Synaptosomal plasma membrane vesicles (SPMV) were isolated from fresh bovine cerebral cortex by several well-known procedures, and the best procedures was selected by enzymatic and morphological standards. The SPMV isolated by the modified procedure of Smith and Loh showed the highest purity. The specific activities of Na, K-ATPase, acetylcholinesterase and 5'-nucleotidase were about 5, 6-fold, 2, 5-fold and 3, 3-fold, respectively, enriched in the plasma membrane fraction as compared to those of the crude homogenate. Electron microscpic examination also showed that the membranes were in vesicular form.
n-Alkanols의 분자적 약리작용기전 탐구에 기초자료를 제공하기 위하여 소의 신선한 대뇌피질로부터 분리한 synaptosomal plasma membrane vesicles (SPMV) 지질 이중층의 측방확산운동에 미치는 n-alkanols의 영향을 형광 probe법으로 검색하였다. n-Alkanols는 SPMV 지질 이중층의 측방확산운동 범위와 속도를 농도 의존적으로 증가시켰고 1-nonanol까지는 탄소수가 두개 증가될 때마다 그 효력은 약 10배 가량 증가되었으나 탄소수 10개인 1-decanol의 효력은 오히려 감소되는 경향을 나타내었다.
The effects of n-alkanols on the rotational relaxation time of 1, 6-dipheny-1, 3, 5-hexatriene (DPH) in synaptosomal plasma membrane vesicles isolate from fresh bovine cerbral contex were investigated. n-Alknols decreased the rotational relaxation time of 1, 6-diphenyl-1, 3, 5-hexatriene in the native membranes and the potencies of n-alkanols up to 1-nonanol increased by 1 order of magnitude as the carbon chain length increases by two carbon atoms, The cut-off phenomenon was reached at 1-decanol, where further increase in hydocabon length resulted in an increase in the rotational relaxation time of DPH in the native membranes.
Barbiturates의 분자적 약리학적 작용기전 연구에 기초자료를 제공키 위하여 본연구를 수행하였다. 분자적 약리작용 기전 연구에서는 무엇보다도 선행되어야 하는 것이 barbiturates가 신경세포막에서 어느 부위에 주로 분포되는가를 알아내는 데에 있다. 쥐(Rat)의 뇌로부터 분리한 synaptosomal plasma membrane vesicles (RSPMV)를 분리한 후 이 RSPMV 외측 단층(outer monolayer)의 소수성 부위와 친수성 부위에 barbiturates가 분포되는 경향을 형광 probe 법으로 검색하였다. 세포막 외측 단층의 친수성 부위에 분포되는 형광 probe N-octadecylnaphthyl-2-amino-6-sulfonic acid (ONS)와 소수성 부위에 분포되는 형광 probe12-(9-anthroyloxy)stearic acid (AS)를 각각 봉입한 후 형광소광법으로 barbiturates의 분포를 측정한 결과는 다음과 같다. 1) 대부분의 barbiturates가 RSPMV 외측 단층의 친수성 부위(표면)에 분포되고 소수성 부위 (hydrophobic region)에 극히 소량만이 분포된다는 것을 확인하였다. 2) 마취효과를 크게 일으키는 barbiturates일수록 소수성 부위에 분포되는 양이 증가하였다. barbiturates 종류에 따른 RSPMV 외측 단층 소수성 부위에의 분포 크기는 thiopental sodium > pentobarbital > hexobarbital > amobarbital > phenobarbital의 순위였다.
세포막에서 마취제의 작용점을 규명하기 위하여, 마취제의 많은 부분을 차지하는 n-Alkanol을 이용하여, 소의 synaptosomal plasma membrane vesicles(SPMV)에서 n-Alkanol의 침투 정도를 형광 probe를 이용한 형광소광법을 통하여 검색하였다. n-Alkanols는 SPMV 외부 단층(outer monolayer)의 표면에 주로 분포하되 그 탄소수에 비례하여 소수성 부위에 분포되는 양이 증가되는 경향을 나타내었다(1-decanol은 제외). Methanol, Ethanol, 1-propanol, 1-butanol, 1-pentano, 1-hexanol, 1-heptanol, 1-octanol, 1-nonanol 및 1-decanil은 SPMV 외부 단층의 표면(친수성 부위)에 분포되는 것에 비하여 각각 949, 416.8, 214.8, 90.3, 53.7, 15.20, 6.80, 2.00, 1.03 및 2.40 배가 된다는 것을 확인하였다. 1-decanol은 $C_{10}$인데도 불구하고 $C_8$인 1-octanol에 비하여 적은 양이 소수성 부위에 침투 분포한다는 것이 확인되었다.
국소마취제의 약리학적 작용기전을 탐구키 위하여 소의 신선한 대뇌피질로부터 synaptosomal plasma membrane vesicles(SPMV)를 분리한 후 그 소수성 중심부의 microviscosity에 미치는 국소마취제의 영향을 pyrene 형광 probe법으로 측정한 결과 lidocaine HCI과 procaine HCI이 microviscosity를 낮춘다는 것을 알았고 그 정도는 procaine HCI에 비하여 tidocaine.HCI이 더욱 컸다. 또 국소마취 제 가 dimyristoylphosphatidylcholine (DMPC) multilamellar liposomes의 상전 이온도를 낮추며 cooperative unit크기를 감소시킨다는 것도 시차 열량분석법으로 알게 되었다. 상전이온도와 cooperative unit 크기의 감소 정도는 dibucaine HCI>tetracaine HCI>lidocaine HCI > procaine HCI의 순이었다.
