• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제17권5호
• /
• pp.440-446
• /
• 1989

Penicillium sp. CB-20의 polygalacturonase 생성을 위한 최적조건은 탄소원으로 펙틴을 사용하여 16 시간 배양시 최대 활성을 나타내었으며, Sephadex G-25, G-75 및 G-150을 사용한 gel filtration과 DEAE-cellulose, DEAE-Sephadex A-50에 의 한 ion exchange chromatography를 통하여 이 효소를 약 30배 가량 정제할 수 있었고, 수율은 2.31%였다. 정제효소는 polyacrylamide gel electrophoresis에 의하여 단일 밴드로 확인 되었으며, 분자량은 SDS PAGE에 의하여 21,000 정도로 측정되었다. 효소의 결정구조는 마름모꼴을 형성하고 있었으며 아미노산 조성은 17종류로써 glutamic acid, glycine, hlstidine의 함량이 비교적 많았다.

• 한국축산식품학회지
• /
• 제22권3호
• /
• pp.259-266
• /
• 2002

본 연구는 토양으로부터 egg shell membrane(ESM)을 분해하는 미생물 strain 109를 분리 동정하였으며, 분리균이 생성한 keratinase를 정제하고 그 특성을 확인하였다. Strain 109는 16S rDNA 결과 99.9%의 상동성을 가지고 Bacillus licheniformis로 확인되었고, 3% ESM을 함유한 Nitrobacter 203배지에서 B. licheniformis 109를 접종하여 1주일간 배양하였을 때 ESM의 분해율은 약 15%였다. E. licheniformis 109가 생성한 keratinase를 정제하여 SDS-PA-GE로 분자량을 측정한 결과 약 65,000 Dalton이었으며 0.1% gelatin이 함유된 SDS-PAGE에 의해 효소 활력을 확인할 수 있었다. 정제한 keratinase의 PH에 따른 활성과 안정성은 pH 9.0에서 활성이 가장 높았으며 pH 9.0이상에서 안정하였다. 또한, 5$0^{\circ}C$에서 효소활성이 가장 높았으며 온도 안정성은 2$0^{\circ}C$에서 5$0^{\circ}C$까지 안정하였고, 7$0^{\circ}C$ 이상에서는 약 50%의 활력을 상실하였다. keratinase 활성에 금속 이온이 미치는 영향은 CuCl2와 ZnCl2에 의해 약 50% 정도가 저해되었으나 FeSO4에 의해서는 1mM일 때 약 11%, 10mM일 때 약 33%가 증가하였다. 그리고 PMSF에 의해 효소활성이 저해되는 것으로 나타나 B. licheniformis 109로부터 정제한 keratinase는 serine-protease로 사료된다.

• Applied Biological Chemistry
• /
• 제35권5호
• /
• pp.375-381
• /
• 1992

Streptomyces sp. S34가 분비하는 exoinulase의 생산조건을 검토하고 정제하였으며 이 호소의 성질을 조사하여 Streptomyces sp. S56이 생산하는 endoinulase와 비교하였다. 이 효소는 같은 속에서 분비되는 endoinulase와는 달리 탄소원으로 inulin이외에 glucose 및 soluble starch를 사용할 때도 효소가 생산되어 구성효소로 생각되었으며 유기질소원으로 대두박을 사용할 때 최대의 효소생산을 보였다. DEAE-cellulose에 이어 Sephadex G-200 chromatography로 정제한 효소의 최적 pH는 $5.5{\sim}6.0$이었고 최적온도 $50^{\circ}C$에서의 열안정성은 1시간 처리로 45%의 잔류활성이 있었다. 효소활성은 $Mn^{+2}$ 이온에 의하여 증가되나 $Ag^+$, $Hg^{+2}$, $Fe^{+3}$ 이온들에 의하여는 80% 이상 감소되었으며 특히 EDTA, 8-hydroxyquinoline에 의해 저해되어 metalloenzyme으로 생각되었다. 본 효소는 inulase 활성 대 invertase 활성비가 0.52로 전형적인 exoinulase로서 inulin 및 sucrose에 대한 친화도는 거의 같으나 최대속도는 inulin이 기질일 경우 sucrose보다 약 10배 빨랐다. 같은 Streptomyces 속에서 분비되는 endoinulase와 비교하면 작용 pH 범위가 $5{\sim}7$로 더 좁고 열안정성도 낮으며 저해 금속이온도 상이하나 두 효소 모두 metalloenzyme으로 추정되었다.

