The preparation of Streptococcus faecalis RSI is used as a medicinal preparation for human intestinal disorders. But the microbe in this preparation is very sensitive to rifampicin. If this preparation is taken with rifampicin, its therapeutic effect can not be expected. To develope rifampicin resistant mutants, the rifampicin sensitive strain S. faecalis RSI was treated with Nmethyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine(MNNG). Twelve strains of the MNNG-induced mutants showed distinct resistance to rifampicin and five mutants were selected for further studies. They also exhibited identical characteristics with the parent S. faecalis RSI when they were tested for lactic acid formation and growth inhibition of E. coli. From in vitro test, it was identified that rifampicin is not inactivated by certain factors of the rifampicin resistant mutants. Conclusively, the rifampicin resistant mutants are efficient strains that have insensitivity against rifampicin and original biochemical characteristics of the parent strain.
Streptococcus faecalis var. liquefaciens를 calcium alginate gel에 고정화 후 CPP생산 가능성을 실험하였다. 균체를 회수하여 담체에 고정화하는 방법보다는 배양액 전체를 고정화하는 방법이 보다 높은 생산성으로 CPP를 생산하였다. Streptococcus faecalis var. liquefaciens 전세포 고정화 방법에 의한 sodium casenate로부터의 CPP 생산의 최적조건은 bioreactor부피대비 bead사용량이 30%, 반응온도는 $50^{\circ}C$, 반응 pH는 7.0, 기질의 농도는 10% 이었다. 또한, 고정화 균체를 이용한 연속적인 생산은 회분식 반응에서 설정된 최적 조건하에서 20% 수준의 CPP를 최소한 1개월 이상 연속적으로 생산할 수 있었다.
본 연구는 유산균발효유 제조에 많이 사용되는 Lactobacillus casei YIT 9018에 광범위 숙주영역을 갖고 있는 Streptococcus faecalis DS5 의 plasmid pAM $\beta_1$ DNA를 이용하여 전이, 도입하고자 유당발효능결손변이주를 이용하여 원형질체융합, 접합, 형질전환을 검토하였던 바 얻어진 결과는 다음과 같다. L.casei와 S.faecalis 균주의 conjugation 은 membrane filter mating(Milipore, 0.45$\mu \textrm m$, front side)의 경우 $6.9\times 10^7$으로 가장 높은 전이율을 나타냈으며 protoplast fusion이나 transformation에 의해서는 fusant나 transformant를 선별할 수 없었다.
Streptococcus faecalis var. liquefaciens에서 plasmid DNA를 분석한 결과, 4개의 plasmid를 가지고 있었으며, 각각의 대략적인 분자량은 6.8M-dal, 5.2Mdal, 2.6Mdal, 2.1Mdal로 측정되었다. 이 균주를 novobiocin으로 처리하여, 각각 다른 2개의 plasmid가 소실된 2개의 변이주를 얻었다. 이들 균주는 당발효성, 온도감수성, gelatin 용해성, 단백질응고성은 wild type과 동일하였으나 이중 한 균주가 lincomycin과 erythromycin에 대한 감수성을 나타내었다. 따라서 본 실험에서 검출한 4개의 plasmid는 당발효성 등의 특성과는 관련이 없는 것으로 추정할 수 있으며, pSK₂와 pSK₄의 두 plasmid 중 하나는 항생물질 저항성에 관련된 것으로 보인다.
This study was examined the microbiological adequacy of fish feed treated with high-dose irradiation (5 kGy). 125 flounder (Paralichthys olivaceus) were grouped into 5 and then the fishes were fed the following feeds for 28 days: (1)standard feed; (2)standard feed, inoculated with Edwardsiella tarda ($1{\times}10^8-1{\times}10^9CFU/g$ of feed); (3)standard feed, inoculated with Vibrio anguilarum ($1{\times}10^8-1{\times}10^9CFIT/g$ of feed); (4)standard feed, inoculated with Streptococcus faecalis ($1{\times}10^8-1{\times}10^9CFU/g$ of feed); (5)standard feed, inoculated with Edwardsiella tarda, Vibrio anguillarum and Streptococcus faecalis, and then irradiated the mixed feed to 5 kGy. The flounders feed the mixed diet with Edwardsiella tarda, Wbrio anguillarum or Streptococcus faecalis inoculated feed were showed severe cumulative mortalities of 60, 48 and 52% respectively. The gross and histological changes were observed on the fishes. However, fishs fed with the feed of bacteria inoculation before irradiation demonstrated excellent protection against the bacteria-related disease. The results from experiments with bacteria inoculated feed indicated that the irradiation methods employed were capable of preventing contamination of the fishs with pathogenic bacteria.
