Tobacco mosaic virus(TMV) 외피단백질 유전자를 연초(Nicotiana tabacm cv. NC82)에 형질전환하고 형질전환 식물체 후세대에서 TMV 저항성인 연초를 선발하여, 선발된 TMV 저항성 제5세대 형질전환 식물체의 도입된 유전자발현 및 고온에서의 특성 등을 조사하였다. TMV 저항성 식물체의 염색체 DNA에 TMV 외피 단백질 유전자가 안정되게 존재하고 있음을 genomic PCR을 수행하여 확인하였다. 또한 형질전환 식물체내에서 TMV 외피 단백질 발현은 Immunoblot hybridization 방법으로 확인하였다. TMV 저항성 형질전환 연초식물체에서 발현된 단백질의 양은 매우 적었으며 특히 본엽에는 병징이 나타나지 않았으나 수확기 마지막 액아에 TMV의 반점이 나타난 병징발현 지연형의 형질전환 식물체의 경우에도 발현된 단백질의 양은 정상 NC 82에 TMV가 감염되었을 때와 비교하여 현저히 적었다. TMV 저항성 형질전환 식물체 내에서 발현되는 TMV 외피단백질의 양은 총 단백질에 대비하여 0.01% 이하이였다. TMV 병징 발현 지연형인 형질전환 식물체에 TMV를 인공접종한 후 고온처리상태에서 외피 단백질 유전자의 전사 및 발현을 RT-PCR과 Immune blot hybridization 통하여 확인하였으며, 이때 TMV의 증식도 억제되었으므로 개량멀칭시 나타나는 고온조건하에서도 저항성이 안정적으로 발현될 수 있음을 알 수 있었다.
In the screening of antiviral materials produced by actinomycetes, an isolate named B25 was fond to produce an antibiotic substance ASA, which showed a strong inhibitory activity against tobacco mosaic virus (TMV) infection. ASA was purified from culture broth of B25 by silica gel column chromatography, preparative TLC, and reversed phase HPLC. Also MS, IR, UV spectrum, and melting point of ASA were determined and analysed. ASA was white powder soluble in dimethyl sulfoxide, chloroform, and ethyl acetate, having absorption peaks at 223 and 328 nm in UV-VIS spectrum, and had a molecular weight of 548. ASA showed strong inhibitory effect on TMV infection when it was applied as a mixture of TMV to the upper surface of leaves of a local lesion host (Nicotiana tabacum c. Xanthi-nc). It also showed antimicrobial effect against yeast and some phytopathogenic fungi.
2가 금속인 구리와 아연을 다양한 농도로 각각 담배모자이크 바이러스(TMV)에 처리하여 감염성에 어떤 영향을 주는 가를 조사하였다. TMV의 감염성은 아연의 첨가에 의해 활성화된 반면, 구리의 첨가에 의해 감소되었다. 아연을 첨가한 바이러스 접종원을 담배 잎에 처리한 결과 바이러스만을 접종한 잎보다 더 많은 국부반점이 생성되었다. TMV의 감염성을 감소시키는 구리의 효과는 구리의 농도에 관련되는 결과를 나타내었다. 또한 전기영동으로 다양한 농도의 구리와 아연에 처리된 TMV를 분석한 결과 그 특성이 변화됨이 관찰되었다. 아연 200mM 이상의 농도에 노출시 바이러스는 완전히 분해되었고, 40-20 mM 농도에서는 간신히 바이러스의 흔적을 찾을 수 있으나, 2 mM 농도에서는 상당히 안정되었다. 구리의 경우 20 mM 이하의 농도에 처리되었을 때 구조적으로 완전하게 남아있으나, 100 mM 이상의 처리에서는 완전히 분해되었다.
