• 생명과학회지
• /
• 제27권10호
• /
• pp.1097-1103
• /
• 2017

뱀장어(Anguilla japonica)의 인공종묘생산은 연어뇌하수체추출물(SPE, salmon pituitary extract)을 암컷 뱀장어에게 지속적인 투여를 하고 인위적으로 성성숙을 유도로 얻은 난과 정자를 인공수정을 하고 부화 시켜 생산한다. 하지만 SPE를 반복적으로 복강에 주사하는 방법은 암컷 뱀장어에게 많은 스트레스를 주며, 결국 스트레스로 인하여 완전한 성성숙을 하지 못하고 폐사에 이르게 되거나 배란한 난의 질이 좋지 않아 부화율과 자어의 생존율이 떨어지는 문제점을 갖고 있다. 본 연구에서는 뱀장어의 성성숙 유도에 유효하다고 알려진 호르몬이 주입된 osmotic pump를 복강에 삽입 후 암컷 뱀장어의 성성숙 유도를 하였다. 본 연구결과 SPE를 투여한 실험어의 GSI가 hCG, GnRHa, MT를 각각 또는 함께 투여한 실험구 보다 유의하게 증가하였으며 조직학적 분석결과에서도 난소의 난모세포가 핵이동기 단계로 발달되었음을 관찰할 수 있었다. 본 결과를 통해 osmotic pump를 이용한 암컷 뱀장어 인위적 성성숙 유도 방법으로 이용 가능할 것으로 생각된다.

• 한국어류학회지
• /
• 제25권2호
• /
• pp.65-73
• /
• 2013

우리나라 고유종이며 멸종위기어류인 부안종개 Iksookimia pumila의 발생생물학적 특성을 밝히고 복원의 기초자료를 확보하기 위하여 난발생 및 초기생활사 연구를 수행하였다. 성숙한 친어는 2010년 7월 7일 전라북도 부안군 상서면에서 족대를 이용하여 채집하였으며, 이후 친어의 복강에 Ovaprim (0.5 mL/kg)을 주사하여 12시간 경과 후 복부압박법으로 채란하여 건식법으로 인공수정시켰다. 산란된 난은 1,107 (352~1,440)개로 약간의 점착성을 띤 엷은 노란색의 분리침성난이었으며, 난경은 $1.3{\pm}0.04$ mm였다. 수온 $23^{\circ}C$에서 수정 후 52 (47~55) 시간에 부화하였으며, 크기는 전장 $4.7{\pm}0.14$ mm였다. 부화 후 5일에는 전장 $7.1{\pm}0.25$ mm로 난황을 모두 흡수하여 후기자어로 넘어갔으며, 부화 후 17일에는 전장 $12.2{\pm}1.10$ mm로 지느러미 기조가 모두 정수로 되어 치어기로 이행하였다. 부화 후 100일에는 전장 $31.0{\pm}3.98$ mm로 성장하고 외부형태 및 체측반문이 성어와 비교적 유사하였다.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
• /
• 제27권2호
• /
• pp.165-172
• /
• 2000

Objective: In vitro fertilization (IVF) and a prolonging the time of culture may be helpful in establishing a viable pregnancy through a selection effect. Some embryos do not develop beyond the 4-cell stage and some may not develop to the blastocyst stage. We have evaluated the safety of SET and the outcomes of pregnancy. Methods: Sperms were treated with Ham's F-10 supplemented with 10% human follicular fluid (hFF). oocytes or fertilized oocytes were cultured in Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) with 10% or 20% hFF respectively. Up to five oocytes were inseminated with approximately 200,000 sperm cells/2 ml in each well. Fertilization was examined in the following morning and fertilized oocytes were co-cultured until embryo transfer. Vero cells for co-culture were prepared in Tissue Culture Medium - 199 (TCM-199) with 10% fetal bovine serum. At the two to four cell and blastocyst on day 2 and day 5, embryo and blstocyst grading were evaluated. Pregnancy rate was determined after transfer of human embryos at the two to four cell stage on day 2 (Group I) or subsequent transfer of embryos on day 2 and at the blastocyst stage on day 5 (Group II). For statistical analysis, Student's t-test and Chi-square (${\chi}^2$_test) were used. Results were considered statistically significant when p value was less than 0.05. Results: No differences was found in the fertilization between Group I (81.0%, 98/121) and Group II (81.8%, 180/220). In case of cleavage rate, no difference was found in Group I (95.9%, 94/98) and Group II (97.8%, 174/178). However, the rate of-clinical pregnancy was significantly higher (p=0.014) in Group II (66.7%, 12/18) than in Group I (26.3%, 5/19). Conclusion: The results of this study showed that SET is safe and effective, and significantly increases the pregnancy rate.

