Yu, Eun Jeong;Ahn, Hyojeong;Lee, Jang Mi;Jee, Byung Chul;Kim, Seok Hyun
Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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제42권4호
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pp.156-162
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2015
Objective: To investigate fertilization and embryo quality of dysmorphic mature oocytes with specific morphological abnormalities obtained from intracytoplasmic sperm injection (ICSI). Methods: The fertilization rate (FR) and embryo quality were compared among 58 dysmorphic and 42 normal form oocytes (control 1) obtained from 35 consecutive ICSI cycles, each of which yielded at least one dysmorphic mature oocyte, performed over a period of 5 years. The FR and embryo quality of 441 normal form oocytes from another 119 ICSI cycles that did not involve dysmorphic oocytes served as control 2. Dysmorphic oocytes were classified as having a dark cytoplasm, cytoplasmic granularity, cytoplasmic vacuoles, refractile bodies in the cytoplasm, smooth endoplasmic reticulum in the cytoplasm, an oval shape, an abnormal zona pellucida, a large perivitelline space, debris in the perivitelline space, or an abnormal polar body (PB). Results: The overall FR was significantly lower in dysmorphic oocytes than in normal form oocytes in both the control 1 and control 2 groups. However, embryo quality in the dysmorphic oocyte group and the normal form oocyte groups at day 3 was similar. The FR and embryo quality were similar in the oocyte groups with a single abnormality and multiple abnormalities. Specific abnormalities related with a higher percentage of top-quality embryos were dark cytoplasm (66.7%), abnormal PB (50%), and cytoplasmic vacuoles (25%). Conclusion: The fertilization potential of dysmorphic oocytes in our study was lower, but their subsequent embryonic development and embryo quality was relatively good. We were able to define several specific abnormalities related with good or poor embryo quality.
야생의 우수리땃쥐, Crocidura lasiura의 부정소 미부의 정상과 비정상 형태의 정자를 광학 및 전자현미경으로 비교 관찰하였다. 정상 정자와 함께 다수의 형태 비정상 정자가 관찰되었다. 이것은 비정상 정자의 존재가 개체의 생식력 없음을 나타내는 절대적 지표가 아님을 의미한다. 하지만 비정상 정자의 존재는 개체의 생식력 없음과 연관되며 특히 두부의 형태의 이상은 생식력 없음과 밀접한 관계가 있다. 건강한 야생의 우수리땃쥐, C. lasiura의 부정소 미부에서 관찰된 정자의 비정상 두부의 형태는 다음과 같은 유형으로 나타났다. 1) 핵질의 응축이 이루어지지 않거나 부분적으로 이루어진 형태 2) 첨체의 분열 혹은 파손이 나타나는 형태 3) 첨체 혹은 원형질막이 부분적 혹은 완전히 접혀진 형태 4) 첨체가 핵과 분리되는 형태 5) 첨체가 불규칙적으로 응축하는 형태 6) 잘못된 위치에서 관찰되는 첨단체
A clinical investigation was undertaken on primary male infertility patients of recent 5 years. The results obtained were as follow: 1. Suspective etiologic factors were: 1) testicular failure, 36.1 %; 2) varicocele, 18.7%; 3) endocrine abnormality, 13.5%; 4) obstruction, 13.5%; 5) idiopathic, 10.9%; 6) cryptorchidism, 2.6%; 7) necrospermia, 0.9%. 2. On semen analyses, azoospermia was found in 55.8%, single abnormal parameter in 21.5 %, and multiple/all abnormal parameter in 22.7% of the 163 cases. 3. For the evaluation of the sensitivity and specificity of noninvasive variables in predict in obstruction as the cause of azoospermia in patient who had undergone testicular biopsy, the testicular size and serum follicle-stimulating hormone(FSH) level revealed 100% of sensitivity. 4. Among the 43 patients with a testicular biopsy confirmed diagnosis there was a significant difference in testicular size, ejaculate volume(p<0.0001) and serum FSH(p<0.0001) between patients with testicular failure and those with ductal obstruction. 5. Of 93 treated patients with primary male infertility, 42 were managed by medical treatment including endocrine treament, retrograde ejaculation treatment, infection treatment and observation; 29 were managed by surgical treatment including varicocelectomy, vasovasostomy, vasoepididymostomy and TUR of ejaculatory duct; 20 were managed by sperm preparation treatment including artificial insemination(AI), electroejaculation plus AI and vibration ejaculation plus AI ; 2 were managed by microscopic epididymal sperm aspiration plus IVF, repectively. 6. 42 patients who could be followed-up, 21 patients(50%) impregnated their wives.