시판중인 18품종의 토마토 종자에 대하여 TMV, ToMV, CMV의 오염률과 종자 전반률을 조사한 결과 TMV와 ToMV는 각각 9품종에서 오염이 확인되었으며, CMV는 3품종에서 바이러스 오염을 확인하였다. TMV는 3.8%로 가장 높은 오염률을 보였고, ToMV는 2.6%, CMV는 1.4%의 오염률을 보였다. 자연적인 종자 전반률을 조사한 결과, 공시한 9품종의 토마토종자에서 ToMV는 3품종에서 4.4%, CMV는 4품종에서 2.2%의 종자 전반률을 확인할 수 있었으며, TMV는 본실험에서는 종자 전반을 확인할 수 없었다. 1999년 10월부터 2000년 10월까지 충청북도 주요 토마토 재배지역에서 TMV, ToMV CMV의 지역별 바이러스 감염률과 병정별 감염률 및 생육시기에 따른 세 바이러스의 감염률을 조사한 결과, 각 지역의 토마토 포장에서는 잎말림, 괴저 및 왜화 등의 다양한 병징을 보였으며, 대부분의 포장에서 잎말림 증상이 관찰되었으며, 모자이크 증상과 누렁증상 등의 병징도 많이 관찰되었으며, 로꾸산마루 품종에서 다양한 병징이 관찰되었다. 지역별로는 옥산 지역의 로꾸산마루 포장과 가금지역의 꼬꼬 포장 및 노은지역의 로꾸산마루 포장에서 TMV와 ToMV 및 CMV의 감염률이 높았으며, ToMV의 감염률은 가금지역의 꼬꼬 포장에서 43.3%로 가장 높았으며, CMV의 감염률은 노은지역의 로꾸산마루 포장에서 40.0%로 다른 포장보다 높았다. 병징에 따른 바이러스의 감염률은 누렁증상을 보이는 병징에서 ToMV가 가장 높았고, 괴저 증상을 보이는 잎에서는 CMV가 가장 높았으며, 잎말림 과총생 및 얼룩무늬 등 대부분의 병정에서 ToMV의 감염을 확인하였고, TMV의 감염률은 낮았다. 생육단계별에 따른 바이러스 감염률을 조사한 결과 생육초기보다 생육중기와 후기가 바이러스의 오염률이 높았으며, 생육중기와 생육후기의 감염률은 차이가 없었다.
When inoculated into sensitive tobacco Xanthi-nn plants, the crucifer and garlic-infecting Tobacco mosaic virus (TMV-Cg) induces local necrotic lesions that resemble those seen in the hypersensitive response (HR) of resistant tobacco plants. However, unlike these, tobacco Xanthi-nn plants do not become resistant to infection and the virus spreads systemically causing a severe disease characterized by necrotic lesions throughout the plant. To identify the viral protein that elicits this necrotic response, we used a set of hybrid viruses constructed by combination of TMV-Cg and the tobacco mosaic virus strain U1 (TMV-U1). In this study we present evidence that the coat protein of TMV-Cg (CPCg) is the elicitor of the necrotic response in tobacco Xanthi-nn plants. Local and systemic necrotic lesions induced by TMV-Cg and by the hybrid U1-CPCg -that carries CPCg in a TMV-U1 context- are characterized by cell death and by the presence of autoflorescent phenolic compounds and $H_2O_2$, just like the HR lesions. In addition, defense-related genes and detoxifying genes are induced in tobacco Xanthi-nn plants after TMV-Cg and U1-CPCg inoculation. We postulate that in our system, CPCg is recognized by sensitive tobacco plants that mount an incomplete defense response. We call this an HR-like since it is not enough to induce plant resistance.
Tobacco plants resistant (cvs. Xanthi-nc and Samsun-NN) and susceptible (cv. NC 82) to tobacco mosaic virus (TMV) were inoculated with TW to obtain basic information about the characteristics of resistance expression in tobacco plants by examining the viral populations, symptom development and gene expression of pathogenesis-related proteins (PR-proteins) such as PR-1 and $\beta$-1, 3-glucanase in different temperature conditions. TMV populations in resistant plants increased more at 37$^{\circ}C$ than at 27$^{\circ}C$, while the viral populations increased continuously and were not significantly influenced by the temperature conditions in the susceptible tobacco plants. Infection sites of resistant tobacco leaves were remarkably expanded in proportion with increased time at the high temperature.
