Kim, Yu-Jin;Neelamegam, Rameshkumar;Heo, Mi-Ae;Edwardraja, Selvakumar;Paik, Hyun-Jong;Lee, Sun-Gu
Journal of Microbiology and Biotechnology
/
v.18
no.6
/
pp.1186-1190
/
2008
Single-chain Fv (scFv) antibody against c-Met is expected to be employed in clinical treatment or imaging of cancer cells owing to the important biological roles of c-Met in the proliferation of malignancies. Here, we show that the productivity of scFv against c-Met in Escherichia coli is significantly influenced by the orientation of its variable domains. We generated anti-c-Met scFv antibodies with two different domain orders (i.e., $V_L$-linker-$V_H$ and $V_H$-linker-$V_L$), expressed them in the cytoplasm of E. coli trx/gor deleted mutant, and compared their specific activities as well as their productivities. Productivity of total and functional anti-c-Met scFv with $V_H/V_L$ orientation was more than five times higher than that with $V_L/V_H$ format. Coexpression of DsbC enhanced the yield of soluble amounts of anti-c-Met scFv protein for both constructs. The purified scFv antibodies of the two different formats exhibited almost the same antigen-binding activities. We also compared the productivities and specific activities of anti-c-Met diabodies with $V_H/V_L$ or $V_L/V_H$ formats and obtained similar results to the case of scFv antibodies.
Park, In-Hye;Kim, Sun-Hee;Lee, Yong-Seok;Lee, Sang-Cheol;Zhou, Yi;Kim, Cheol-Min;Ahn, Soon-Cheol;Choi, Yong-Lark
Journal of Microbiology and Biotechnology
/
v.19
no.2
/
pp.128-135
/
2009
Acinetohacter baumannii BD5 was isolated from waters of Baek-du mountain, and the lipase gene was cloned using a PCR technique. The deduced amino acid sequence of the lipase and lipase chaperone were found to encode proteins of 325 aa and 344 aa with a molecular mass of 35 kDa and 37 kDa, respectively. The lipase gene was cloned and expressed in Escherichia coli BL21(trxB) as an inclusion body, which was subsequently solubilized by urea, and then purified using Ni-affinity chromatography. After being purified, the lipase was refolded by incubation at $4^{\circ}C$ in the presence of a 1:10 molar ratio of lipase:chaperone. The maximal activity of the refolded lipase was observed at a temperature of $35^{\circ}C$ and pH 8.3 when p-NP caprate(C10) was used as a substrate; however, 28% of the activity observed at $35^{\circ}C$ was still remaining at $0^{\circ}C$. The stability of the purified enzyme at low temperatures indicates that it is a cold-adapted enzyme. The refolded lipase was activated by $Ca^{2+},\;Mg^{2+},\;and\;Mn^{2+}$, whereas $Zn^{2+}\;and\;Cu^{2+}$ inhibited it. Additionally, 0.1% Tween 20 increased the lipase activity by 33%, but SDS and Triton X-100 inhibited the lipase activity by 40% and 70%, respectively.
Saccharomyces cerevisiae Hsp30 is a plasma membrane heat shock protein that is induced by various environmental stress conditions. However, the functional role of Hsp30 during diverse environmental stressors is not presently known. To gain insight into its function during thermal stress, we have constructed and characterized a ${\Delta}hsp30$ strain during heat stress. $BY4741{\Delta}hsp30$ cells were found to be more sensitive compared with BY4741 cells, when exposed to a lethal heat stress at $50^{\circ}C$. When budding yeast is exposed to either heat shock or weak organic acid, it inhibits Pma1p activity. In this study, we measured the levels of Pma1p in mutant and Wt cells both during optimal temperature and heat shock temperature. We observed that $BY4741{\Delta}hsp30$ cells showed constitutive reduction of Pma1p. To gain further insights into the role of Hsp30 during heat stress, we compared the total protein profile by 2D gel electrophoresis followed by identification of differentially expressed spots by LC-MS. We observed that contrary to that expected from thermal-stress-induced changes in gene expression, the ${\Delta}hsp30$ mutant maintained elevated levels of Pdc1p, Trx1p, and Nbp35p and reduced levels of Atp2p and Sod1p during heat shock. In conclusion, Hsp30 is necessary during lethal heat stress, for the maintenance of Pma1p and a set of thermal stress response functions.
