This study was conducted to confirm the possible use of female Yangwonjam as a host for synnemata production of Isaria tenuipes in eight local areas in Korea. Silkworm pupation rate, infection rate and synnemata characteristics of I. tenuipes were examined. Normal silkworms had a higher pupation rate than silkworms inoculated with I. tenuipes. The pupae survival percentage of normal silkworm in cocoons was 92.5~97.6%, whereas it ranged from 91.1~95.6% in silkworms sprayed with I. tenuipes. Female Yangwonjam showed the highest survival percentage at 97.6% among the silkworm varieties tested. I. tenuipes infection rate of larvae of 5th instar newly-exuviated silkworms was 89.2~90.7% in the spring rearing season and 98.2~99.3% in the autumn rearing season. Synnemata production of I. tenuipes was excellent in female Yangwonjam with an incidence rate of 98.0% followed by male Yangwonjam (94.1%) and Baegokjam (93.3%) in the spring rearing season. Synnemata living weight ranged from 1.44~0.94 g in the spring rearing season. The female Yangwonjam had the heaviest synnemata weight (1.44 g) in the spring rearing season. The synnemata of I. tenuipes produced on pupae were white or milky-white in color, and were similar in shape and color to wild synnemata collected in Korea.
눈꽃동충하초 분생자경속을 형성하는데 액체배양을 이용한 접종원의 배지는 PDB가 가장 우수하였으며, 분생자경속 형성에 유리한 배양온도는 $20^{\circ}C$로 나타났다. 조명은 500lx.에서 가장 양호한 성장을 하였으며 광조사 시간은 18hr이 가장 유리한 분생자경형성 조건을 나타내었다. 알맞은 배지 조건은 번데기와 현미를 50 : 50의 비율에 증류수를 현미에 1 : 1비율로 첨가한 혼합배지에서 높게 나타났다. 번데기배지는 원형상태와 분쇄상태 중에서는 분쇄된 상태에서 번데기배지의 공극률이 높아 균사의 침입이 용이하여 분생자경속 회수율과 균사의 배지내에 형성이 원형상태의 번데기보다 더욱 높게 나타났으며, 균사의 생장도 역시 분쇄한 번데기에서 더욱 빠르고 고르게 나타났다. 종균 접종량은 $15m{\ell}$의 종균을 접종하면 분생자경속이 잘 형성되었다. 눈꽃동충하초 재배에 가장 안정하게 재배하려면 분쇄한 번데기에 현미와 혼합한 배지에 종균 $15m{\ell}$를 접종하여 24 에서 발이를 시킨 후 $20^{\circ}C$의 배양실에서 재배하는 것이 가장 좋은 것으로 나타났다.
This study was conducted out to select a silkworm variety suitable for synnemata production of Isaria tenuipes. Four kinds of the mulberry silkworm varieties, Bombyx mori, were hybridized using a Japanese parental line and a Chinese parental line, and used to test for synemata formation in I. tenuipes. The larval period of normal silkworms was 22 hr longer than the silkworms inoculated with this fungus. Among the silkworm varieties tested, Hachojam had the shortest larval period with 23.02 days. The non-cocooning silkworm had a shorter larval period than the cocoon producing silkworms. The pupation rate of normal silkworms was about 9% higher than that of silkworms sprayed with I. tenuipes. Hachojam had the highest infection rate at 99.8%, but no significant difference was observed for the infection rate by silkworm variety. The production of synnemata was the best in JS171 $\times$ CS188 with an incidence rate of 99.3%, followed by Hachojam, and Chugangjam. The synnemata produced from Hachojam were the heaviest and showed white or milky-white in color.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제22권1호
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pp.1-4
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2011
This study was conducted to test the use of colored cocoon silkworm, Golden Silk, as a host for the fruiting body production of Cordyceps mushroom. Golden Silk variety had a shorter larval period than Yangwonjam at $25.3^{\circ}C$ and 78.5% RH: The average larval period of the Golden Silk was 24 days and 7 hr, and that of the Yangwonjam was 24 days and 15 hr. In the infection test of I. tenuipes on silkworm, the larval period of normal silkworms was longer than the silkworms inoculated with I. tenuipes in both Golden Silk and Yangwonjam. The pupae survival percentage of Golden Silk was 94.4%, whereas it was 91.9% in Yangwonjam. Golden Silk had a higher pupation rate than Yangwonjam. The pupation rate of normal silkworms was about 5% higher than that of silkworms inoculated with I. tenuipes. Infection rate of I. tenuipes into larvae of 5th instar newly exuviated silkworm was 93.8% in Golden Silk, and 96.9% in Yangwonjam. Synnemata production of I. tenuipes was better in Yangwonjam with an incidence rate of 99.8% than Golden Silk with 98.6%. The average synnemata weight of Golden Silk was 1.12 g and that of Yangwonjam 1.29 g. Golden Silk had a lower synnemata weight than Yangwonjam. But no significant difference was observed in synnemata weight varieties. The synnemata of I. tenuipes produced on pupae were white or milky-white in color, and similar in shape and color to wild synnemata collected in Korea.
