• Journal of Animal Science and Technology
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• 제49권6호
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• pp.729-736
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• 2007

본 연구는 돼지 정액의 체외보존에 있어 pyruvate, taurine 및 melatonin의 항산화 효과와 생존력의 평가방법간의 상관관계를 검토하고자 실시하였다. 돼지 정액의 체외보존시 항산화 효과를 평가하기 위하여 체외보존 신선정액에 pyruvate(1mM), taurine(50 mM) 및 melatonin(100nM)에 H2O2(100uM)을 혼합첨가 및 항산화제 단독처리하여 체외에서 3~12시간까지 배양하면서 3시간 간격으로 정자의 운동성, 정자의 원형질막의 완전성 및 지질 산화도를 측정하였다. 정자의 운동성은 항산화제 첨가구가 다른 처리구에 비해 높은 결과를 나타내었고, Hypoosmotic swelling test(HOST) 방법을 이용한 정자의 원형질막 완전성에서도 운동성과 유사한 결과를 나타내었다. 정자의 원형질막의 지질산화도 검사에서는 항산화제 첨가구와 무첨가구가 H2O2 첨가구와 H2O2와 항산화제의 혼합 첨가구에 비해 낮은 결과를 나타내었다. 또한 평가방법들 간의 상관관계에서는 운동성과 정자의 원형질막의 완전성에는 정의 상관관계를 나타내었고, 정액의 성상검사 방법과 지질산화검사 방법에서는 부의 상관관계를 나타내었다. 본 실험의 결과는 정액희석액에 항산화제의 첨가는 정자의 운동성 및 정자의 원형질막 완전성을 증가시키고, 정자의 원형질막의 지질산화도를 감소시키는 것으로 나타났다. 또한 정자의 원형질막의 완전성 검사 (HOST)는 정자의 원형질막의 지질산화도 검사 및 운동성 검사를 대신하여 정자의 질적 평가에 유용하게 이용될 수 있을 것으로 사료된다.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제44권2호
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• pp.96-104
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• 2017

Objective: This study aimed to compare the clinical outcomes between in vitro fertilization (IVF) and intracytoplasmic sperm injection (ICSI) in sibling oocytes. Additionally, we evaluated whether the implementation of split insemination contributed to an increase in the number of ICSI procedures. Methods: A total of 571 cycles in 555 couples undergoing split insemination cycles were included in this study. Among them, 512 cycles (89.7%) were a couple's first IVF cycle. The patients were under 40 years of age and at least 10 oocytes were retrieved in all cycles. Sibling oocytes were randomly allocated to IVF or ICSI. Results: Total fertilization failure was significantly more common in IVF cycles than in ICSI cycles (4.0% vs. 1.4%, p<0.05), but the low fertilization rate among retrieved oocytes (as defined by fertilization rates greater than 0% but < 30%) was significantly higher in ICSI cycles than in IVF cycles (17.2% vs. 11.4%, p<0.05). The fertilization rate of ICSI among injected oocytes was significantly higher than for IVF ($72.3%{\pm}24.3%$ vs. $59.2%{\pm}25.9%$, p<0.001), but the fertilization rate among retrieved oocytes was significantly higher in IVF than in ICSI ($59.2%{\pm}25.9%$ vs. $52.1%{\pm}22.5%$, p<0.001). Embryo quality before embryo transfer was not different between IVF and ICSI. Although the sperm parameters were not different between the first cycle and the second cycle, split insemination or ICSI was performed in 18 of the 95 cycles in which a second IVF cycle was performed. Conclusion: The clinical outcomes did not differ between IVF and ICSI in split insemination cycles. Split insemination can decrease the risk of total fertilization failure. However, unnecessary ICSI is carried out in most split insemination cycles and the use of split insemination might make ICSI more common.

• 한국수정란이식학회지
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• 제28권1호
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• pp.31-39
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• 2013

