Germ cell-specific hyaluronidases such as sperm adhesion molecule 1 (SPAM1) and hyaluronoglucosaminidase 5 (Hyal5) are in part responsible for dispersal of the cumulus cell mass, which is a critical step in establishing fertilization in mammals. In this study, we identified two testis-hyaluronidases, SPAM1 and Hyal5, in hamster and rat. These two genes were expressed specifically in the testis. At the protein level, hamster SPAM1 and Hyal5 display 78.7% and 75.4% identity with mouse SPAM1 and Hyal5. Further, the activity of the enzymes with respect to cumulus cell dispersion did not differ, although we observed that the enzymatic activity differed in pH range. These studies suggest that different sperm hyaluronidases are capable of dispersing the cumulus cell mass despite differences in enzyme activity.
Two strains S-P and S-P-2, both Streptomyces sp., have been isolated and were found to have relatively high specific enzyme activity compared to other organisms reported. The specific activity of the enzyme produced from these two strains were 0.25 and 0.2 international units respectively. The productivity of the enzyme achieved was about 50 IU/l/hr. Glucose isomerase form these strains was found to be stable under the temperature of heat treatment (at $65^{\circ}C$) for fixation of enzyme inside the dell. This organism has an advantage in that it did not require toxic metalic ion for enzyme activity and could utilize xylan in leu of xylose as an inducer. The optimal temperature and pH of enzymatic reaction purpose of using these data for the optimal operation and designing of enzyme reactor system. The reaction mechanism was found to follow the single substrate reversible reaction kinetics. The kinetic constants determined experimentally are : $K_{mf}=0.33M,\;K_{mb}=1.0M,\;V_{mf}=0.88{\mu}mole\;per\;min.,\;V_{mb}= 2.96{\mu}mole\;per\;min.\;and\;K_{eq}=0.74.
꽃송이버섯(Sparassis crispa DSMZ 5201)의 균사를 사용하여 균사외 효소활성을 측정하였다. Yeast-malt extract-glucose 배지를 사용하여 $24^{\circ}C$에서 15일간 배양 후 배양여액을 조효소원으로 사용하였을 때, $\alpha$-amylase효소의 활성은 44.27 unit/$mg{\cdot}protein$이었다. 배양여액 중의 Protease, CMCase, $\beta$-glucosidase, chitinase 및 exo-$\beta$-1,4-glucanase의 세포외 효소활성은 상대적으로 높았으나, xylanase 효소활성은 낮게 나타났다.
더덕 뿌리 내에 함유되어 있는 항산화효소를 생육환경에 따라 조사하기 위하여 경북 서벽지역의 1 2년생 밭더덕, 야생더덕 및 논에서 재배되는 1 2년생 더덕을 채취하여 사용하였고, 부위별 비교는 각 더덕 뿌리를 upper, middle, low로 나누어서 사용하였다. 이들을 O radical caseade인 SOD, POD, CAT activity를 조사하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. SOD 활성은 밭재배조건의 경우 1년생보다는 2년생이, 논재배시는 1년생이 2년생보다는 높은 활성을 나타내었으며, 야생종의 비활성이 96069u/mg protein으로 가장 높은 활성을 나타내었다. 부위별로 비교해보면 재배종은 upper>middle>lower 순으로 논재배시는 low>upper>middle 순으로 야생종은 middle>lower, upper 순으로 생육환경에 따라 차이를 나타내었다. 2. POD 비활성(u/mg protein)은 년근수가 높을수록 활성은 증가하며, 야생지역이 68 u/mg protein로 가장 높은 활성을 나타내었다. 부위별로는 middle>lower>upper 순으로 활성이 나타났으며, 서벽야생의 middle 부분이 85 u/mg protein를 나타내었다. 3. CAT 활성은 POD 활성과는 달리 년근수가 낮을수록 높게 나타났으며 밭재배지와 야생지의 활성은 비슷하며 논재배지는 상대적으로 그 활성이 낮았다. 부위별로는 upper>low>middle 순으로 upper 부위가 상당히 높은 활성을 나타내며, 서벽재배 1년생의 upper가 53.59 u/mg protein으로 가장 높게 나타났다. 4. MS1D(MS+2.4-D 1ppm)에 배양한 배양세포의 항산화효소의 활성은 CAT는 1564, POD는 30, SOD는 22200 u/mg protein로 생체에 비해 낮은 활성을 나타내었다.
