Tyrosinase plays an important role in the process of melanin biosynthesis, and it is a biochemical target enzyme for skin-whitening agents and the remedy for disturbances in pigmentation. We have screened 25 natural plant extracts for inhibitory effects against DOPA oxidase activity of tyrosinase. For the inhibitory effect against DOPA oxidase activity of tyrosinase, the recombinant human tyrosinase and the purified mushroom tyrosinase were used. Each of the dried plants extracted with methanol, and then the extracts were subjected to sequential fractionations with methylene chloride, ethyl acetate, n-butanol and water, respective The methylene chloride fractions of Angelica tenuissima, Nardostachys chinensis, Bombyx mop and Saposhnikovia divaricata, and the n-butanol fraction of Bombyx mori notably inhibited the human tyrosinase activity as well as mushroom tyrosinase activity (more than 90% inhibition). This study suggests that the above extracts have a potential as whitening agents as single ingredients or in combination with other of the extracts.
대한약학회 2002년도 Proceedings of the Convention of the Pharmaceutical Society of Korea Vol.2
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pp.382.2-382.2
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2002
Melanin biosynthesis inhibitors are useful not only for the materials used in cosmetics as skin-whitening agents but also for the remedy of hyperpigmentation. In order to find the new skin-whitening compounds from the natural products. screening of tyrosinase and melanin biosynthesis inhibitory activities in vitro has been carried out. The MeOH extracts and/or fractions of Polygoni multiflori Radix, Dalbergiae odoriferae Lignum. Solnani nigri Herba. Polygoni cuspidati Radix. POlygoni multiflori Ramulus. Salviae Radix showed tyrosinase inhibitory effects. Four methanolic extracts also showed melanin biosynthesis inhibitory effects in B-16 melanoma cell line.
Objectives : Recently, the demands for the effective and safe depigmentating and anti-aging agents of the skin have increased due to the medical, pharmaceutical and cosmetic reasons. The aim of this study is to search new materials from the traditional herbal medicines which inhibit the aging process of skin in vitro.Methods : Human dermis cell (HS68) was used to test the effect of Rhus verniciflua Stokes (RVS). 80% ethanol or water extracts were screened for their inhibitory activities against elastase. Elastase inhibition effect was tested by microplate reader instrument. And MMP-1 suppression effect of RVS was tested by western blot. These cells were investigated the viability by MTS assay. And also the inhibition effect of tyrosinase by RVS was tested.Results : RVS (final concentrstion 1 ㎎/㎖ appeared over 30% of inhibition of elastase activity. So we are investigated anti wrinkle effects of Rhus verniciflua Stokes look through MMP-1 inhibition activity, also Extracts of RVS showed higher anti-tyrosinase activity than arbutin as final concentration 1 mg/ml. These results suggest that herbal medicines could be strong potential sources of inhibition of anti-aging and whitening effects for the skin.Colclusions : RVS was the best suppressor candidate of elastase activity among other control oriental drugs. It was found that RVS did not have toxicity to cells. We found proper concentration of RVS to treat in HS68 culture and investigated not only wrinkle care effect but also whitening effect of RVS.
Coumaroyl dipeptide amide, Coumaric acid-LG-$NH_2$, was prepared successfully using the solid-phase method, and its efficacy as a skin whitening agent was studied. Coumaric acid-LG-$NH_2$ was prepared with Rink-amide resin, and 96.354% of purity was obtained. Using MTT assay and LDH release assay, we found that it exhibited very low cytotoxicity. And, we found that Coumaric acid-LG-$NH_2$ inhibited tyrosinase activity dose-dependently and showed superior tyrosinase inhibitory activity to well-known whitening agent, arbutin. $IC_{50}$ value of Coumaric acid-LG-$NH_2$ was 182.4 ${\mu}M$, and $IC_{50}$ value of arbutin was 384.6 ${\mu}M$. Also, in measurement of melanin contents using B16F1 melanoma cell lines, Coumaric acid-LG-$NH_2$ reduced melanin production induced by ${\alpha}$-MSH statistically significant, and showed superior melanin inhibitory activity to p-coumaric acid or arbutin. In addition, Coumaric acid-LG-$NH_2$ reduced MC1R mRNA expression level. Thus, we concluded that MC1R pathway is the significant pathway of Coumaric acid-LG-$NH_2$, and Coumaric acid-LG-$NH_2$ has great potential to be used as novel whitening agents.