Single ascospore isolates of Cordyceps bassiana were observed for their colony pigmentation on Sabouraud Dextrose agar plus Yeast Extract (SDAY) plates and were inoculated in a brown rice medium for production of fruiting bodies. Colony pigmentation did not show any relationship with perithecial stromata formation. The isolates were also grown on opposite sides of SDAY agar plates and were observed for vegetative compatibility. Neither vegetative compatibility nor perithecial stromata could be found to be related to each other. It was concluded that fertile fruiting body production was independent of colony pigmentation and vegetative compatibility. Synnemata formation was found to be more common than perithecial stromata formation. This might be due to its highly conidiogenous anamorphic stage, i.e., Beauveria bassiana.
한생잠, 양원잠 등의 한성반문잠품종은 누에유충의 반문을 이용하여 암 수감별이 가능하기 때문에 번데기로 용화되기 전인 4령기나 5령기 유충때 숫번데기 생산용과 누에동충하초 생산용으로 구분 사육이 가능한 품종이다. 즉, 누에동충하초 종균 접종 전인 4령기 때는 암 수별 성징을 나타내는 무늬가 뚜렷이 나타나고, 누에사육 노동력도 적게 들어 감별에 적당한 시기로서, 무늬를 보고 암 수를 감별하여 별도의 잠실이나 사육대에서 사육하다가 무늬가 있는 암누에는 5령기잠 때 누에동충하초 종균을 접종하고, 무늬가 없는 숫누에는 일반누에 사육방법과 동일하게 사육하여 숫번데기를 생산할 수 있는 최적의 품종이다. 다만, 암 수를 감별할 때 발톱 등에 상처를 입게 되면 누에병이 유발돼 화용비율이 떨어질 수도 있으나, 4령기말 면처리 전에 감별하면 상처가 거의 나지 않기 때문에, 감별을 한 누에와 감별을 하지 않은 누에와의 건강도 차이는 거의 없는 것으로 나타났다. 한성반문잠품종을 이용하여 누에동충하초와 숫번데기를 생산하기 위하여는 누에씨의 안정적인 보급이 우선으로 해당품종의 누에를 사육하기 1년 전에 해당도의 잠업기관 및 누에씨 생산업체에 한생잠 또는 양원잠의 생산 및 보급을 요청하여야 한다. 누에사육 방법은 일반 누에품종과 동일하며, 누에가 4령 말에 마지막 잠들기 전에 누에의 무늬를 보고 암 수를 감별하여 별도로 사육하며, 암수감별법은 아래 사진에서 보는 것과 같이 반문이 없는 흰 누에는 숫누에, 반문이 있는 누에는 암누에로서 특별한 기술없이 육안으로 확인하여 선별하면 된다. 숫누에를 이용한 숫번데기 생산방법은 반문이 없는 흰색의 숫누에만을 선별하여 기존의 누에고치를 생산하는 일반누에 사육방법과 동일하게 사육하여 누에를 상족시킨 다음 7 ~ 8일경이 지나서 수견 및 절견하여 고치 속에 있는 번데기를 꺼내 숫번데기를 생산하면 된다. 번데기를 꺼낸 다음에는 이미 누에 때 암 수 감별을 한 것이기 때문에 별도의 감별을 할 필요없이 상온에 보호하다 번데기가 나방으로 변태가 될 무렵에 냉동시키거나 수매하면 된다. 암누에를 이용한 누에동충하초 생산방법은 반문이 있는 암누에만을 4령말에 따로 골라내 별도로 면처리를 하고 5령기잠이 되면 눈꽃동충하초 종균을 접종한 후 일반누에 사육방법과 동일하게 사육하여 누에를 상족시켜 준 다음 상족 후 7 ~ 8일경에 수견을 한다. 이후 다시 3 ~ 4일이 지나 상족 후 10 ~ 12일 정도가 경과되면 절견하여 번데기를 꺼내 누에동충하초에 감염돼 딱딱하게 굳은 번데기를 선별하여 $20^{\circ}C$ 90% 내외의 온 습도에 보호해 주며, 이후 1 ~ 2일이 경과하여 감염된 번데기 표피에 흰색의 균사가 생기고 번데기를 잘라서 손가락으로 눌렀을 때 번데기 속에서 물기가 전혀 나오지 않게 되면 $20{\sim}24^{\circ}C$, 95% 온 습도 조건의 재배상 바닥에 깨끗이 세척된 광목천을 깔고 번데기가 서로 겹치지 않도록 배치한 다음 분무기를 이용하여 깨끗한 지하수를 충분히 뿌려준다. 