토양광물 종류별 토양의 점토활성도를 구분하기 위하여 우리나라 390개 토양통을 점토광물과 함수산화광물을 기준으로 점토광물 조성이 다른 7개의 토양을 선정하여 토양광물 종류에 따른 점토의 CEC와 비표면적을 비교하였다. 토양 CEC에 대한 점토의 비가 0.7 이상인 토양은 사암을 모재로 Chlorite를 주광물로 하는 토양, 안산암질반암을 모재로 Smectite를 함유한 토양, 화산재를 모재로 Allophane과 Ferrihydrite가 주광물로 이루어진 토양이었으며, 점토활성도 0.3-0.7인 토양은 회장석을 모재로 Kaolin이 주광물 토양, 하성퇴적토를 모재로 Kaolin, Illite, Vermiculite가 혼합된 토양이었다. 또한 점토활성도 0.3이하인 토양은 화강암 및 화강편마암 모재의 Kaolin을 주광물로 Geothite와 Hematite가 함유된 적황색계 토양, 석회암 모재의 Illite와 Vermiculite를 주광물로 Gibbsite, Geothite, Hematite가 함유된 적황색계 토양이었다. 토양의 점토활성도는 점토의 CEC, 점토의 비표면적과 상관이 있어서 점토활성도가 높은 토양에서는 점토의 CEC가 높고 점토의 비표면적이 넓었다. 따라서 토양의 점토활성도는 기존의 점토광물의 정성과 정량분석을 실시하지 않고도 토양의 일반적인 분석을 통하여 토양 중 점토광물의 조성을 추정하고 토양의 물리-화학적 특성을 예측하는데 유용한 기준이 될 것으로 생각된다.
지렁이(Earthworm, Lumbricus terrestris)로부터 thiol-specific antioxidant activity(TSA)를 나타내는 향산화 단백을 분리정제 하였다. 이 향산화 단백은 환원제로 thiol성분에 의해 유지되는 비효소적 금속 촉매 산화계 (MCO, $Fe^{3+}$, DTT 또는 2-mercatoethanol ; Thiol- MCO system)에 의하여 Glutamine Synthetase의 불활성을 억제하지만 아스코르브산과 같은 nonthiol 환원제를 가진 효소적 금속 촉매 산화계 (MCO, $Fe^{3+}$, ascorbate ; nonthiol- MCO system)에서는 Glutamine Synthetase의 불활성을 방어하지 못하였다. 정제된 지렁이 TSA 단백질은 SAS-PAGE에 의해 51-kDa임을 밝혔고, 기존에 알려진 TSA protein과 분자량이 다른 TSA Family로써 활성 산소종에 의한 산화적 손상을 방어하는 향산화 효소로써의 중요한 생화학적 역할을 수행함을 제시하였다.
Saccharomyces cerevisiae의 고정화 및 현탁 세포로 구성된 연속식 생물반응기에서 에탄올 생성시 지질 첨가 영향을 연구하였다. 여러가지 배양조건하에서 에탄을 생산량 및 현탁 세포의 알코올 탈수소효소(alcohol dehydrogenase, ADH)의 비활성도를 측정하였다. 무통기 조건하에서 ergosterol과 oleic acid를 세포 배양액에 첨가하였을때, 에탄을 생산량과 균체 생육이 현저히 증가하였으나, 알코올 탈수소효소의 비활성도는 영향을 받지 않았다. 특히 무통기 조건 및 통기 조건하에서 얻어진 현탁 세포간의 알코올 탈수소효소의 비활성도는 차이가 없었다. 계면활성제 첨가시에도 에탄올 생성, 균체 생육, 알코올 탈수소효소의 비활성도가 크게 증가하였다. 고농도($40\;g/{\ell}$ 이상) 에탄올에 노출된 세포배양액에 ergosterol과 oletic acid 첨가시에도 에탄올 생성량, 균체 생육, 알코올 탈수소효소의 비활성도가 증가하였으나, 계면활성제 첨가시에는 효과가 없었다. 따라서, 지질 첨가효과는 저농도 에탄을 조건에 비해 고농도 에탄을 존재시 크게 작용하였다. 여러가지 매양조건에서 얻어진 현탁 세포의 알코올 탈수소효소의 isozyme patteren을 전기영동법에 의해 조사한 결과 ADH I으로 추정되는 한개의 isozyme만이 확인되었으며, isozyme의 이동거리는 세포의 배양조건에 따라 약간의 차이가 있었다. 에탄올 생성량과 알코올 탈수소효소의 비활성도사이의 상관관계는 성립되지 않았으며, 알코올 탈수소효소의 비활성도보다는 균체량이 에탄올 생성에 더 중요한 인자로 작용하였다.