• 한국어류학회지
• /
• 제26권2호
• /
• pp.89-98
• /
• 2014

좀수수치 Kichulchoia brevifasciata의 산란기 특징 및 초기생활사 연구는 생물학적 특성 및 복원학적 기초자료를 확보하기 위하여 실시하였다. 산란기인 2011년 6월부터 7월까지 전라북도 고훙군 금산면에서 족대를 이용하여 채집한 후 산란기 특징을 분석하였고, 초기생활사는 성숙한 개체에 Ovaprim을 0.5 mL/kg 주사하여 성숙란을 얻은 후 건식법으로 인공수정 시켜 진행하였다. 성숙한 암컷은 전장은 46~76mm이고 GSI는 $9.6{\pm}3.77%$였고, 수컷은 전장 42~52mm이고 GSI는 $3.5{\pm}1.04%$였다. 성비는 0.1로 수컷이 매우 적었으며, 특별한 이차성징은 관찰되지 않았다. 포란수는 $69{\pm}35.3$개였으며, 산란된 성숙란은 담황색의 분리침성란으로 난경 $1.46{\pm}0.07mm$였다. 수정난은 수온 $25^{\circ}C$에서 66시간 후에 부화하였으며, 부화 직후 전기자어의 크기는 전장 $5.5{\pm}0.07mm$였다. 부화 후 6일째에는 전장 $9.0{\pm}0.29mm$로 난황을 모두 흡수하여 후기자어로 이행하였으며, 부화 후 17일째에는 전장 $12.6{\pm}0.24mm$로 모든 지느러미 기조가 정수가 되어 치어기로 이행하였다. 부화 후 80일째에는 전장 $33.0{\pm}2.19mm$로 체형과 체측반문이 비교적 성어와 유사하였다.

• 한국양식학회지
• /
• 제7권3호
• /
• pp.151-158
• /
• 1994

자성발생성 2배체 유도 기법과 물리학적 처리 방법에 의해 유도된 자성발생성 2배체 숫컷 넙치의 생식 능력 평가를 위해 2년생 어류를 이용하여 정소의 조직학적 분석, 정자에 대한 세포학적 분석 그리고 양식장에서 산란에 이용되고 있는 일반 넙치 암컷의 난과 수정시켜 얻은 수정 및 발생 능력에 대한 결과는 다음과 같다. 1. 정소의 조직학적 분석 결과 자성발생성 2배체 숫컷은 대조군과 마찬가지로 조직학적 차이가 없고, 정소내에서 정자 변태과정을 수행하는 것으로 나타났다. 2. 자성발생성 2배체 숫컷 넙치의 체중 1 kg 당 정액의 양은 20.6 ml 로써 대조군의 8.3 ml 에 비해 두 배 이상 많게 나타났다(P<0.01). 3. 정액 1 ml 당 정자의 수는 대조군에서 $2.58\times10^9$ 그리고 자성발생성 2배체 숫컷 넙치의 경우 $2.42\times10^9$ 으로 나타나 1 ml 당 정세포의 수는 두 군간 통계적으로 유의한 차가 나타나지 않았다. (P>0.05). 4. 정자의 크기를 조사한 결과 두부의 장경, 단경 및 정자의 길이에서 모두 차이가 없는 것으로 나타났다(P>0.05). 또한 두 군 정자의 형태를 분석한 결과. 외형상 차이를 발견할 수 없었다. 5. 자성발생성 2배체 숫컷 넙치의 수정 및 발생능력 평가를 위해 대조군의 난을 얻어 수정시킨 결과 난질에 따라 다소 차이를 보였으나, 수정율 및 부화율 모두 $80\%$ 이상으로 나타나 성 유전자에 따른 발생 능력의 차이는 없는 것으로 나타났다.