• 미생물학회지
• /
• 제32권3호
• /
• pp.208-214
• /
• 1994

토양으로부터 분리한 방선균주로부터 새로운 type II 제한효소를 분리하여 그 특성을 연구하였다. 이 균주는 수리분석 결과, Streptoverticillium olivoverticillatum으로 동정되었으며, 정제한 제한효소는 SolI이라 명명하였다. SoII은 BamHI의 isoschizomer로서 여섯 개의 염기서열 5'-G $\downarrow$ GATCC- 3'을 인지하며 두 개의 G 염기 사이에서 절단하여 4 base가 돌출된 5'말단을 생성한다. 그러나 BamHI과는 달리, dam methylation 되어 있는 인식 염기서열에는 작용하지 못하였다. Ammonium sulfate 분획(30-65%)과 heparin-agarose, Affi-gel Blue column chromatography를 거쳐 SolI을 부분 정제하였다. SolI은 활성을 보이기 위하여 0.2mM 이상의 $MgCl_2$를 반드시 필요로 하였으며, 다른 cofactor는 요구하지 않았다. NaCl이 없을 때 가장 높은 활성을 가지며 120 mM 이상의 NaCl이 있으면 활성이 완전히 억제되었다. 이 효소의 반응 최적 온도는 $40^{\circ}C$, 최적 pH는 8.6으로 나타났다. Gel filtration chromatography에서의 용출부피 비교로부터 이 효소의 분자량은 약 43,000Da인 것으로 추정된다.

• KSBB Journal
• /
• 제25권3호
• /
• pp.230-238
• /
• 2010

A microbial strain having high keratinase activity was isolated from the soil of poultry factories of Gyeonggi or Chungcheong-do. The isolated strain was identified as Bacillus sp. based on its morphological and biochemical characteristics. In this study, the optimal conditions for the production of keratinase by this strain were investigated. The optimal medium composition for the keratinase production was determined to be 3.5% chicken feather as carbon source, 1.0% tryptone as organic nitrogen source, 1.0% $KNO_3$ as inorganic nitrogen source and 0.05% KCl, 0.05% $KH_2PO_4$, 0.03% $K_2HPO_4$ as mineral source and 0.01% yeast extract as growth factor. The optimal temperature and pH was $40^{\circ}C$ and 8.5 with shaking culture (200 rpm), respectively. The maximum keratinase production reached to 123 units/ml after 42 hr of cultivation under the optimal condition. When the hair was used as the sole carbon source, the maximum enzyme activity was 88 units/ml after 120 hr and in this case, the hair added in the medium was not degraded completely but got thinner than the control by 20%.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제30권4호
• /
• pp.346-351
• /
• 2002

토양으로부터 pretease활성이 우수한 균주를 선별하여 형태학적, 생화학적 동정과정 및 16 rRNA염기서열 분석 등의 방법을 이용하여 Bacillus sp. DS-1으로 동정하였다. Bacillus sp. DS-1은 초기 배지의 pH가 7.0인 조건에서 정지기에서 가장 높은 활성을 나타내었다. Bacillus sp. DS-1으로부터 protease를 생산하기 위해 탄소원으로는 1% glucose, 질소원으로는 1% yeast extract를 첨가할 때 대조구와 비교하여 각각 20%와 30% 더 효과적인 것으로 나타났다. Bacillus sp. DS-1이 생산하는 protease의 최적활성은 55$^{\circ}C$와 pH 7.0이었다. 1 mM의 EDTA첨가에 의해 protease활성이 84%실활 되었고 이 결과로부터 Bacillus sp. DS-1의 상등액에 존재하는 주된 protease 활성은 metalloprotease임을 알 수 있었다.

• 미생물학회지
• /
• 제38권4호
• /
• pp.235-240
• /
• 2002

식품폐수처리장의 활성슬러지와 논, 밭의 토양에서 우수한 protease 생성 균주을 분리 선별하였다. 이 중 효소활성이 우수한 PB16은 그람 음성, 간균이며 protease activity는 6.49 U/ml이었다. 생리, 생화학적 특성 및 16S rRNA 염기서열분석을 실시한 결과, Aeromonas hydrophila (99.0%) 인 것으로 확인 되었다. Bioscreen C를 사용한 최적 성장조건 평가는 합성폐수에 vitamin과mineral을 첨가한 배지의 중식속도(0.26 $h^{-1}$)가 무 첨가배지(0.21 $h^{-1}$)보다 높았으며, 분리균주의 합성폐수 유기물 제거능 실험에서는 초기 soluble-CODcr 2,472 mg/l인 고농도 합성폐수를 1일, 3일 반응 후 각각 59, 87%의 제거율을 나타내었다.