천연물인 후박(Magnolia obovata Bark, M. obovata Bark)을 에탄올 추출 및 농축하여 에틸아세테이트 층으로 분획한 분획물이 피부에 안전하고 효과적인 미백 활성을 확인함으로써 미백 화장품 원료 소재로서 가능성을 확인하였다. 후박의 에탄올 농축물을 에틸아세테이트 분획하여 유효물질 honokiol을 HPLC로 정량하였다. 후박 에틸아세테이트 분획물에 대한 in vitro 미백활성 결과, 농도 의존적으로 세포 외 멜라닌 분비를 감소시켜 $IC_{50}=11.05{\mu}g/mL$임을 확인하였다. 또한 세포에 독성을 가지지 않는 최대농도인 $12.5{\mu}g/mL$ 처리 시 최대 약 60%의 멜라닌 분비 억제로 세포 외로 분비되는 멜라닌의 양을 효과적으로 억제함을 확인할 수 있었다. 또한 ${\alpha}-MSH$ (50 nM) 처리한 그룹과 비교하여 $IC_{50}=10.85{\mu}g/mL$로 우수한 세포 내 멜라닌 생성억제 효과를 보였으며 세포에 자극이 되지 않는 최대농도인 $12.5{\mu}g/mL$ 처리 시 최대 약 59%의 멜라닌 생성 억제를 확인하여 세포 외 멜라닌 분비 뿐만 아니라 세포 내에 존재하는 멜라닌의 양 또한 효과적으로 억제함을 확인할 수 있었다. 양성대조군으로 사용된 ${\alpha}-arbutin$의 경우, $IC_{50}=59.99{\mu}g/mL$로 후박 에틸아세테이트 분획물이 양성대조군 ${\alpha}-arbutin$과 비교하여 우수한 세포 내 멜라닌 생성 억제 효과를 가짐을 확인하였다. 임상연구의 경우, 후박 에틸아세테이트 분획물을 적용한 화장품 크림은 (주)대한피부과학연구소(KDRI) 윤리위원회의 IRB 승인(KDRI-IRB-1536) 후 반복 첩포를 통한 인체 누적첩포시험을 진행하여 무감작 물질로 확인하였다. 또한 후박 에틸아세테이트 분획물을 적용한 화장품 크림은 대조군 대비 국소적 미백효과와 신뢰성 있는 피부 안전성을 보여주었다. 최종적으로 후박 에틸아세테이트 분획물이 안전하고 효과적인 미백효과를 가지는 화장품 소재로 충분한 이용 가능성이 있음을 확인하였다.
To develop a whitening agent, cytotoxicity of the soluble collagen isolated from Todarodes pacificus (CIT) was evaluated. CIT tested for cytotoxicity on human dermal fibroblast (CCD-986sk) was exhibited very low cytotoxicity. Because tyrosinase is the key enzyme for melanin biosynthesis, the use of various tyrosinase inhibitors is a common practice for whitening purpose in cosmetics. Tyrosinase inhibitory activity and melanin production assay were measured to confirm the whitening effect. The inhibitory effect of MMP-1 in UV-irradiated human dermal fibroblast was also performed. CIT showed strong inhibition potency on tyrosinase by 51.5% at 0.2 mg/mL which increased the inhibition by increasing the concentration of CIT, and showed 69.1% inhibition at 1.0 mg/mL. CIT showed strong inhibition effect on melanin production with 82% at 1.0 mg/mL. The CIT also reduced about 76% expression of MMP-1 in UV-irradiated CCD-986sk cell at 1.0 mg/mL. From the preliminary observations, we suggest that the collagen isolated from CIT could be a potential source of natural skin-whitening and anti-aging agents for the photo-damaged skin.
전세계적으로 천연화장품에 대한 관심과 수요가 크게 늘어나고 있다. 따라서 기존 화학합성 기능성화장품소재를 대체하기 위한 노력의 일환으로서 천연물에서 기능성화장품소재를 발굴하고자 하였다. 모자반은 우리나라의 해안 전지역에서 쉽게 볼 수 있는 갈조류의 일종으로서 식용으로도 이용되는 만큼 안전성이 확보되어있는 해조류이다. 본 연구에서는 큰잎 모자반(Sargassum coreanum). 짝잎 모자반(Sargassum hemiphyllum), 쌍발이 모자반(Sargassum patens)의 3가지 종류의 모자반으로부터 열수를 이용하여 유효성분을 추출하였으며, 항산화효과, 미백효과, 주름개선효과, 자외선흡수효과 및 항염증효과를 측정하여 기능성 화장품 소재로서의 응용 가능성을 살펴보고자 하였다. 모자반추출물은 세포독성시험결과 안전성이 매우 우수하였고, DPPH radical scavenging activity를 이용한 항산화능 측정결과 우수한 항산화능을 보여주었으며 tyrosinase inhibition을 이용한 미백효과시험에서는 큰잎 모자반(Sargassum coreanum)의 미백효과가 상당히 우수하였다. 그러나 주름개선효과, 자외선흡수효과와 항염증효과는 비교적 낮았다. 결론적으로 큰잎 모자반(Sargassum coreanum)은 세포독성이 적었고, 항산화효과와 미백효과가 우수하여 미백 기능성화장품소재로서 응용가능성이 높음을 알 수 있었다.