본 연구는 rBST, Vito E 및 Se 투여가 한우 종모우의 정액성상에 미치는 효과를 검토하였고 정액의 동결보존 시 정액희석액에 taurine의 첨가가 융해 후 정액성상에 미치는 영향을 검토하였다. 1. rBST, Vit. E, Se 및 Vit. E와 Se 혼합 투여가 한우 종모우의 정액량, 정자농도 및 수소이온농도 (pH)에 미치는 영향을 조사한 결과, 정액량과 수소이온농도는 처리구간에 커다란 차이가 없었으며(P<0.05), 정자의 평균농도는 각각 13.50$\pm$2.32, 16.26$\pm$2.65, 17.07$\pm$2.61, 19.23$\pm$2.07 및 19.46$\pm$2.06$\times$$10^{8}$ 정자/$m\ell$로서 Se 투여구와 혼합투여구가 대조구, rBST 투여구 및 Vit. E 투여구보다 통계적으로 유의하게 높은 정자농도를 나타냈다 (P<0.05). 2. rBST. Vit. E 및 Se 투여가 한우 종모우의 정액의 동결융해시 정액성상에 미치는 영향을 조사한 결과, 정자의 운동율과 기형율은 투여구간에 통계적 유의차는 없었으나, 정자의 생존율은 혼합투여구가 48.24%로서 대조구 (44.48%)보다 통계적으로 유의하게 높은 생존율을 나타냈으며 (P<0.05), rBST 투여구, Vit. E 투여구 및 Se 투여구는 각각 46.48%, 47.28% 및 46.34%로서 대조구와 통계적 유의차는 인정되지 않았다. 3. 정액의 동결보존시 정액회석액에 taurine의 첨가가 정액의 융해 후 정액성상에 미치는 영향을 조사한 결과는 총정자수, 운동율, 생존율 및 기형율에서 taurine 첨가구가 taurine 무첨가구보다 다소 좋은 결과를 얻었지만 커다란 차이가 없었다. 4. rBST, Vit. E 및 Se 투여가 정자의 수정능획득과 첨체반응에 미치는 효과를 조사한 결과, 수정능 획득과 침체반응이 모두 일어나지 않는 비율(F율)과 모두 일어난 비율 (AR율) 은 투여구간에 커다란 차이가 없었다 (P<0.05). 5. 정액의 동결보존 시 taurine 의 첨가가 융해후 정자의 수정능획득과 첨체반응에 미치는 영향을 조사한 결과는 수정능 획득이 일어났지만 첨체 반응이 일어나지 않은 비율 (B율)과 AR 율에서는 투여구간에 커다란 차이가 없었지만, F율은 taurine 첨가구가 taurine 무첨가구보다 낮은 비율을 나타났다 (P<0.05).
웅성 생쥐에 자기장을 15일 동안 1일 5시간씩 60G의 강도로 노출시킨 결과, 정자농도는 대조구와 자기장 15일 처리구가 각각 25.1$\pm$6.5$\times$$10^{6}$$m\ell$와 15.7$\pm$5.3$\times$$10^{6}$$m\ell$로서 처리구가 대조구에 비하여 유의적으로 낮게 나타났다(P<0.05). 생존율은 대조구와 자기장 15일 처리구가 각각 34.4%와 29.3%로서 처리구가 대조구에 비하여 낮게 나타났지만 유의적인 차이는 인정되지 않았다(P〉0.05). 기형율은 대조구와 자기장 15일 처리구가 각각 11.7%와 18.0%로서 처리구가 대조구에 비하여 유의적으로 높은 성적을 나타냈다(P〉0.05). 체중과 번식기관 무게는 대조구와 자기장 처리구간에 차이가 인정되지 않았다. 장기무게중 간, 신장은 대조구와 자기장 처리구간에 차이가 인정되지 않았으나, 비장은 대조구와 자기장 15일 처 리구가 각각 0.116g과 0.227g으로서 처리구가 대조구에 비하여 유의적으로 높게 나타났다(P<0.05).
In chicken, exogenous genes introduced into germinal crescent region (GCR) of the early developmental stage, where primordial germ cells (PGCs) were concentrated, were successfully transferred to the gonads via PGCs. The foreign genes were also confirmed to be successfully incorporated into F1 and F2 generations. We tried to incorporate the exogenous genes into PGCs by lipofection, then the DNA mixture was injected into GCR at stage 3-5 or 9-11 of embryonic development (Hamburger and Hamilton, 1951). The manipulated eggs were incubated, and hatched chicks were reared until sexual maturation. F1 generation was obtained from the DNA-treated chicken (DNA-chicken) mated with normal birds. Furthermore, F2 generation was also obtained from the F1 chicken mated with normal birds. The transfer of introduced foreign genes were confirmed by marker gene detection methods and PCR analysis in the hatched chicks, F1 and F2 generations. However, in our experiments, DNA-chickens showed abnormal characteristics such as low egg production rate, abnormal appearance and decreased number of spermatozoa. In the case of F1 chicken, low egg production and the deterioration of sperm capacity for insemination in male chicken were observed.