지하수 분무 후에는 습도유지, 과도한 외부 공기와의 접촉 방지 및 광선의 투과가 용이하도록 투명한 비닐 등으로 밀폐시키며 누에동충하초를 재배한다. 재배착수 후에는 분무기를 이용하여 3 ~ 4일 간격으로 번데기에 물을 뿌려주는데, 물 뿌리는 량은 처음에는 번데기가 흠뻑 젖도록 많이 뿌려주고, 차차 양을 줄여가며 뿌려주며, 수확 4 ~ 5일 전부터는 물 뿌리는 작업을 중지해 주어야 한다. 이렇게 하여 15일 가량이 지나면 자실체가 3 cm내외로 자라는데 이때가 수확적기로서 번데기와 자실체가 분리되지 않도록 수확하면 된다. 위와 같이 한생잠과 양원잠 등 한성반문잠품종을 사육하여 누에유충기에 암 수감별을 하여 숫누에는 숫번데 기용으로 활용하고, 암누에는 눈꽃동충하초를 생산할 경우, 숫번데기의 감별 노동력 절감과 감별 정확도 증진을 통한 품질향상, 일반 누에품종 사육시 발생하는 부산물 차원의 암누에의 신용도 창출로 인한 농가소득 증대 및 눈꽃동충하초의 생산성 증가로까지 이어지는 1석4조의 효과가 기대된다.
현재까지 곤충기생균 고유배지가 개발되어 있지 않아 식물기생균 배지를 대체 이용해 옴에 따라, 본 시험에서는 고단백질원으로써 이용가치가 있는 누에분말을 이용하여 곤충기생균 최적배지를 개발코자 하였다. 그 결과 사면배지상에서 균 배양시 12종의 배양형태는 현상, 융기, 주변형태가 균종 및 배지에 따라 배양 상이 동일 혹은 다양하게 형성되었다. 균주별 생장율은 12균주 중 C. militaris를 제외한 11 균주가 SLA배지에서 PDA에 비해 대부분의 균생장이 양호하였으나 C. militaris는 기존배지와 비교해 생장률이 78.6%로 감소하였다. Dextrose 첨가시 최적 농도는 C. gracilioides등 6균주에서 6% 처리시 가장 높은 생장률을 나타내었다. 본 시험결과 선발된 배지로부터 배양균을 누에접종 후 재배 시험한 결과 감염율, 자실체 형성을, 분생자경수 및 분생자경의 길이는 91.3$\pm$1.5%, 88.6$\pm$2.3%, 56.6$\pm$3.2개, 33.4$\pm$2.8mm로 대조에 비해 모두 높게 나타났다. 본 시험에서 개발된 Dextrose를 첨가한 SLA-A배지의 경제성 분석결과 1ι생산시 기존배지가 6,261원이 소요되는 것에 비해 총 2,386원으로 생산이 가능해 본 배지로 대체시 61.9%의 절감효과를 나타내었다.
Stromata of the white root rot fungus, Rosellinia necatrix, were produced on diseased roots although they were reported to develop rarely in nature. Forty-two (42) out of 47 samples produced synnemata while 23 developed stromata. Forty-seven (47) isolates obtained from diseased root samples were divided into 24 mycelium compatibility groups (MCGs). Sixteen (16) out of 24 MCGs produced stromata. Single ascospore isolates from 10 stroma samples produced dsRNA-containing isolates from diseased tissue beneath stromata. The frequency of synnema production on axenic culture varied among isolates with different origin. The dsRNA was not transmitted vertically to the ascospore offspring despite the infection of various dsRNA in the parental isolates. The dsRNA was absent in 35 ascospore isolates in two stroma samples that originated from the isolates, in which dsRNA was not eliminated by hyphal tip isolation. Consequently, sexual reproduction in the white root rot fungus was suggested to produce propagules as a new infection source and to have the function to eliminate infectious factors such as mycoviruses.