Kim, Jin-Su;Lee, Han-Na;Lee, Heung-Shick;Kim, Pil;Kim, Eung-Soo
Journal of Microbiology and Biotechnology
/
v.23
no.10
/
pp.1365-1371
/
2013
The Streptomyces coelicolor wblA gene is known to play a negative role in both antibiotic biosynthesis and the expression of genes responding to oxidative stress. Recently, WhcA, a WblA ortholog protein, was confirmed to interact with dioxygenase-encoding SpiA ($\underline{s}$tress $\underline{p}$rotein $\underline{i}$nteracting with Whc$\underline{A}$) in Corynebacterium glutamicum. We describe here the identification of a SpiA ortholog SCO2553 protein ($SpiA_{sc}$) that interacts with WblA in S. coelicolor. Using heterologous expression in E. coli and in vitro pull-down assays, we show that WblA specifically binds $SpiA_{sc}$, and is influenced by oxidants such as diamide. These data indicate that the interaction between WblA and $SpiA_{sc}$ is not only specific but also modulated by the redox status of the cell. Moreover, a $spiA_{sc}$-disruption mutant exhibited a less sensitive response to the oxidative stress induced by diamide present in solid plate culture. Real-time RT-PCR analysis also showed that transcription levels of oxidative stress response genes (sodF, sodF2, and trxB) were higher in the $spiA_{sc}$-deletion mutant than in wild-type S. coelicolor. These results show that $SpiA_{sc}$ negatively regulates WblA during oxidative stress responses in S. coelicolor.
Background: Expression of recombinant antibodies and their derivatives fused with other functional molecules such as alkaline phosphatase in Escherichia coli is important in the development of molecular diagnostic reagents for biomedical research. Methods: We investigated the possibility of applying a well-known Fos-Jun zipper to dimerize $V_H$ and $V_L$ fragments originated from the Fab clone (SP 112) that recognizes pyruvate dehydrogenase complex-E2 (PDC-E2), and demonstrated that the functional zipFv-112 and its alkaline phosphatase fusion molecules (zipFv-AP) can be produced in the cytoplasm of Origami(DE3) trxB gor mutant E. coli strain. Results: The zipFv-AP fusion molecules exhibited higher antigen-binding signals than the zipFv up to a 10-fold under the same experimental conditions. However, conformation of the zipFv-AP seemed to be influenced by the location of an AP domain at the C-terminus of $V_H$ or $V_L$ domain [zipFv-112(H-AP) or zipFv-112(L-AP)], and inclusion of an AraC DNA binding domain at the C-terminus of VH of the zipFv-112(L-AP), termed zipFv-112(H-AD/L-AP), was also beneficial. Cytoplasmic co-expression of disulfide-binding isomerase C (DsbC) helped proper folding of the zipFv-112(H-AD/L-AP) but not significantly. Conclusion: We believe that our zipFv constructs may serve as an excellent antibody format bi-functional antibody fragments that can be produced stably in the cytoplasm of E. coli.
Phospholipid hydroperoxide glutathione peroxidase (PHGPx) is an unique antioxidant enzyme that directly reduces lipid hydroperoxides in biomembranes. In the present work, the entire encoding region for Oryza sativa PHGPx was expressed in Escherichia coli M15, and the purified fusion protein showed a single band with 21.0 kD and pI = 8.5 on SDS- and IFE-PAGE, respectively. Judging from CD and fluorescence spectroscopy, this protein is considered to have a well-ordered structure with 12.2% $\alpha$-helix, 30.7%$\beta$-sheet, 18.5% $\delta$-turn, and 38.5% random coil. The optimum pH and temperature of the enzyme activity were pH 9.3 and 27$^{\circ}C$. The enzyme exhibited the highest affinity and catalytical efficiency to phospholipid hydroperoxide employing GSH or Trx as electron donor. Moreover, the protein displayed higher GSH-dependent activity towards t-Butyl-OOH and $H_2O_2$. These results show that OsPHGPx is an enzyme with broad specificity for hydroperoxide substrates and yielded significant insight into the physicochemical properties and the dynamics of OsPHGPx.
Park, Sang-Kyoon;Lee, Joong-Sook;Park, Seung-Bum;Stefanyshyn, Darren
Korean Journal of Applied Biomechanics
/
v.19
no.2
/
pp.369-377
/
2009
The purpose of this study was to determine the relationship between different soccer cleat designs and knee joint moments. Twelve physically active males (mean(SD): age: 26.4(6.2)yrs; height: 176.4(4.1)cm; mass: 74.0 (7.4)kg) were recruited Kinematic and force plate data were collected for all subjects during normal running and a $45^{\circ}$ cutting maneuver, called a v-cut. Both motions were performed at $4.0{\pm}0.2\;m/s$ on infilled artificial turf with three pairs of soccer cleats of different sole plate designs, and one pair of neutral running shoes. Inverse dynamics were used to calculate three dimensional knee joint moments, with repeated measures ANOVA and post hoc paired Student's t-test used to determine significance between shoe conditions. Significant differences were found in the extension moments of the knee for running trials, and for external rotation and adduction moments in the v-cutting trials. Knee moments were greater in v-cut than running, and the traditional soccer cleats (Copa Mondial and World Cup) tended to result in greater knee moments than the Nova runner or TRX soccer cleat. Cleat design was found to influence 3-dimensional knee moments in a v-cut maneuver. In the translational traction test, there were significant differences between all conditions. In the rotational traction test, friction with soccer shoes were greater than friction with running shoes. However, no differences were found between soccer shoes. Higher moments may lead to increased loads and stresses on knee joint structures, and thus, greater injury rates.