• 한국양식학회지
• /
• 제7권3호
• /
• pp.159-164
• /
• 1994

넙치 암컷과 유도된 자성발생성 2배체 숫컷 넙치를 교배시켜 넙치의 전 암컷 2배체를 생산한 후, 전 암컷 수정난에 저온처리하여 전 암컷 3배체 넙치를 생산하였다. 그 결과 부상율 및 수정율에 있어서 2배체 대조군, 전 암컷 2배체, 3배체 대조군 그리고 전 암컷 ,3배체군 모두에서 차이가 없었다 (P>0.05). 그러나, 3배체 대조군 및 전 암컷 3배체군은 여타 실험군에 비해 부화율이 낮게 나타났다 (P<0.05). 생식소의 조직학적 분석 결과 전 암컷 2배체 처리군 및 전 암컷 3배체 처리군의 성비는 모두 $100\%$ 암컷이었다. 배수체 검정을 위해 세포크기 및 염색체를 분석한 결과, 세포 및 핵의크기는 3배체가 대조군에 비해 각각 1.95 및 1.96 배 증가되었고, 염색체 수 및 핵형은 2n=48 및 3n=72 acrocentric chromosome이었다. 생식소의 조직학적 분석 결과, 4개월 된 3배체 암컷의 생식소는 전형적인 생식소 수준의 불임을 보여 주었다.

• 한국수정란이식학회지
• /
• 제28권4호
• /
• pp.373-379
• /
• 2013

Spermatogonial stem cells (SSCs) developed into sperms through spermatogenesis have been utilized as a useful tool in the field of regenerative medicine and infertility. However, a small number of highly qualified SSCs are resided in the seminiferous tubule of testis, resulted in developing effective in-vitro culture system of SSCs for solving simultaneously quantitative and qualitative problems. Presently, SSCs can be enriched on testicular stromal cells (TSCs), but there are no systematic researches about TSC culture. Therefore, we tried to optimize culture condition of TSCs derived from mouse with different strains. For these, proliferation and viability were measured and compared by culturing ICR outbred or DBA/2 inbred mouse-derived TSCs at 35 or $37^{\circ}C$. In case of ICR strain, primary TSCs cultured at $37^{\circ}C$ showed significantly higher proliferation and viability than those at $35^{\circ}C$ and significant increase of proliferation and viability in sub-passaged TSCs was detected in the $35^{\circ}C$ culture condition. Moreover, sub-passage of primary TSCs at $35^{\circ}C$ induced no significant effects on proliferation and viability. In contrast, in case of DBA/2 strain, significantly improved proliferation were detected in the primary TSCs cultured at $35^{\circ}C$, which showed no significant difference in the viability, compared to those at $37^{\circ}C$. Furthermore, sub-passaged TSCs cultured at $37^{\circ}C$ showed no significant differences in proliferation and viability, compared to those at $35^{\circ}C$. However, with significant decrease of proliferation induced by sub-passage of primary TSCs at $35^{\circ}C$, no significant effects on proliferation and viability were resulted from sub-passage of primary TSCs at $37^{\circ}C$. From these results, culture temperature of primary TSCs derived from outbred and inbred strain of mouse could be separately optimized in primary culture and subculture.

• Reproductive and Developmental Biology
• /
• 제37권4호
• /
• pp.263-267
• /
• 2013

Pig producers have been shown keen interest of the number of spermatozoa in a semen dose since pig artificial insemination introduce. However, determining the minimal number of spermatozoa need per AI without detrimental effect on overall reproductive performances is not an easy question to answer. To increase the efficiency of semen utilization in pig AI, optimum number of spermatozoa per dose needed to determine. The objective of this study was to determine the reproductive performance and factors that affect on-farm application of low-dose semen insemination in sows. Data were collected from Darby Genetics AI studs from 4th of June to 7th of July, 2012 (n=401). The numbers of parturition were 84, 234 and 83 in sows inseminated with doses of $1.5{\times}10^9$, $2.0{\times}10^9$ and $2.5{\times}10^9$ spermatozoa in 100ml extender, respectively. There were no significant differences on reproductive performances such as gestation period, total born, total born alive, stillbirth and mummy in sows inseminated with different semen doses. The average number of born alive was 10.5, 11.0 and 10.4 from sows inseminated with $1.5{\times}10^9$, $2.0{\times}10^9$ and $2.5{\times}10^9$ sperms, respectively. Also, number of spermatozoa per dose did not affect litter size (p>0.10). There were no significant differences of maternal genetic line difference on gestation period, total number born, number born alive, born dead and mummy. The estimated correlation coefficients of the different semen doses with total number born, number born alive, born dead and mummy were r=-0.00, -0.01, 0.02 and 0.02, respectively. Taken together, the result of this study suggested that when semen was appropriately inseminated after induced ovulation, insemination with low-dose ($1.5{\sim}2.0{\times}10^9$) semen dose not adversely affect sow's fertility.

