KF 116 was TMV resistant tobacco plant and KB 301 was PVY resistant plant transformed with TMV CP gene and PVY CP gene, respectively. These resistant plants were cross-fertilized and the 4 lines of the TMV-PVY resistant plants were selected from F1 hybrid plants. The rate of PVY-resistant plant in these hybrids was 100 percent and that of TMV-resistant plants including delay type was 90-98 percent at 4 weeks after virus inoculation. It was confirmed that the TMV and PVY CP genes were integrated into the genome of hybrid plants by genomic PCR, and Southern blot hybridization. The genome of F1 hybrid plants had one copy and 4 copies of PVY-CP gene and TMV-CP gene, respectively, and CaMV 35S promoters were not methylated, regardless of the difference symptom development to TMV.
담배 모자이크 바이러스(TMV)와 감자 바이러스 Y(PVY) 등 식물바이러스병은 잎담배 생산에 심한 경제적 손실을 초래하고 있다. 바이러스병 방제를 위한 여러 가지 경종적 방법은 충분한-방제 효과를 얻지 못하는 경우가 많아 바이러스의 방제에는 우수한 저항성 품종의 사용이 가장 바람직한 것으로 알려져 있다. 그러나 기존의 육종 방법이 저항성 품종 개발에 항상 바람직한 것은 아닌데 그 이유는 저항성 유전자원이 없는 경우가 많고 또한 육종을 통해 유전자원의 열등한 특성이 도입될 수 있기 때문이다. 따라서 본 연구실에서는 TMV와 PVY의 여러 가지 형태의 외피단백질(CP) (비전사부분 포함 또는 제거, 비 전사부분 등) 및 복제유전자(Nlb) (3' 및 5' 결손 유무, 돌연변이)를 상용 담배 품종인 NC 82와 Burley 21에 형질전환시켜 바이러스 저항성 개발을 시도하였다. 각각의 유전자 cDNA를 1-2개의 35S promotor를 가진 식물발현벡타에 클로닝한 후 Agrobacteriupn (upnefaciens LBA 4404를 이용하여 식물의 잎조직에 도입시킨 후 kanamycin 함유 MS 배지에서 식물체를 재닥화하였다. 재분화 식물체는 TMV와 PVY에 대한 저항성 검정을 하였다. 그 결과 TMV에 저항성인 TMV CP 형질전환 식물체와 8 가지 Nlb 형질전환 식물체 계통 중에 6 계통의 저항성 형질전환 식물체를 획득하였다. 여기에서는 TMV와 PVY의 접종시험을 통하여 각각의 바이러스에 대한 형질전환 담배의 계통별 저항성 정도를 조사하고, 저항성 형질전환 식물체에서의 도입 유전자 확인하며, 세대별 저항성의 유전 및 안정성을 살펴보고자 한다. 또한 유망 저항성 형질전환 계통의 식물체 내에서의 바이러스 증식 및 이동과 관련된 저항성 기작, 여러 가지 PVY 계통에 대한 저항성 유무, 수량, 생육 특성 및 주요 화학 성분 함량 등을 발표하고자 한다.-glucose로 구성된 다당류 이었다. 아미노산은 Asp 및 Glu의 산성 아미노산과 Ala, Leu 등의 함량이 높게 나타났으며, 비알칼리 추출물에서 Ser과 Thr의 함량이 높게 나타났다. 다당류 T-AS는 평균 분자량이 2,000 kD와 12kD에서 주 peak를 나타냈으며, 수용성 분획의 평균 분자량은 12kD이고 비수용성 분획은 36~2,000 kD의 평균 분자량 분포를 갖는 것으로 나타났다. IR과 NMR 분석 결과 890 cm-1에서 흡수 peak를 나타내어 $\beta$-(1,3)0glucan과 $\beta$-(1,6)-glucan의 구조를 갖는 다당류로 확인 되었다. T-AS 분획은 C:H:O:N의 함량비가 38.9:5.7:49.6:1.84%이며, 이 물질의 융점은 163 $^{\circ}C$로 연한 갈색을 나타낸다. 분리된 GLG의 항암활성 기전 규명을 위해, in vivo 항암실험, 항보체 활성능, 항체 생성능, serum protein 분비능, 대식세포의 탐식능과 활성능 및 세포간 물질 분비 등의 상관관계를 조사하였다. 다당류 GLG 분획물들 가운데 항보체의 활성이 높았던 분획은 sarcome 180에 대한 항암 활성이 높게 나타났다. 다당류 T-AS의 보체 활성화 기작은 classical과 alternative complement pathway의 양 경로를 통해 활성화 되었다. T-AS 분획은 mouse내의 특정 혈청단백을 증가시켰으며, 항체 생성능의 증가가 관찰되어 effect T 세포의 활성화가 나타나고 있음을 알 수 있었다. T-AS는 생체내 투여시에 대식세포의 탐식능이 증진되었으며, 대식세포 기능 저해제에 의한 대식세포의 기능 저해 현상이 회복되었다. 이와 같은 결과들로부터, T-AS의 항암 활성은 활성화된 보체 성분 및 당 수용체들이 존재하는 대식세포의 개입을 시사한다.가능성과