한국산 2년생 소의 대뇌피질로부터 synaptosomal plasma membrane vesicles(SPMV)를 분리한 후 이 SPMV로부터 추출한 총지질로서 인공세포막(SPMVTL)을 제제하였다. SPMVTL의 outer monolayer에 trinitrophenyl group을 공유결합시킴으로써 SPMVTL이중층에 분포된 형광 probe 1,6-diphenyl-1,3,5-hexatriene(DPH)중 outer monolayer에 분포된 DPH형광만을 소광케 하였다. 형광분석기를 통하여 SPMVTL의 inner monolayer에 비하여 outer monolayer의 유동성이 크다는 것을 확인하였다. n-Alkanols는 SPMVTL지질 이중층(inner+outer monolayers)의 회전확산운동을 증가시키되 탄소수 두개가 증가될 때마다 그 효력이 약10배 가량 증가된다는 것을 알았다. 그러나 1-decanol의 경우에는 1-nonanol에 비하여 그 효력이 낮아지는 소위 cut-off현상이 나타났다. 뿐만 아니라 n-alkanols는 SPMVTL의 inner monolayer에 비하여 outer monolayer의 회전확산운동을 주로 증가시켰다. 하지만 n-alkanols의 탄소수가 증가됨에 따라 outer monolayer에 대한 선택적인 작용이 감소된다는 것도 확인되었다.
한국산 2년생 소의 신선한 대뇌피질로 부터 synaptosomal plasma membrane vesicles (SPMV)를 분리한 후 이 SPMV로 부터 추출한 총지질 (SPMVTL) 및 총인지질 (SPMVPL)로서 인공세포막을 제제하였다. SPMVTL 및 SPMVPL의 outer monolayer에 trinitrophenyl groups로 공유결합시킴으로써 형광 probe 1,6-diphenyl-1,3,5-hexatriene (DPH)의 outer monolayer 형광을 선택적으로 소광케한 후 SPMVTL 및 SPMVPL의 inner와 outer monolayer 사이의 비대칭적 유동성 존재 유무를 확인하였던 바 inner monolayer에 비하여 outer monolayer가 유동성이 크다는 것을 확인하였으며 SPMVTL에 비하여 SPMVPL의 유동성이 높았다. 뿐만 아니라 barbiturates는 SPMVTL의 유동성에 대하여는 유의성이 있을 만큼의 증감 효과를 나타내지 않았고 SPMVPL의 유동성은 감소시키되 주로 outer monolayer의 유동성을 감소시킨다는 것을 확인하였으며 barbiturates 종류에 따른 SPMVPL의 총유동성 감소의 크기는 pentobarbital > hexobarbital > amobarbital > phenobarbital의 순이었다.
Lee, Sae A;Park, Yong Jin;Jang, Il Ho;Kang, Jung Sook
대한의생명과학회지
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제23권1호
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pp.17-24
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2017
Estrogens are effective neuroprotectants in vivo and in vitro. To obtain a better insight into the molecular mechanisms of action of neuroprotection by $17{\beta}-estradiol$ (E2), we examined the differential effects of E2 on the fluidity of synaptosomal plasma membrane vesicles (SPMV) isolated from rat cerebral cortex. Intramolecular excimerization of 1,3-di(1-pyrenyl)-propane (Py-3-Py) was used to investigate the effects of E2 on the bulk and annular lateral diffusion of the SPMV. In addition, we examined the effects of E2 on the rotational diffusion of individual leaflet of SPMV exploiting selective quenching of outer monolayer 1,6-diphenyl-1,3,5-hexatriene (DPH) fluorescence by trinitrophenyl groups. The $F{\ddot{o}}rster$ distance $R_0$ value for the tryptophan-Py-3-Py donor-acceptor pair was $26.9{\AA}$. E2 increased the lateral mobility of both bulk and annular lipids in SPMV in a dose-dependent manner, but a larger effect on bulk lipids was observed. Although E2 decreased the anisotropy of DPH in SPMV, E2 had a greater fluidizing effect on the outer leaflet compared to the inner leaflet. These results suggest that E2 selectively fluidizes the more fluid regions within SPMV. It is highly probable that E2 mostly fluidizes the bulk lipids, away from either annular lipids or lipid rafts, in the outer leaflet of SPMV. This selective fluidization may be one of the nongenomic mechanisms of neuroprotection by E2.
Kim, Hyun-Gang;Choi, Chang-Hwa;Kim, Inn-Se;Chung, In-Kyo;Cho, Goon-Jae;Jang, Hye-Ock;Yun, Il
The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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제4권5호
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pp.409-415
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2000
Fluorescence polarization of 1,6-diphenyl-1,3,5-hexatriene (DPH) was used to evaluate the effects of dopamine HCl on the range of the rotatioanl mobility of bulk bilayer structure of the synaptosomal plasma membrane vesicles (SPMV) isolated from whole bovine brain. In a dose-dependent manner, dopamine decreased the anisotropy $({\gamma}),$ limiting anisotropy $({\gamma}{infty})$ and order parameter (S) of DPH in the membranes. These indicate that dopamine increased the rotational mobility of the probe in the neuronal membranes. Cationic 1-[4-(trimethylammonio)-phenyl]-6-phenylhexa-1,3,5-hexatriene (TMA-DPH) and anionic 3-[p-(6-phenyl)-1,3,5-hexatrienyl]-phenylpropionic acid (PRO-DPH) were utilized to examine the range of transbilayer asymmetric rotational mobility of the neuronal membranes. Dopamine had a greater increasing effect on the mobility of the inner monolayer as compared to the outer monolayer of the neuronal membranes. It has been proven that dopamine exhibits a selective rather than nonselective fluidizing effect within the transbilayer domains of the SPMV.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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