Alpha-tocopherol as an antioxidant acts in preservation of chilled semen by preserving cell membrane damage from lipid peroxidation. Optimum concentrations of ${\alpha}$-tocopherol in egg yolk-citrate (EYC) extender need to be studied in crossbred bull's semen. Different concentrations of ${\alpha}$-tocopherol viz. 0, 1, 2, 4 and 6mg per ml of extender were used. Semen was collected once a week from four bulls used to regular collection, aged 4 to 7 years, weighing 320 to 450 kg, and with body condition score 4 to 4.5 and scrotal circumference 23 to 32 cm. Semen was evaluated routinely and sperm morphology was viewed under light microscope at ${\times}1,000$ magnification after fixing with buffered formal saline. Over 90% had normal head, acrosome, mid-piece and tail. Semen was diluted with egg-yolk-citrate extender to produce $15{\times}10^6$ spermatozoa/ml and 0, 1, 2, 4 and 6 mg/ml ${\alpha}$-tocopherol were added. The semens amples were kept at $8^{\circ}C$. Sperm motility and viability were examined daily up to 5 days under light microscopy at ${\times}200$ magnification. Sperm viability was acceptable (${\geq}40%$) up to the $4^{th}$ day with all concentrations of ${\alpha}$-tocopherol and up to the $5^{th}$ day with 2 mg/ml ${\alpha}$-tocopherol. Sperm motility was acceptable (${\geq}40%$) up to the $3^{rd}$ day irrespective of ${\alpha}$-tocopherol concentration, and up to the $4^{th}$ day with 2 mg/ml ${\alpha}$-tocopherol. It is suggested that the lifespan of chilled semen may be extended up to 4 days by adding 2mg/ml ${\alpha}$-tocopherol.

• 한국동물위생학회지
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• 제40권3호
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• pp.201-208
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• 2017

소에 있어서 BVDV는 반추류에서 중대한 감염을 야기하여 번식장애, 설사 및 유량감소를 야기하여 농가에 막대한 피해를 야기하고 있다. 특히 지속감염우의 확인과 도태는 농가 내 감염원을 제거하는 중요한 일이나 아직까지 PI개체의 바이러스의 감염과 전파에 관한 연구는 미진한 것으로 추정된다. 본 연구에서는 도입된 수컷에서 PI를 확인하였으며 전혈 검사를 실시 하면, PI 혈액 성상에서 림프구가 낮게 관찰되며 전체 WBC의 수는 정상범위에 속하나 낮게 나타나는 것을 알 수 있었다. PI 수컷에서 생산된 정액은 정자 수가 매우 낮으며, 신선 정액의 생존성도 불량한 것으로 조사되었다. 정자 기형율 또한 증가되었으며 특히 공포와 중편부의 소적을 가진 기형정자의 비율이 높았다. PI수컷은 나이가 들수록 정액 성상이 불량하여 불임화되었고 이는 BVDV가 정소의 정자 생산능력을 낮추어 사출된 정액내 정자수 감소 현상을 야기한다는 것을 알 수 있었다. 그럼에도 불구하고 확인된 PI 개체에 의한 전체군의 감염 현상은 관찰할 수 없었는데, 이는 적절한 백신 프로그램에 의하여 PI에 의한 간접적인 전파의 위험성이 낮다고 판단된다.

• Reproductive and Developmental Biology
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• 제30권1호
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• pp.59-64
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• 2006

본 연구는 돼지정액의 보다 간편하고 손쉽게 동결시킬 수 있은 방법을 확립하기 위하여 수행하였다. 돼지정액은 3시간에 걸쳐 $5^{\circ}C$까지 냉각 후 Straw에 봉입하고 다양한 방법 및 step에 의해 스티로폼 용기 내에 들어있는 $LN_2$ 중에서 동결하였다. 정자의 생존성은 $LN_2$ 표면으로부터 10 cm 위에서 10분간 정치 후 침적할 경우 가장 높게 나타났다(54.0%). Straw를 $-102^{\circ}C$에서 10분간 정치시킨 처리구가 여타구보다 높은 생존성이 얻어졌다(74.0%, P<0.05). 응해 방법에 따른 동결정액의 생존성 실험에서는 $37^{\circ}C$의 융해구가 $52^{\circ}C$ 융해구보다 유의적으로 높은 결과를 나타냈다(P<0.05). 1단계 동결 방법과 3단계 동결방법으로 돼지 정액을 동결시킨 결과 정액의 일반적 특성 및 첨체의 이상 유무를 평가하는 CTC 검사에서는 커다란 차이가 인정되지 않았다. 동결정액을 이용한 체외수정 결과에서는 상실배기 이상 발육율에서 1-step이 3-step보다 높은 발육율을 나타내었다(27.5 vs 14.7%, P<0.05). 본 실험의 결과 돼지정액 동결 시 $-102^{\circ}C$에서 10분간 정치시키는 1단계 동결방법이 간편하면서 유리한 동결 방법으로 활용될 수 있음을 보여준다.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제8권2호
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• pp.175-178
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• 1995