본 연구는 소형 개의 동결정액을 개발하여 인공수정에 이용하고자 제 2차 분획정액을 생리적 식염수와 Iris-buffer액으로 희석하고 원심분리에 의해 정장성분을 제거한 RSP-5 및 RSP-T 정액의 일반성상과 단기보존 및 동결보존시의 생존성에 대해 조사하였다. 1, 제 1분획의 정액량은 0.65$\pm$0.09 $m\ell$, 정자농도는 4.52$\pm$0.35$\times$$10^{6}$cells/$m\ell$, 활력은 15,64$\pm$3.85%, 기형정자수는 84.36$\pm$0.62%였으며, 제 2분획의 정액량은 1.25$\pm$0.20 $m\ell$, 정자농도는 3.35$\pm$0.48$\times$$10^{6}$cells/$m\ell$, 활력은 96.25$\pm$4.65%, 기형정자수는 3.75$\pm$0.46%였으며, 제 3분획의 정액량은 1.45$\pm$0.21 $m\ell$, 정자농도는 3.85$\pm$0.52$\times$$10^{6}$cells/$m\ell$, 활력은 92.82$\pm$4.24%, 기형정자수는 4.66$\pm$0.58%였다. 2. 제 2분획 정액의 RSP-5군의 정자농도는 4.82$\pm$0.36$\times$$10^{6}$cells/$m\ell$, 활력은 90.10$\pm$3.42%, 기형정자수는 9.90$\pm$0.68%였으며, RSP-T군의 정자농도는 4.55$\pm$0.45$\times$$10^{6}$cells/$m\ell$, 활력은 93.25$\pm$3.85%, 기형정자수는 6.75$\pm$0.58%였다. 이는 대조군의 정자농도 5.45$\pm$0.82$\times$$10^{6}$cells/$m\ell$, 활력 95.55$\pm$4.65%, 기형정자수 4.45$\pm$0.45%에 비해 높게 나타났다. 3. 제 2분획 정액을 RSP-5와 RSP-T로 처리한 정액을 4$^{\circ}C$에서 보존했을 때 각각 1~72시간(97.54~6.25%)과 1~100시간(97.40~5.62%)에서 생존성이 유지되었고, 38$^{\circ}C$에서 보존했을 때 1~40시간(96.45~7.45%)과 1~50시간(95.60~B.65%)에서 생존성이 유지되었다. 이는 무처리 대조군의 1~50시간(97.24~4.82%)과 1~30시간(95.52~5.55%)에 비해 생존성이 높게 나타났다. 4. 제 2분획 정액을 처리한 RSP-5군의 정액을 완만 및 초급속 동결후 융해했을 때 생존율은 각각 67.3$\pm$4.45%와 46.4$\pm$3.84%였으며, RSP-T군 정액은 58.8$\pm$4.46%와 74.4$\pm$4.20%로서 대조군의 8.5$\pm$2.12%에 비해 높게 나타났다.
웅성생쥐에 일정량의 BPA를 15일과 30일간 투여한 결과, 총정자수는 15일과 30일 대조구가 각각 25.1$\pm$6.5$\times$$10^{6}$$m\ell$ 및 23.7$\pm$6.7$\times$$10^{6}$$m\ell$, BPA 15일과 30일 처리구가 각각 17.0$\pm$6.6$\times$$10^{6}$$m\ell$ 및 19.3$\pm$5.7$\times$$10^{6}$$m\ell$로서 처리구가 대조구에 비하여 유의적으로 낮게 나타났다(P<0.05). 생존율은 15일과 30일 대조구가 각각 34.4$\pm$12.1% 및 34.0$\pm$9.7%, BPA 15일과 30일 처리구가 각각 25.6$\pm$7.6%와 28.6$\pm$5.8%로서 처리구가 대조구에 비하여 낮게 나타났지만 유의적인 차이는 인정되지 않았다(P〉0.05). 기형율은 15일과 30일 대조구가 각각 11.7$\pm$3.5% 및 15.1$\pm$3.8%, BPA 15일과 30일 처리구가 각각 18.5$\pm$6.4% 및 22.2$\pm$4.5%로서 처리구가 대조구에 비하여 유의적으로 높게 나타났다(P〉0.05). 체중과 번식 기관 무게는 BPA 15일과 30일 처리구에서 처리구간에 차이가 인정되지 않았다. 장기무게중 간, 신장은 BPA 15일과 30일 처리구에서 처리구간에 차이가 인정되지 않았으나, 비장은 15일과 30일 대조구가 각각 0.116 $\pm$0.0169 및 0.117$\pm$0.016g, BPA 15일과 30일 처리구가 각각0.216$\pm$0.0789 및 0.222$\pm$0.1149로서 처리구가 대조구에 비하여 유의적으로 높게 나타났다(P<0.05).