본 연구에서는 닭의 정소 및 정자에 대한 기능 유전체 연구를 위한 자원을 확보할 수 있도록 정소 특이적유전자로 예상되는 후보 염기서열을 분석하였다. TIGR Gallus gallus Gene Index 상의 데이터베이스에서 닭의 정소에서만 나타나는 것으로 공개된 EST 염기서열을 검색하여 나온 총 292개의 서열을 선택하였으며, 이와 같이 선별된 서열들에 대하여 닭의 정소와 난소를 포함한 다양한 조직에서 전사체의 발현을 검증하였다. 결과에서, 총 292개의 염기서열 중 110개가 정소 특이적인 발현을 나타내었다. Tentative consensus sequence (TC) 상에서 집합된 EST의 수와 정소 특이적으로 발현하는 TCs의 수 사이의 상관관계는 발견되지 않았다. Gene Ontology 데이터베이스 용어를 이용하여 분류한 결과에서는 정소특이적인 TC는 닭의 전체 TC를 분류한 것과 비교하면 catalytic activity (Molecular Functionbranch)의 카테고리에 많은 수의 TC가 포함된 것으로 나타났다. 본 연구의 결과는 닭의 정소 특이적 유전자에 대한 연구와 그 기능 분석을 보다 더욱 촉진시킬 수 있을 것이다.
A-factor I a microbial hormone that can positively control cell differentiation leading to spore formation and secondary metabolite formation in Streptomyces griseus. to identify a protease that is deeply involved in the morphological and physiological differentiation of Streptomyces, the proteases produced by Streptomyces griseus IFO 13350 and its A-factor deficient mutant strain, Streptomyces griseus HH1, as well as Streptomyces griseus HH1 transformed with the afsA gene were sturdied. In general Streptomyces griseus showed a higher degree of cell growth and protease activity in proportion to its ability to produce a higher amount of A-factor. In particular, the specific activity of the trypsin of Streptomyces griseus IFO 13350 was greatly enhanced more than twice compared with that of Streptomyces griseus HH1 in the later stage of growth. The specific activity of the metalloprotease of Streptomyces griseus HH1 was greatly enhanced more than twice compared with that of Streptomyces griseus IFO 13350, and this observation was reversed in the presence of thiostreptione, However, Streptomyces griseus HH1 transformed with the afsA gene showed a significantly decreased level of trypsin and metalloprotease activity compared with that of the HH1 strain. There was no significant difference between Streptomyces griseus IFO 13350 and HH1 strain in their chymotrypsin and thiol protease activity, yet the level of leu-amionpeptidase activity was 2 times higher in Streptomyces griseus HH1 than in strain IFO 13350 . Streptomyces griseus HH1 harboring afsA showed a similar level of enzyme activity , however, all the three protease activities sharply increased and the thiol protease activity was critically increased at the end of the fermentation. When a serine protease inhibitor, pefabloc SC, and metalloprotease inhibitor, EDTA, were applied to strain IFO 13350 to examine the in vivo effects of the protease inhibitors on the morpholofical differentiation, the formation of aerial meycelium and spores was delayed by two or three days.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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