The vein-necrosis strain or potato virus Y (PVY-Vff) and black shank (Phytophlhora parasitica roar. nicotianae) causes severe damage on burley tobacco(Wicotiana tabacum L.) in Korea, A new burley tobacco resistance to PVY and black shank, KB 110, was developed by Korea Ginseng and Tobacco Research Institute. It was developed from the cross of Burley 21 with TC 591 in 1990, and was backrossed to Burley 21 in the following season. TC 591 has resistance to PVY and moderate resistance to race 0 of black shank, but it is susceptible to tobacco mosaic vim (TMV). KB 110 was evaluated for its resistance to PVY, TMV and black shank in the greenhouse and at fields for preliminary and performance trials. KB 110 which has secreting glandular trichomes was resistant to PVY-VN, TW and black shank. It had an erect growth habit and two more leaves per plant than that of Burley 21, and matures two to three days later. It yielded approximately 3 percent more cured leaf than the standard cultivar Burley 21, but other plant characteristics were very similar to those of Burley 21. It had acceptable standards for chemical and physical characteristics of lured leaf on regional farm test in 1995-1997. KB 110 produced average yields of good quality tobaccos and was appeared to be resistant to PVY inwhere occurrence of the virus are severe chronic at burley growing area.
The occurrence of potato(Sotanum tuberosum) viral diseases caused by Potato virus X(PVX), Potato virus Y (PVY), Potato leafroll virus(PLRV), Potato vims S(PVS), Potato virus M(PVM), Potato virus A(PVA), Potato virus T(PVT), Alfalfa mosic virus(AIMV), Tobacco mosic virus(TMV), Potato mop top virus(PMTV) Tobacco rattle virus(TRV) and Potato spindle tuber viroid(PSTVd), potato witches' broom phytoplasma, have been identified so far in Korea. Major viral diseases such as PVX, PVY and PLRV had been studied more deeply, however, the others are just identified and only partially characterized since the first study on the relation between PVX nucleic acid and virus protein by Kim in 1961. The most studies on potato viral diseases are mainly focused on the problems of seed potato production. The National Alpine Agricultural Experiment Station(NAAES), since it began its activities in 1961, has given special attention to this problem by doing studies to identify, characterize and control potato virus diseases. This effort resulted in the development of new potato virus detection methods as a basis for elaborating new method of control, such as the production of seed potato free of virus and the selection of new virus-resistant transgenic potatoes. The further studies of potato viral diseases required would be fallowings: the continuous monitoring for the occurrence of identified or not identified potato viruses in Korea, the isolation of resistant viral genes, the development of control method for the non-persistently transmitted viruses like PVY, special vectors such as nematode and fungus transmitted viruses, TRV and PMTV and the development of control methods against potato viral diseases by viral cross protection, therapy, transgenic plant, and the use of the agents or molecules, such as virus inhibitors and antiviral proteins, etc., blocking viral replication.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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