Fermentative hydrogen production by Citrobacter sp. Y 19 was investigated in batch culture. Optimal hydrogen production activity was observed at pH 6 - 7 and temperature of $36^{\circ}C$, and hydrogen yield and maximal hydrogen production rate were 1.12 mmol/mmol glucose and 32.3 mmol/g cell${\cdot}$h, respectively. With glucose as a substrate, the bacterium produced ethanol, acetate, and carbon dioxide as major glucose fermentation by-products. Y19 could utilize various sugars such as galactose, fructose, lactose, sucrose, and starch for cell growth and hydrogen production.
The aim of this study is to elucidate characteristics of ${\beta}-lactamase$ inhibitor produced by Streptomyces sp. SMF-19 isolated from soil was found to produce proteinaceous extracellular ${\beta}-lactamase$ inhibitor. The ${\beta}-lactamase$ inhibitor was purified through ammonium sulfate fractionation, gel filtration, anion exchange chromatography and fast performace liquid chromatography. The molecular weight of the ${\beta}-lactamase$ inhibitor was estimated to be about 48,000 by SDS-PAGE. The mode of inhibition against penicillin G as a substrate was uncompetitive. The ${\beta}-lactamase$ inhibitor was stable in wide pH range but unstable at high temperature above $50^{\circ}C$.
For the production of digoxin by using biotransformation in suspension-cultured Digita- lis lanata cells, a two-stage culture process was optimized. Modified Murashige and Skoog medium was used for growth in the first stage and the cells were transferred to glucose solution for the production of digoxin from digitoxin via biotransformation in the second stage. When the cells were cultivated for 10 days in the growth period, 12$\beta$-hydroxylation capacity was the best. It was found that the optimum amount of digitoxin as substrate was 400 mg/l with initial cell density of 21%. Maximum productivity was achieved 5 days after transfer of cells to production medium. Sucrose and fructose provided similar digoxin yield as that in glucose, and 6% was proved to be the best glucose solution. Most of the components of modified MS medium except phosphate reduced the efficiency of digoxin formation. Besides, peptone and beef extracts inhibited 12$\beta$-hydroxylation, while promoting glucosylation. Finally, it was apparent that light enhanced the formation of digoxin significantly.
Three isoflavonoids having tyrosinase-inhibiting activity were isolated from the culture filtrate of Streptomyces sp. 20747. Their structures were determined by UV, EI-MS, 1H-NMR, 13C-NMR to be daidzein, daidzein 7-rhamnoside, and genistein 7-rhamnoside, which were competitive with substrate and had IC50 value of 14, 19, and 16 ng/ml, respectively to mushroom tyrosinase and did not inhibit melanin production of Streptomyces bikiniensis. Soybean meal as well as peptone were found to be a good nitrogen source for tyrosinase-inhibiting isoflavonoids production, susgesting that soybean meal is not the origin of tyrosinase inhibiting isoflavonoids formation in Streptomyces sp. 20747 strain.
A strain SMF14 producing an extracellular $\beta$-lactamase was isolated from soil and identified to be a strain of Streptomyces aureofaciens. $\beta$-Lactamase was purified from the cell free culture broth through batchwise hydroxyapatite adsorption, anion exchange chromatography on DEAE Sephadex A-50, gel filtration on Sephadex G-75, and adsorption chromatography on hydroxyapatite. The molecular mass was estimated to be about 43 kDa by SDS-PAGE. The $\beta$-lactamase had substrate specificity to penicillins and it was inhibited by clavulanic acid, being classified to the group 2a of penicillinase.. The optimal reaction pH and temperature were pH 6.0~7.5 and $50^{\circ}C$. The $K_m, and V_{max}$ values of $\beta$-lactamase for penicillin G were calculated to be 1.72 mM and 5.4$\times$$10^5 \mu M \cdot min^{-1}$, respectively.
Xinlei studies on the production of pullulan by Aureobasidium pullulans using batch culture in a 15L bioreactor were carried out. The mathematical models were obtained in this study, which provided a reasonable description for the biomass, the product, and the substrate variation with time. The values frets the mathematical models were satisfactorily coincided with the experimental data for the biomass of A. pullulans, the production of pullulan and the utilization of sucrose as the sole carbon source.
Bioemulsifiers are those chemicals which are produced from microorganisms but which have both hydrophilic and hydrophobic groups. $\alpha$-Glucosidase inhibitor ($\alpha$-GI) produced from Bacillus lentimorbus B-6 (B-6) showed bioemulsifying activity. But $\beta$-glucosidase inhibitor produced from B-6 didn't show emulsifying activity. $\alpha$-GI was purified from supernatant of B-6 grown in minimal culture medium containing glucose and sodium glutamate by Sephadex G-100 column chromatography and isolated from $\beta$-GI by dialysis against water. Toluene was determined as the best substrate for emulsifying activity of $\alpha$-GI. $\alpha$-GI showed thermostability at $100^{\circ}C$ for 15 min, high salt tolerance up to 32% NaCl and wide range of pH-stability at pH $4\sim10$. Emulsifying character of $\alpha$-GI can be useful for the liposome formation for the treatment of diabetes mellitus.
Washed mycelia of Aspergillus nidulans FGSC159 were incubated in CMC minimal liquid medium and the culture filtrate which contained induced extracellular cellulase was fractionated by a three-step procedure including chromatography on Bio-Gel P-150, chromatography on DEAE-Sephadex A-50 and chromatography on Sephadex G-100. Three CMCase components ; F-I-Ia, F-I-Ib and F-II-Ia were prepared. No enzyme activity toward avicel could be detected in these components. Similarly, there was no ${\beta}-glucosidase$ activity. pH-optima of the three components were all 5.0 in acetate buffer. Temperature-optima for the activities of F-I-Ia, F-Ib and F-II-Ia were $45^{\circ}C,\;40^{\circ}C\;and\;50^{\circ}C$, respectively. F-II-Ia was shown to be more thermostable than the other two components. F-II-Ia was proved to have quite a different substrate specificity and action property and action property from those of F-I-Ia and F-I-Ib by product analysis on liquid chromatography.
pH decreased as the substrate mycelium developed, $\Delta$pH was 1.05-1.15, but increased after the aerial mycelium formation. The lactic acid content in culture solution showed no difference between 0.2% and 5% glucose, at which the aerial mycelium formation was repressed. The growth and development of mycelium was delayed by the lactate treatment. The activity of catalase was maximum in 24 hours after inoculation, and the wuperoxide dismutase activity showed a constant level during the developmental phases. The ascorbic acid accumulated after the aerial mycelium formation. The ascorbate oxidase isozyme of Rf 0.44 appeared, while the isozyme of Rf 0.36 desappeared during the development.
Ephedra olistachya cultures have been known to accumulate $rho-coumaroylamino$ acids by elicitor treatment. Based on their chemical structures, the biosynthetic pathway of$rho-coumaroylamino$acids was postulated and phenylalanine ammonia-lyase (PAL), cinnamic acid 4-hydroxylase (4-CH) and p-coumaroyl CoA: D-Ala p-coumaroyltransferase ($rho-CT$) were supposed to be involved in the pathway. The time course inductions of these enzymes were investigated after treatment of yeast extract, yeast-derived mannan glycopeptide and D-Ala. They were detectable at only 4 hours and reached to their maximum level at 9 hours after onset of elicitor treatment. The activities of PAL and 4-CH were almost disappeared within 24 hours, however, that of $rho-CT$was remained up to 48 hours irrespective of the kind of elicitors. $rho-CT$ showed substrate specificity to D-Ala at crude enzyme extract level.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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