본 연구는 한국야생 유래 행동이상 마우스(M. m. molossinus-tt@Kist)의 혈액학 및 혈액생화학치와, 체외수정란과 정자동결보존법, 체외수정과 수정란 이식기법을 이용한 번식장애 개선과 병원성 미생물이 제거된 무병마우스 생산을 위하여 실시하였다. 1. 5주령의 혈액학치에서 RBC, platelet치는 근교계에 비해 높게 나타났다. 혈액생화학치에서는 total cholesterol치가 근교계에 비해 높게 나타났으나 triglyceride, total protein, albumin치는 유사하였다. 2. 과배란 유기시의 평균 채란 수는 PMSG/hCG를 2.5/2.5 lU 투여군에서 11.6개, 5.0/5.0 IU 투여군에서 12.7개로 통계학적 유의 차는 인정되지 않았다. 3. 2.5/2.5 lU 투여군과 5.0/5.0 lU 투여군의 수정율은 각각 87.9%와 52%로 2.5/2.5 lU 부여군이 유의성있게 높은 성적을 나타내었고(p<0.05), 2세포기로의 발달율도 각각 유의성이 인정되는 99.0%와 90.6%였다 (p<0.05). 4. 동결정자를 이용한 체외수정에서의 수정율은 24.8%로 신선정자를 사용했을 때의 87.9% 보다 낮은 성적이었다. 5. 체외 수정란의 이식후의 산자율은 동결 2세포기 체외수정란의 경우 5마리(6.6%), 동결 정사를 이용한 체외 수정란의 경우 6마리(19.4%)와 대조군의 체외수정란의 경우 10마리(21.7%)의 새끼를 얻었다. 6. 이식후 출산한 산자의 미생물학적 검사에서 MHV(Mouse hepatitis virus)와 Staphylo-coccus aureus 등의 병원성 미생물이 무병대리모를 이용한 수정란이식에 의해 제거되었음을 확인하였다.
본 연구는 미니 돼지와 일반 돼지(Duroc)의 동결융해 후 정자의 수정 능력을 비교하여 동결 보존체계의 기틀을 확립하고자 하였다. 정액 제조는 수압법으로 정액 채취하여 1차 희석하였다. 동결은 LEY (1차: 11% ${\alpha}$-lactose+egg yolk, 2차: 1차 동결액+glycerol+OEP) 동결액을 이용하여 동결을 실시하여 동결 보존하였다. 동결 정액의 융해는 0.5 ml straw를 각각 20, 37 및 $50^{\circ}C$ water bath에서 1분, 40 초 및 10초간 융해하여 세척 과정 후 BTS 5 ml를 첨가하여 $37^{\circ}C$에서 배양하였다. 정자 성상 검사로는 기형율(Rose Bengal staining), 첨체율(Chlortetra-cycline staining) 및 생존율(SYBR-14/PI staining)등을 배양 후 0, 3, 6, 9 및 12시간에서 검토하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 정자의 보존 시간에 따른 기형율은 동결 융해 직후 miniature pig가 $19.5{\pm}1.7%$ 로 Duroc의 $13.9{\pm}0.3%$에 비해 유의적으로 높았다. (p<0.05). 첨체 검사에서 수정능 획득이 일어나지 않은 F pattern은 동결 융해 후 miniature pig와 Duroc 종 정액이 $24.1{\pm}2.8%$와 $37.9{\pm}1.1%$로 Duroc 종에서 유의적(p<0.05)으로 높게 나타났으며, 동결 융해후 miniature pig와 Duroc 종의 AR pattern은 $21.1{\pm}1.6%$ 및 $15.5{\pm}2.2%$로 miniature pig가 유의적(p<0.05)으로 높게 나타났다. 융해 온도별 생존율에서는 20과 $37^{\circ}C$에서는 두 종간에서 유의적 차이는 없었으나, $50^{\circ}C$에서는 miniature pig가 $63.8{\pm}3.6%$로 $47.4{\pm}3.2%$인 Duroc 종에 비해 유의적(p<0.05)으로 높게 나타났다. 본 연구의 결과로부터 첨체율과 기형율에 대한 연구를 보완함으로써 miniature pig정액의 안정적인 동결 체계를 확립할 수 있을 것으로 판단된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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