더 강한 밴드를 확인하였다. 2) ECLIA 측정 결과 hPTH 유전자가 도입된 모든 세포에서 hPTH가 생성되었으며, 특히 Tet-On system에서는 doxycycline을 처리한 실험군에서 hPTH의 발현이 유도되었음을 확인하였다. 또한 RT-PCR과 ECLIA을 수행하여 hPTH의 도입 여부와 단백질 생산을 비교한 결과, WPRE 서열이 hPTH 유전자의 downstream 위치에 도입된 실험군에서 가장 많은 단백질이 생산됨을 확인할 수 있었다.

• Reproductive and Developmental Biology
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• 제29권1호
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• pp.49-55
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• 2005

본 연구에서는 돼지의 체지방을 감소시키고 성장을 촉진시키는 인자인 PGH를 cloning하여 이 유전자를 외래 유전자의 발현이 유도적으로 조절되는 Tet system에 도입하고자 하였다. 또한 유전자의 발현이 turn on되었을 때 그 발현 정도를 최대화하기 위하여 WPRE 서열을 도입하였다. 구축된 각각의 vector는 retrovirus 생산 세포주에 도입하여 virus를 생산하였으며 이를 여러 종류의 표적세포에 감염시켜서 PGH 유전자의 발현을 확인한 결과, 1×10/sup 6/ 세포에서 350∼2,100 ng의 PGH가 분비되었으며 특히 PFF 세포에서 가장 높은 발현을 나타내었다. Tet system에 도입된 PGH의 발현이 유도적으로 조절되는지를 PFF 세포에서 확인한 결과, 유도 효율이 2∼6배로 나타났으며 WPRE 서열이 rtTA 유전자의 downstream에 위치한 조건에서 가장 높은 유도 효율을 나타내었다. 이러한 PGH 유전자의 유도적인 발현의 조절은 고급육 생산의 형질전환 돼지 연구에 있어서 가장 큰 문제점이 되는 PGH 유전자의 과다한 발현에 의한 생리적인 부작용을 최소화할 수 있는 해결 방안으로 제시될 수 있을 것이다.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제25권3호
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• pp.220-225
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• 2010

서울시내에서 유통되는 식품과 식품접객업소(집단급식소 포함)의 조리식품을 대상으로 식중독 원인균 분석 및 위생미생물 검사를 실시한 결과, 분리된 대장균의 항생제 감수성 시험을 통하여 이들의 내성 정도를 파악하고, 내성유전자와 병원성유전자의 분포도 알아보았다. 모두 1313건의 샘플 중 50건에서 대장균이 검출되어 3.8%의 검출률을 보였다. 이중 육회 1건에서 장출혈성대장균 O26 1건, 김밥에서 장병원성대장균 1건이 각각 검출되었다. 50건의 대장균중 50%가 16종의 항생제에 모두 감수성을 보였으며 내성이 높게 나타난 항생제는 ampicillin(36%), amoxicillin/clavulanic acid(32%) 그리고 tetracycline(22%)의 순이었다. 이들의 내성유전자 분포는 TEM이 1건, tetB 4건이 각각 검출되었다.

• Reproductive and Developmental Biology
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• 제31권3호
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• pp.161-167
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• 2007