Park, Dong-Ju;Lee, Yong-Suk;Chang, Jie;Fang, Shu-Jun;Choi, Yong-Lark
Journal of Microbiology and Biotechnology
/
v.23
no.3
/
pp.397-404
/
2013
Paenibacillus xylanilyticus KJ-03 was isolated from soil samples obtained from a field with Amorphophallus konjac plants. A gene encoding xylanase was isolated from KJ-03 and cloned using a fosmid library. The xynA gene encodes xylanase; it consists of 1,035 bp and encodes 345 amino acids. The amino acid sequence deduced from the P. xylanilyticus KJ-03 xylanase showed 81% and 69% identities with those deduced from the P. polymyxa E681 and Paenibacillus sp. HPL-001 xylanases, respectively. The xynA gene comprises a single domain, consisting of a catalytic domain of the glycosyl hydrolase (GH) 10 family. The xynA gene was expressed in Escherichia coli BL21 (trxB), and the recombinant xylanase was purified by Niaffinity chromatography. The purified xylanase showed optimum activity with birchwood xylan as a substrate at $40^{\circ}C$ and pH 7.4. Treatment with $Mg^{2+}$ and $Li^+$ showed a slight decrease in XynA activity; however, treatment with 5 mM $Cu^{2+}$ completely inhibited its activity. The results of the thin layer chromatography analysis indicated that the major hydrolysis product was xylobiose and small amounts of xylose and xylotriose. XynA showed increased activity with oat spelt xylan and birchwood xylan, but showed only slight activity with locust bean gum.
The Journal of the Institute of Internet, Broadcasting and Communication
/
v.24
no.1
/
pp.23-30
/
2024
This paper dedcribes the design. verification, and analysis techniques for an advanced phased array antenna. When applying an active phased array antenna to an aircraft or missile, miniaturization of the array antenna and wide-angle beam steering characteristics can be unavoidable antenna design considerations. In particular, the active reflection coefficient characteristics when electronically steering a wide-angle beam is a design parameter that must be minimized in terms of system survival and system performance. As a radiator suitable for broadband characteristics and wide-angle beam steering, this paper designed an array structure using SFN and minimized the active reflection coefficient according to beam steering of up to 40° based on the spherical coordivate system angle. The bandwidth of the radiator was confirmed to be 3GHz based on active reflection in the Ka-band. In addition, the performance of the actually manufactured 8by8 array antenna wsa analyzed by measuring the single pattern of the radiator through a near-field test, mathematically synthesizing it, and predicting the Tx/TRx beam used in the seeker system.
Proceedings of the Korean Society of Developmental Biology Conference
/
2003.10a
/
pp.74-74
/
2003
In present study, attempts were made to preserve abalone (Haliotis discus hannai) sperm in liquid form at low temperature, to evaluate the effect of various diluents in short-term storage on sperm, and cryopreservation procedures were optimized for the cryoprotectants as well as freezing rates, in terms of the motility and survival rate, and the ultrastructural changes of sperm after short-term storage and cryopreservation were observed. The abalone sperm reached maximum motility until about 4min after activation. The motility was constant for about 16min, after which it dropped gradually, and about 50min later all motility ceased. Threshold activation of sperm was found in 40% artificial seawater (ASW), and motility increased as the concentration of ASW increased. In Hanks balanced salt solution without calcium (Ca-Free HBSS, 300 and 400 mOsmol/kg) and 10%, 20%, and 30% ASW the sperm was immotile, and motility once again restored incompletely only in HBSS of 300 and 400 mOsmol/kg, 20% and 30% ASW after 100% ASW was added. Sperm motility was extended following 20 days of cold storage only in 70% and 100% ASW. A high motility index of 3.5-4.5 was observed for the first 8 days in 70% and 80% ASW. In other diluents sperm motility was constant less than 10 days, and the motility index was obviously lower than that of sperm in 70% and 100% ASW. After 20 days of cold storage survival rates of 10.2%-20.7% were obtained in ASW and 300 mOsmol/kg HBSS, and that in 400 HBSS (65.3%) was significantly higher than others. The constant period of sperm motility stored in 70% ASW was longer obviously than that in 100% ASW after 6 days of storage, and the time to maximum motility of sperm stored in 70% increased gradually, while the difference in which of sperm in 100% ASW was not significant. The sperm plunged into liquid nitrogen all died except that sperm using 15% glycerol as cryoprotectant restored 10.4% of motility. The highest motility index (3.4) was obtained with 5% glycerol and freezing procedure: $50^{\circ}C$/min from $20^{\circ}C$ to $-80^{\circ}C$.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.