The aims of this study are to search herbal medicines that have anti-aging, anti-wrinkle, anti-oxidant and whitening effects. This is preliminary study as a finding for excellent and specific natural agents which inhibit the skin aging and whitening formation. In this study, the articles and the documents, which have been published in domestically or internationally, have been searched and analyzed. Articles were gathered by taking advantage of Society of Cosmetic Scientists of Korea's documents, Pub med database, Korean Medical Database and Korean Studies Information Service System. Among the many species of herbal medicines, we selected the herbal medicines showing superoxide scavenging activities, and 1.1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH) scavenging effects. The herbal medicines were showed anti-wrinkle effects on Metrixmetallo proteinase (MMP-1) inhibition activity and elastase inhibition activity. Also we found herbal medicines that have highly effect of tyrosinase inhibition, L- DOPA inhibition and melanin synthesis inhibition.
human tyrosinase (hTyr) catalyzes first and the rate limiting step in the synthesis of polymerized pigment, melanin which determines skin, hair and eye colors. Mutation of hTyr often brings about decrease of melanin production and further albinism. Meanwhile, a number of cosmetic companies providing skincare products for woman in Asia-Pacific region have tried to develop inhibitors to bright skin color for several decades. In this study, we built a 3D structure by comparative modeling technique based on the crystal structure of tyrosinase from bacillus megaterium as a template to serve structural information of hTyr. According to our model and sequence analysis of type 3 copper protein family proteins, two copper atoms of active site located deep inside are coordinated with six strictly conserved histidine residues coming from four-helix-bundle. Cavity which accommodates substrates was like funnel shape of which entrance was wide and expose to solvent. In addition, protein-substrate and protein-inhibitor complex were modeled with the guide of van der waals surface generated by in house software. Our model suggested that only phenol group or its analogs can fill the binding site near nuclear copper center because inside of binding site has narrow shape relatively. In conclusion, the results of this study may provide helpful information for designing and screening new anti-melanogensis agents.
최근까지 Chromameter$^{(R)}$ CR-400, Mexameter$^{(R)}$ M18 그리고 육안평가는 피부색 평가를 위한 주된 평가방법으로 이용되어 왔다. 하지만 본 연구를 통해 피부색의 변화를 평가할 수 있는 객관성 있는 평가방법으로 이미지 분석을 제안하고자 한다. 본 연구에서는 세 가지의 기존 평가방법의 변수들과 이미지 분석을 통해 얻은 V (Value) 값을 이용하여 미백 인체 효능평가를 수행하고 변수들 사이의 상관성을 분석하여 이미지 분석의 신뢰성을 확보하고자 하였다. 효능 평가를 위해 과색소침착으로 고민하는 34명의 시험 대상자를 모집하였고 선정된 시험 대상자들은 8주간의 시험기간 동안 vitamin C가 함유된 5 종류의 미백 화장품을 사용하는 동시에 일주일에 1회 전기이온영동(iontophoresis) 시술을 받았다. 제품 사용 및 시술 전과 8주 후 기존 평가 변수들과 V 값 측정결과를 비교하고 각 변수들 사이의 상관성을 분석한 결과, 제품 사용 및 시술 8주 후 V 값은 Chromameter$^{(R)}$의 $L^*$ 값의 경향과 유사하게 증가하였으며, $L^*$ 값과는 양의 상관관계를 보이는 것을 확인하였다(r = 0.494, p < 0.01). 또한, Mexameter$^{(R)}$의 MI 값(r = - 0.683, p < 0.01)과 육안평가 측정 값(r = - 0.549, p < 0.01)은 V 값과 음의 상관관계를 나타내었다. 따라서 이미지 분석의 V 값의 활용은 기존의 평가방법과 더불어 주관적인 육안평가의 한계를 보완할 수 있는 신뢰성 있는 미백평가 방법의 하나라고 생각된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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