Semen was collected from Taiwan commercial local chickens, the diluted sperm suspension were placed in the Gene Pulser cuvette for electroporation. The motility, mortality and abnormality of spermatozoa were evaluated. The fertility and hatchability were also investigated. The results showed that smaller motility and greater mortality or abnormality than the control were found when the capacitances were increased either for spermatozoa treated with small capacitances(0.25, 1, 3 and $25{\mu}$ FD) or treated with high capacitances (125, 250, 500 and $960{\mu}$ FD). In general, greater field strengths also resulted in smaller motility and greater mortality or abnormality of spermatozoa. Although the electroporation decrease the fertility there were no effect on the hatchability.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제27권11호
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• pp.1554-1561
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• 2014

Present study analyzed the changes in peripheral blood testosterone concentrations and testicular cytogram in relation to age and semen quality in crossbred males. Three different age groups of crossbred males viz. bull calves (6 months, n = 5), young bulls (15 months, n = 5) and adult bulls (4 to 6 years, n = 8) were utilized for the study. Testicular fine needle aspiration cytology technique was used to quantify testicular cytology and their indices. Peripheral blood testosterone concentrations were measured using enzyme-linked immunosorbent assay method. Semen samples collected from adult bulls were microscopically evaluated for quality parameters. Mean peripheral blood testosterone concentrations in bull calves, young bulls and adult bulls were $2.28{\pm}0.09ng/mL$, $1.42{\pm}0.22ng/mL$ and $5.66{\pm}1.08ng/mL$ respectively, and that in adult bulls were significantly different (p<0.01) from young bulls and bull calves. There was no significant difference between the proportion of different testicular cells in bull calves and young bulls. Between young and adult bulls, significant differences (p<0.01) were observed in the proportion of spermatocytes, spermatozoa, and sperm: Sertoli cell ratio. The proportions of Sertoli cells showed a significant difference (p<0.01) between the three age groups. The number of primary spermatocytes had a positive correlation with peripheral blood testosterone concentrations in bull calves (r = 0.719, p<0.01). Number of Sertoli cells per 100 germ cells was negatively correlated with blood testosterone concentration in young bulls (r = -0.713, p<0.01). Among different semen parameters in adult bulls, ejaculate volume (r = 0.790, p<0.05) had positive relationship, and sperm motility had significant negative correlation (r = -0.711, p<0.05) with testosterone concentrations. The number of Sertoli cells and Sertoli cell index had a positive correlation with various semen quality parameters (p<0.001). Results of the present study conclude that number of Sertoli cells and Sertoli cell index are good indicators of semen quality, but peripheral blood testosterone concentrations may not have a direct relationship with various seminal attributes in crossbred bulls.

• 한국산학기술학회논문지
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• 제19권9호
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• pp.116-123
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• 2018

정액의 품질은 정자의 운동학적 특성 및 첨체의 온전성 등에 의해서 결정된다. 이전 연구들에서 정액 품질 검사는 현미경을 이용하여 사람이 직접적으로 수행하기 때문에 오차가 컸다. 최근에는 이러한 기법을 보완하고자 분자생물학적 방법을 통한 검사 방법이 새로이 대두되고 있다. ZAR1 유전자는 척추동물의 초기 배아 발달에 영향을 미치는 유전자로 알려져 있지만 정액과 연관성 연구는 진행되어 있지 않다. 본 연구는 ZAR1 유전자의 SNP을 탐색하고 정액의 운동학적 특성과의 연관성을 규명하였다. SNP을 탐색 및 연관성 분석을 하고자 두록 수퇘지 105두의 혈액으로부터 추출한 DNA로 부터 ZAR1 유전자의 전체 염기서열 분석을 실시하였고, 105두의 정액의 운동학적 특성을 분석하였다. 그 결과, ZAR1의 염색체 2540번째 T 서열이 C로 변환되는 것을 확인하였고, ZAR1 SNP의 유전자형을 분석한 결과 major allel은 T 서열이며 minor allele은 C로 확인되었다. ZAR1의 유전자형과 정액의 운동학적 특성과의 연관성 분석 결과 MOT (Motility) (p<0.01)와 VSL (Straight-line Velocity) (p<0.05)에서 유의적인 차이가 나타났다. 또한, 운동학적 특성과 ZAR1 SNP을 비교하였을 때, T allele을 가진 유전자형이 C allele에 비해 MOT와 VSL을 감소시키는 것으로 확인하였다. 따라서 C allele을 가진 돼지가 정액의 MOT와 VSL에서 더 좋은 것으로 판단된다. 이러한 결과들은 우수한 정액을 생산하는 돼지를 판별하는 유전자 진단 기법의 기초자료로 활용할 수 있을 것으로 사료된다.