• 약학회지
• /
• 제47권3호
• /
• pp.184-189
• /
• 2003

Peptide deformylase (PDF) is essential and unique to bacteria, thus making it an attractive target for the discovery of novel antibacterial drugs. PDF deformylates the N-formylmethionine of newly synthesized polypeptides in prokaryotes. In this study, a pdf gene from Staphylococcus aureus 6538p was cloned in pET-14b vector and PDF protein was over-produced in Escherichia coli BL21 (DE3). NH$_2$-terminal His-tagged PDF protein was purified by nickel-nitrilotriacetic acid (Ni-NTA) metal-affinity chromatography. Enzymatic activity of purified 6xHis-tagged PDF was tested on the substrate (formyl-Methionine-Alanine-Serine) by formate dehydrogenase-coupled spectrometric assay of peptide deformylase. For the discovery of new PDF inhibitors from chemical libraries and culture broths of soil bacteria, a target-oriented screening system using a 96-well plate was developed. About 3,000 commercial chemical libraries were tested in this screening system, and 2 chemicals (0.07％) among them showed an inhibitory activity against PDF enzyme. This result showed that a new screening system can be used for the discovery of new PDF inhibitors.

• Bulletin of the Korean Chemical Society
• /
• 제22권9호
• /
• pp.953-957
• /
• 2001

The specificity of conjugation site for coating ligands was investigated using toluene-bovine serum albumin (BSA) conjugates in which BSA was conjugated at the position of o-, m-, and ${\rho}-toluic$ acid. Toluene-BSA conjugated at ${\rho}-position$ showed a binding activity of about 89-95%, whereas, those conjugated at o- and m-position of toluene exhibited a binding activity of 5 and 11%, respectively. On the basis of the above result, coating ligands with various proteins (OVA, BSA, KLH) were compared by conjugating with $\rho-toluic$ acid, and toluene-KLH was considered as the best coating ligand for this ELISA. Indirect competitive ELISA method was developed using anti-toluene antibody and $\rho-position$ conjugated toluene-KLH. The dose-response curve constructed after kinetic and optimization studies showed a 1${\times}$10-4 - 1${\times}$102 mM detectable response range with 0.1 ${\mu}M$ detectability. In specificity test of the antibody, the binding capabilities of aromatic compounds substituted with nitro-, alkyl-, chloro-, and hydroxyl group were larger rather than those of aromatic compounds (benzene, toluene and xylene) themselves. Also, tests with soil and water samples that had been spiked with toluene resulted in 102.7-113.7% recovery.

• Journal of Ecology and Environment
• /
• 제43권3호
• /
• pp.289-296
• /
• 2019

We investigated the mortality and the oxidative damages of Deschampsia antarctica in response to waterlogging stress. In field, we compared the changes in the density of D. antarctica tuft at the two different sites over 3 years. The soil water content at site 2 was 6-fold higher than that of site 1, and the density of D. antarctica tuft decreased significantly by 55.4% at site 2 for 3 years, but there was no significant change at site 1. Experimental results in growth chamber showed that the $H_2O_2$ and malondialdehyde content increased under root-flooding treatment (hypoxic conditions-deficiency of $O_2$), but any significant change was not perceptible under the shoot-flooding treatment (anoxic condition-absence of $O_2$). However, total chlorophyll, soluble sugar, protein content, and phenolic compound decreased under the shoot-flooding treatment. In addition, the catalase activity increased significantly on the 1st day of flooding. These results indicate that hypoxic conditions may lead to the overproduction of reactive oxygen species, and anoxic conditions can deplete primary metabolites such as sugars and protein in the leaf tissues of D. antarctica. Under present warming trend in Antarctic Peninsula, D. antarctica tuft growing near the shoreline might more frequently experience flooding due to glacier melting and inundation of seawater, which can enhance the risk of this plant mortality.