본 연구에서는 외래 유전자의 지속적인 발현에 의한 형질 전환 개체나 세포의 생리적인 부작용을 최소화하기 위하여 hTPO 유전자의 발현을 조절할 수 있는 tetracycline-inducible retrovirus vector system을 구축하고자 하였다. kTPO 유전자는 사람의 간암세포인 HepG2에서 분리한 RNA를 주형으로 하여 RT-PCR 방법을 이용하여 확보하였으며, 이 유전자를 MLV 유래의 vector에 도입하여 pLNChTPOW를 재조합하였다. 재조합한 vector는 GP2 293 포장세포에 도입하여 바이러스를 생산하였으며 이 바이러스를 이용하여 감염시킨 여러 표적세포에서 hTPO의 발현을 확인하였다. 또한, hTPO의 발현을 유도적으로 조절할 수 있도록 하기 위하여 hTPO를 one vector 형태의 Tet-On vector system에 도입하였으며, 발현의 유도 조건에서 보다 강한 발현을 위하여 WPRE서열을 여러 위치에 도입하였다. 구축한 Tet system의 발현 조절 정도는 각 바이러스를 감염시켜서 구축한 CEF와 PFF 세포에서 RT-PCR과 Western blot, 그리고 ELISA 방법을 이용하여 확인하였다. 그 결과 CEF에서는 WPRE 서열이 hPTO유전자의 3'에 위치한 경우에서, PFF에서는 WPRE가 rtTA의 3'에 위치한 경우의 vector system에서 가장 높은 발현율과 유도율을 나타내었다. 이는 Tet system에서의 hTPO 유전자 발현 조절이 매우 효율적으로 이루어지며, 세포주에 따른 의존적인 조절 양상을 보이는 것을 의미한다. 따라서 hTPO의 대량 생산을 위한 생체 반응기로서의 형질 전환 동물의 개발을 보다 효율적으로 수행하려면 적절한 Tet system이 선별적으로 적용되어야 할 것이다.IJ850으로 제조한 거봉포도주에서 75 mg/L의 함량을 나타내었다. 따라서 국내 거봉포도로부터 분리한 S. cerevesiae IJ850는 포도주 생산에 사용될 수 있는 균주로써 그 가능성을 보여주었다.8%)가 우점 계통군으로 분포하는 계통학적 특징을 나타내어 DNA추출법에 따라 토양 세균군집 구조의 계통학적 특성 이 상이하게 나타나고 있음을 알 수 있었다. S. muenchen (57.3%)과 S. enteritidis (22.7%)가 대부분을 차지하였고, 인수공통병원균 중에서는 L. monocytogenes(43.5%), C. jejuni(37.4%), S. aureus(30.4%)의 순서로 분리되었으나, E. coli O157:H7은 국내 계육에서 전혀 분리되지 않았다. 결과적으로 도계육이 위생적이며 안전하게 시판되기 위해서는 최종적인 도계공정 이후 다양한 유통과정에서 발생될 수 있는교차 및 추가오염의 기회를 줄이기 위한 보다 철저한 위생관리 대책과 보완대책이 필요하다는 사실을 이 성적을 통하여 비로소 확인할 수 있었다.가정교과교육학 문항내용의 포괄성을 살펴보면 다음과 같다. 가정과교육과정 문항내용은 제7차 교육과정 문서상에 표면적으로 제시된 내용에 한정되어 있어 구체적인 개선방안으로 교육과정의 철학적 이론적 배경, 다양한 교육과정 원리를 활용하는 문항내용 등과 같이 좀 더 이론적이고 원론적인 내용으로의 확대를 제안하였다. 가정과교수학습법 문항내용은 특정 교수학습모형에 관련된 지식을 묻는 내용으로 주로 출제되었다. 이에 구체적인 개선방안으로 특정 교수학습모형의 이론적 토대가 되고 전체적인 교수설계를 하기 위한 기본 바탕이 될 수 있는 교수학습이론에 관한 내용, 또한 현재가정과교육에 있어서 유용한 교수학습법이라고 입증되고 있는 실천적 추론 가정과 수업에 관한

• 한국수학교육학회지시리즈D:수학교육연구
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• 제8권2호
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• pp.69-80
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• 2004

It is undeniable that teachers play the principal roles in education. This is why education and professional development of teachers are so important. Some of recent works have made this fact clearer. In America, in particular, many reports and research papers have recently been published on these problems. In this paper, we first introduce briefly the current system of education, employment, and professional development of mathematics teachers in Korea. And then we mention a research project on education of mathematics teachers. The final report of the project contains some suggestions for curriculums of the department for education of mathematics teachers. We describe one example of extended syllabus which implements those suggestions. The example is on Modern Algebra I.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제17권7호
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• pp.960-966
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• 2004