• 한국수정란이식학회지
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• 제30권2호
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• pp.109-114
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• 2015

Cryopreservation of boar semen is continually researched in reproductive technologies and genetic resource banking in breed conservation. For evaluating the boar semen quality, sperm motility (MOT) is an important parameter because the movement of spermatozoa indicates active metabolism, membrane integrity and fertilizing capacity. Various researches have been trying to improve the quality of semen post-thawed in boar. Recently, polymorphism (g.358A>T) of cluster-of-differentiation antigen 9 (CD9) gene reported to be significant association with MOT. Also, CD9 gene was expressed in the male germ line stem cells is crucial for sperm-egg fusion, and was therefore selected as candidate gene for boar semen. This study was conducted to evaluate the pig SNP (g.358A>T) of CD9 gene as a positional controlling for semen parameters of post-thawed boar semen. To results, the g.358A>T SNP of the CD9 gene was significantly associated with the traits such as MOT, curve linear velocity, straight line velocity, average path velocity and amplitude of lateral head displacement. Particularly, the g.358A>T SNP significantly has the highest association with MOT and animals with AA genotype (p<0.001). Therefore, we suggest that the g.358A>T in the intron 6 region of the porcine CD9 may be used as a molecular marker for Duroc boar Post-thawed semen quality, although its functional effect was not defined yet.

• 한국가축번식학회지
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• 제26권3호
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• pp.275-289
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• 2002

본 연구는 종모우의 정자수정능력 평가방법의 개발과 정자 기능 및 성상 변화에 영향을 미치는 요인을 알아보기 위하여 시행하였다. 동결-융해된 종모우 정액을 대상으로 정자의 운동성과 정자의 형태를 분석하였고, 정자의 기능 검 사 항목으로서 체외수정(IVF), HOST, Ca-ionophore에 의한 첨체반응율, 정자의 ROS 측정을 위한 luminol, lucigenin-dependent chemiluminescence, LPO 분석을 위한 malondialdehyde의 측정 및 TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase(TdT) dUTP nick end labelling) 기법을 이용한 정자의 DNA fragmentation를 측정하였으며 이들 각각의 조사 항목들의 분석치들과 체외수정율 및 배발생율과의 상관관계를 조사하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 고수정군과 저수정군의 체외수정율과 배반포 발생율의 평균은 각각 64.4%와 34.3%, 18.50%와 6.2%였으며 두 군간에 통계학적으로 유의한 차이를 보였다(P<0.05). 고수정군과 저수정군의 정자운동성과 첨체반응률은 각각 평균79.0 %와 66.2%, 40.7%와 22.9%로 두 군간에 통계학적으로 유의한 차이를 보였으나(P<0.05), 정상형태 정자의 비율과 HOST는 각각 평균 94.6%와 92.7%, 69.4%와 59.8%로 두 군간 유의한 차이를 보이지 않았다. 2. Luminol dependent chemiluminescence, LPO 및 DNA fragmentation의 평균은 고수정군과 저수정군에 있어서 각각 6.4와 6.5, 2.Onmol와 3.Inmol 및 2.6%와 7.4%로 두 군간 통계학적으로 유의한 차이를 보였으나(P<0.05), lucigenin dependent chemiluminescence는 4.7와 4.6로 두 군간 유의한 차이를 보이지 않았다. 3. 체외 수정율은 정자의 운동성 및 첨체반응율과 통계학적으로 유의한 정(positive)의 상관관계(r=0.87, p<0.01; r=0.81, p<0.05)를 나타내었으며, luminol dependent chemiluminescence, lipid peroxldation 및 DNA fragmentation과는 통계학적으로 유의한 부(negative)의 상관관계 (r= -0.81, p<0.05; r: -0.74, p<0.05; r : 0.81, p<0.05)를 나타내었다. 그러나 체외수정율은 정상형태 정자의 비율, HOST 및 lucigenin dependent chemiluminescence와는 유의한 상관 관계를 나타내지 않았다. 4. 배반포 발생율은 첨체반응율과 통계학적으로 유의한 정의 상관관계(r=0.71, p<0.05)를 나타내었으며, luminol dependent chemiluminescence, lipid peroxidation 및 DNA fragmentation과는 통계학적으로 유의한 부의 상관관계(r= -0.71, p<0.05; r= -0.89, p<0.01; r= -0.71, P<0.05)를 나타내었다. 배반포 발생율은 정자의 운동성, 정상형태 정자의 비율 및 HOST, lucigenin dependent chemilumihescence와는 유의한 상관관계를 나타내지 않았다. 이상의 결과를 종합해 보면 정액질의 저하에 ROS의 영향이 밀접히 연관되어 있음을 알 수 있으며, 또한 본 연구에서 적용된 기법들은 정액질의 평가 및 정자 수정능력 향상을 위한 기술개발에 있어서 유용한 평가 방법으로 이용될 수 있을 것으로 사료된다.