Paecilomyces japonica의 형태적 특정과 인공자실체 형성방법에 관하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 형태적 특징으로 포자크기는 $5.0{\sim}7.9{\times}1.5{\sim}2.4{\mu}m$이며, 모양은 ellipsoidal, obovoid를 나타냈고, 인공자실체는 황색, 크기는 $50.6{\sim}104.5mm$이었다. 균사생육은 pH7, $25^{\circ}C$ 조건의 PDA배양이 가장 양호하였다. 배양병 종류에 따른 P. japonica의 배양 및 생육일수는 유리배양병이 50일이 소요되었으나, PP배양병은 30일이었으며, 자실체 생육은 PP배양병에서 자실체 길이가 길어지고, 발이 개수도 많아 1.2g/병 증수효과가 있었다. 조명도에 따른 결과로는 $100{\sim}400\;lx$에서 자실체 생육이 우수하였으며, 특히 100 lx에서 전체수량 대비 자실체 수량이 가장 높은 32.87%로 0.1x에 비해 18.9% 높았다. 또한 빛의 강도가 높을수록 자실체의 분화율이 높았으며, 2500 lx에서는 60.5%의 자실체 분화율을 나타냈다. 광종류에 따른 자실체 생육은 적색등>형광등>백열등>청색 등순이었으며, 자실체 생육을 위한 적정 배지로는 누에 번데기와 곡물배지를 비교한 바 곡물배지 중 우수하였다. $CO_2$ 농도가 자실체 생육에 미치는 영향은 배양병마개를 닫고 생육하였을 때, 자실체 수량이 5.1g/병이 증수되었으며, 전체수량 대비 자실체 수량도 5.8% 증가되었다.Paecilomyces japonica의 형태적 특정과 인공자실체 형성방법에 관하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 형태적 특징으로 포자크기는 $5.0{\sim}7.9{\times}1.5{\sim}2.4\;{\mu}m$이며, 모양은 ellipsoidal, obovoid를 나타냈고, 인공자실체는 황색, 크기는 $50.6{\sim}104.5\;mm$이었다. 균사생육은 pH7, $25^{\circ}C$ 조건의 PDA배양이 가장 양호하였다. 배양병 종류에 따른 P. japonica의 배양 및 생육일수는 유리배양병이 50일이 소요되었으나, PP배양병은 30일이었으며, 자실체 생육은 PP배양병에서 자실체 길이가 길어지고, 발이 개수도 많아 1.2g/병 증수효과가 있었다. 조명도에 따른 결과로는 $100{\sim}400\;lx$에서 자실체 생육이 우수하였으며, 특히 100 lx에서 전체수량 대비 자실체 수량이 가장 높은 32.87%로 0 1x에 비해 18.9% 높았다. 또한 빛의 강도가 높을수록 자실체의 분화율이 높았으며, 2500 lx에서는 60.5%의 자실체 분화율을 나타냈다. 광종류에 따른 자실체 생육은 적색등>형광등>백열등>청색 등순이었으며, 자실체 생육을 위한 적정 배지로는 누에 번데기와 곡물배지를 비교한 바 곡물배지 중 우수하였다. $CO_2$ 농도가 자실체 생육에 미치는 영향은 배양병마개를 닫고 생육하였을 때, 자실체 수량이 5.1g/병이 증수되었으며, 전체수량 대비 자실체 수량도 5.8% 증가되었다.
동충하초 재배 농가는 누에가 고치를 짓게 한 후 동충하초균 감염 개체를 식별하기 위하여 그 고치를 절개하는 작업 노력이 수반되나, 고치를 짓지 않는 나용 1대 교잡종을 이용함으로써 고치를 절개하는 노력을 줄일 수 있다. 나용 교잡종을 이용할 때에는 사육온도와 균 접종조건을 기존의 방법과는 달리해야 한다는 것이 다음과 같이 확인되었다. (1) 동충하초 생산성을 높이는 나용 교잡종 사육 온도(가) 나용화율 표준 사육온도($^{\circ}C$)보다 $3^{\circ}C$ 고온사육 때 나용화율이 약 90%로. 가장 높았고, $-2^{\circ}C$ 저온사육 때 약 40%로 가장 낮았다. (나) 용화율 및 용체중 : 고온과 적온사육 간에는 큰 차이가 없었으나 저온 사육에서는 다소 낮아지는 경향이었다. (다) 누에 소잠에서 상족까지 소요일수 : 표준사육 온도에 비해 고온사육에서 3.3일 단축되고 저온사육에서 5.7일 연장되었다. (2) 나용 교잡종에 대한 동충하초균의 최적 접종 조건(가)균 접종 농도 : $1{\times}10^7spores/ml$에서 감염을 및 분생자병속 형성율이 가장 높았고, $5{\times}10^7spores/ml,\;1{\times}10^8spores/ml$ 순으로 접종농도가 높아질수록 감염률 및 분생자병속 형성율이 낮아졌다. (나) 접종시간 : 춘추 모두 12시간 고온 다습처리 메 감염을 및 분생자병속 형성률이 높았다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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