The purpose of this study was to evaluate the effects of protein supplementation of green tea waste (GTW) on the performance of lactating cows. Another aim was to increase resource utilization and to eliminate any environmental negative impact from the tea waste. GTW from a beverage company was ensiled at a low pH (<4.0) and high acetic acid and lactic acid concentration, and it contained high crude protein (CP, 34.8%), total extractable tannins (TET, 9.2%) and condensed tannin (CT, 1.7%). Two experiments were conducted to investigate the palatability and performance in lactating cows fed GTW. In the palatability trial, three lactating cows were allocated to three dietary treatments in a 3$\times$3 Latin square design. The animals were offered a total mixed ration (TMR) including GTW at rates of 0, 2.5 and 5.0% on a dry matter (DM) basis. Total DM intake was not different among the treatments. In the performance trial, four lactating cows were used in a 2$\times$2 Latin square design with a 3 week sampling period. GTW was incorporated into TMR at a rate of 5.0% on a DM and 10.0% on a CP basis. Thus GTW replaced alfalfa hay and soybean meal at a level of 25.0% on a DM. DM and CP intake were not affected by the inclusion of GTW, whereas TET and CT intake were significantly increased (p<0.001). Milk production, milk composition and the efficiency of milk production were not altered by the GTW inclusion. Although ruminal pH and VFA, and blood urea nitrogen were not changed, ruminal $NH_{3}-N$ and plasma total cholesterol were relatively low in the GTW group, but not significantly different. The excretion of urinary purine derivatives and estimated MN supply were also not significantly affected by GTW treatment. It is therefore concluded that GTW can be used as a protein source without any detrimental effects on the performance of lactating cows.

• 수산해양기술연구
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• 제43권1호
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• pp.12-27
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• 2007

This fundamental studies on for the productivity improvement and laborsaving of purse seine fishery. Given the difficulty posed from the distortion of net shape caused by the external forces, such as tide, at the time of shooting and pursing, we set the 4 steps of 0, 2, 4 and 6cm/sec in flow velocity in the flume tank for the experiment in order to examine those characteristics. We used two model seines designed on the scale of 1 to 180 based on the power block seine, which is the mackerel purse seine generally used in the near sea of Jeju Island and triplex seine, which is the mackerel purse seine of one boat system fishing expected in the future, for the experiment, and interpreted the characteristics of several motion in water, such as the shape of seine, the change in tension and area during pursing and its the analysis results are as follows. Though the experiment could be conducted up to 6cm/sec of flow velocity that was defined, the experiment could not go on because of the severe distortion in the seine at the flow velocity in excess of 6cm/sec. As for the depth of leadline and reduction rate of side area of seine when the pursing is connected, P seine turned out to be slightly higher than T seine, and the hauling speed and reduction rate of upper area of seine were found similar to each other. The correlation between the hauling time (Ht) and depth of lead line (Dhp, Dht) of P seine and T seine can be expressed by the equation, that is, Dhp=(0.99Pt-7.63)Pt+69.01, Dht=(1.03Pt-7.73)Pt+66.74. The correlation between the hauling time and hauling velocity (Hpp, Hpt) can be expressed by the equation, that is, $Hpp=-0.06Ht^2+0.88Ht+0.78,\;Hpt=-0.05Ht^2+0.81Ht+0.98$ here, Pt is pursing time. And the correlation between the pursing time and the reduction rate of side area (sArp, sArt) can be expressed by the equation, that is, $sArp=-0.48Pt^2+14.79Pt-16.74,\;sArt=-0.45Pt^2+14.56Pt-16.48$. The reduction rate of upper area of seine (tArp, tArt) can be expressed by the equation, that is, $tArp=0.34Pt^2-0.66Pt-0.74,\;tArt=0.34Pt^2-0.27Pt-1.80$. In addition, the correlation between the pursing time and tension of purse line (Tep, Tet) can be expressed by the equation, that is, $Tep=2.79Pt^2+2.26Pt-0.60,\;Tet=2.14Pt^2+8.08Pt-27.50$.