• Journal of Animal Science and Technology
• /
• 제54권4호
• /
• pp.283-290
• /
• 2012

제주흑우의 동결 정액 제조시 동결 보존액에 첨가한 taurine과 hypotaurine은 동결 융해 후 정자의 운동성, 생존성 그리고 정자막 온전성을 개선시키는 것을 알 수 있었다. Taurine과 hypotaurine의 첨가는 유의적으로 높은 운동성, 생존성을 보였으며(p<0.05), 특히 hypotaurine은 다른 실험구에 비하여 유의적으로 높은 정자막 온전성을 나타냈다(p<0.05). 뿐만 아니라, hypotaurine은 유의적으로 높은 F pattern 비율을 유지하였으며(p<0.05), 이들 항산화물질을 첨가한 실험구에서는 대조구에 비하여 유의적으로 낮은 AR pattern을 나타내어(p<0.05) 동결로 기인된 수정능획득 유사 상태 정자의 비율을 유의적으로 감소시켜 조기 첨체반응 비율을 감소시켰다. 정자의 난자내 침투능력에 있어서 모든 처리구에서 대조구보다 높은 웅성전핵 형성율과 SFI를 나타냈으며, hypotaurine의 처리는 가장 높은 침투능력을 나타냈으나 처리구간의 유의적 차이는 나타나지 않았다. 본 연구결과는 멸실위험의 토종가축 생식세포 및 유전자원 보존과 토종가축 육성을 위한 번식 증대를 위한 제주흑우 동결정액 제조에 중요한 이용 방법이 될 것이며, 동결 융해 후 정자의 기능 개선을 위한 다양한 희석제 및 첨가제를 활용한 연구가 필요할 것으로 사료된다.

• 한국패류학회지
• /
• 제26권3호
• /
• pp.235-244
• /
• 2010

Ultrastructural characteristics of the testis and spermatogenesis of Crassostrea gigas were investigated by Transmission and Scanning Electron microscope observations. The testis is a diffuse organ consisting of branching acini containing differentiating germ cells in a variety of stages. The acinus is surrounded by an intermitent layer of myoepithelial cells andis divided into subcompartments that are partially separated by pleomorphic accessory cells which remain in close contact with germ cells until late stages of development. these accessory cells contain a large quantity of glycogen particles and lipid droplets in the cytoplasm. Therefore, it is assumed that they are involved in the supplying of the nutrients for germ cell development, while any phenomena associated with phagocytosis of undischarged, residual sperms by lysosomes could be find in the cytoplasm of the accessory cells. The morphology of the spermatozoon has a primitive type and is similar to those of other bivalves. Mature spermatozoa consist of broad, cap-shaped acrosomal vesicle, subacrosomal material (containing axial rod embedded in a granular matrix), a oval nucleus showing deeply invaginated anteriorly, two triplet substructure centrioles surrounded by four spherical mitochondria, and satelite fibres appear to the distal centriole and plasma membrane. Spermatozoa of C. gigas resemble to those of other investigated ostreids. In particular, the anterior region of the acrosomal vesicle is transversely banded. It is assumed that differences in this acrosomal substructure are associated with the inability of fertilization between the genus Crassostrea and other genus species in Ostreidae. Therefore, we can use sperm morphology in the resolution of taxonomic relationships within the Ostreidea. The spermatozoon is approximately $42-47{\mu}m$ in length including an oval sperm nucleus (about $0.91{\mu}m$ in length), an acrosome (about $0.42{\mu}m$ in length) and tail flagellum ($40-45{\mu}m$). The axoneme of the sperm tail flagellum consists of nine pairs of microtubules at the periphery and a pair at the center. The axoneme of the sperm tail shows a 9 + 2 structure. These morphological charateristics of acrosomal vesicle belong to the family Ostreidae in the subclass Pteriomorphia.