This experiment was designed to evaluate effects of freezing and frozen storage on survival of sanitary indicative bacteria in seafoods. Culture of bacteria such as Escherichia coli type I, Citrobacter freundii type I, Klebsiella aerogenes type I and Streptococcus faecalis was inoculated into homogenates of pollack, shrimp, and sardine frozen in a contact plate freezer at $-40^{\circ}C$ and chest freezer at $-20^{\circ}C$, stored at $-20^{\circ}C$, and then survival of the inoculated bacteria was determined over a period of 95 days. Coliform group was highly sensitive to freezing and frozen storage showing survival of about $2\%$ after 95 days of frozen storage at $-20^{\circ}C$, whereas Streptococcus faecalis was relatively resistant with $20\%$ survival rate. The sanitary indicative bacteria count was rapidly decreased in the early stage of frozen storage revealing 90 to $95\%$ loss of coliform group and 40 to $70\%$ loss in case of Streptococcus faecalis after 10 days storage. In determining recovery rate, most probable number (MPN) method gave more reproducible recovery of the tested strain than did the selected agar plate method.
The gamma-radiation sensitivity of three kinds of pathogenic bacteria to fish was investigated. $D_{10}$ values (irradiation dose required to inactivate 90% of the population) of Edwardsiella tarda, Vibrio anguillarum and Streptococcus faecalis were 0.08, 0.10 and 0.44 kGy, respectively. The inactivation factors were 4.50 - 24.30 and 6.75 - 36.45 at radiation doses of 2 and 3 kGy. Raw moist pellets were inoculated with Edwardsiella tarda, Vibrio anguillarum or Streptococcus faecalis. Inoculated feed samples were packaged in air and irradiated at 5 kGy. This dose was effective in controlling the inoculated and general bacteria in fish feed. We consider gamma-radiation to be an effective method to sterilize pathogenic bacteria in fish feed.
The streptococcal plasmid pAM$\beta_{1}$ (erythromycin resistance)was transferred via conjugation from Streptococcus faecalis DS 5 to Lactobacillus casei YIT 9018 by a filter mating method. The transfer frequency depended greatly on the type, pore size and side(front or back) of membrane filter. Water passing through a membrane under reduced pressure induced very tight contact between the cells, increased the transconjugation frequency about 1.3 to 37-fold when Millipore membrane filter (0.45.$\mu$m, front side up) was used.
본 연구는 유산간균 및 유산구균으로부터 plasmid DNA를 신속하고 간편하게 분리하기 위한 방법에 관한 것이다. 세포벽 형성 억제 인자인 glycine을 0.5% 첨가한 TCM 배지에서 유산균을 배양하였고 plasmid DNA는 mutanolysin을 처리한 cells로부터 alkaline-detergent lysis 법으로 분리되었다. 유산간균은 효소 처리 때 mutanolysin의 농도를 30$\mu\textrm{g}$/$m\ell$로 하고 37$^{\circ}C$에서 5-10분간 반응되었을 때 plasmid DNA가 아주 잘 추출되었다. 유산구균의 경우는 그 최적 조건이 조금 달랐다. 본 방법은 L. casei, L. acidophilus, L. helveticus, S. lactis, S. faecalis, S. faecium과 S. cremoris 균주로부터 plasmid DNA를 신속하게 분리하는데 사용할 수 있었다. 본 방법을 이용하여 배양액 $1.5m\ell$로부터 분리된 plasmidsDNA가 gel상에서 쉽게 확인될 수 있었다.
김치 발효 경과에 따라 젖산균을 분리하여 E. coli와 Streptococcus faecalis, Lactobacillus bulgaricus에 대해 생육 저해능력이 있는 균주를 screening하였다. 젖산균중 생육 저해균의 비율을 조사한 결과 이들은 2주의 발효기간 중 중기에 가장 많이 나타났으며 대부분 Pediococcus cerevisiae로 동정하였다. 이 P. cerevisiae의 생육억제 작용은 열에 불안정하고 단백분해 효소의 작용을 받지 않는 물질에 의한 것이며 이 물질은 배지의 pH를 중성으로 유지했을 때는 산성인 경우보다 생성이 저하되는 것으로 나타났다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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