A number of antibiotics and organic compounds were tested for their effect on the multoplication of tobacco mosaic virus(TMV) in floating leaf discs. 1)Among six antibiotics tested, kanamycin sulfate showed 24% or more inhibition to TMV multiplication under these experimental conditions. Aureomycin hydrochloride and chloramphenicol showed 19% and 14% inhibition respectively. 2)For screening of organic compounds two environments were used, a diffuse day- light environment (25 foot-candles and laboratory temperature) and an artificial light environment for 12 hours per day(300 foot-candles at 4 to $5^{\circ}C above laboratory temperature). A wide range of organic compounds increased virus multoplication in the diffuse daylight environment but had less effect, or ingibited virus multiplication, in the artificial light environment. 3)The following compounds were among the most effective in increasing TMV multiplication: glucose-1-phosphate, L-aspartic acid, glucose, and 5-bromouracil. The following compoumds were most effective in inhibiting TMT multiplication: thiouracil, uracil, DL-isoleucine, L-leucine, and zinc chloride.
The mechanism of synthesis of the toacco mosaic virus(TMV) and the potato virus X(PVX) was investigated using the methods of ultraviolet light irradiation and serological analysis. In vitro irradiation of UV on the infected tobacco juice for 10 minutes caused the infectivity of TMV and PVX to decrease markedly on their respective local lesion indicator hosts, Nicotiana glutinosa L. and Gomphrena globosa L., indicating that UV destroys directly the infectivity of the virus particles. Ten minutes after the UV was irradiated on the leaves of the two indicator hosts before inoculation, the infectivity of TMV decreased as it was irradiated in vitro, whereas that of PVX increased by 26% as compared with the unirradiated control. When the two viruses were mix-inoculated in the common host of tobacco and the synthetic products were analyzed by serological methods for a two week infection period, it was found that both viruses were multiplying more rapidly and abundantly than they were singly inoculated into the same host species. Titers from mixed series were often two times as high as those of singly inoculated series. A mechanism of competition in the synthesis between the mixed viruses in the common host is postulated.
Kim, Young-Ho;Choi, Do-Il;Yeo, Woon-Hyung;Kim, Young-Sook;Chae, Soon-Yong;Park, Eun-Kyung;Kim, Sang-Seock
The Plant Pathology Journal
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제16권5호
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pp.264-268
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2000
A fluorescent material was accumulated in inoculated leaves showing necrotic local lesions of tobacco plants with N gene, Nicotiana tabacum cvs. Xanthi-nc NN, Samsun NN, Burley 21 and KF 114, and N. glutinosa, and Datura stramonium at the early growth stages by the inoculation of Tobacco mosaic virus (TMV). It was identified as a coumarin phytoalexin, scopoletin. Although the material was most prominently produced in TMV-inoculated tobacco leaves with local necrotic lesions, its accumulation was also noted in uninoculated leaves of TMV-inoculated plants. Its accumulation was somewhat greater in high resistance-induced leaves than low resistance-induced and intact leaves. Scopoletin treatment induced the expression of a pathogenesis-related protein, PR-1, prominently at the concentration of 500 or 1000 ${\mu}$g/ml. This suggests that scopoletin is a phytoalexin abundantly accumulating in N gene-containing resistant plants in response to TMV infection, and may be related to hypersensitive responses (HR) and systemic acquired resistance (SAR) in the resistant tobacco plants.
Tobacco (Nicotiana tabacum cvs.Xanthi-nc and NC 82) plants infected with Tobacco mosaic virus (TMV) were examined ultrastructurally. Local lesions produced by TMV were sunken and withered. The plants were subjected to temperature shift (TS), a method to produce programmed cell death (PCD), by placing the infected plants initially at high temperature (35$^{\circ}C$) for 2 days and then shifting them to greenhouse temperature (22-27$^{\circ}C$). As a result, expanded lesions around the original necrotic lesions were produced. The expanded area initially had no symptoms, but it withered and became necrotic 15 h after TS. No ultrastructural changes related to PCD were noted at 0 h after TS in Xanthi-nc tobacco tissues as well as in healthy and susceptible tobacco tissues infected with TMV, At 6 h after TS, chloroplasts were convoluted and cytoplasm began to be depleted; however no necrotic cells were found. At 17 h after TS, ground cytoplasm of affected cells was completely depleted and chloroplasts were stacked together with bent cell wall or dispersed in the intracellular space. Necrotic cells were also observed, containing virus particles in the necrotic cytoplasm. There were initially two types of symptoms in the expanded lesions: chlorosis and non-chlorosis (green). Abundant TMV particles and X-bodies were only found in the chlorotic tissue areas. These results suggest that PCD by TMV infection may start with the wilting of cells and tissues before necrotic lesion formation.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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