• 한국잠사곤충학회지
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• 제53권1호
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• pp.55-60
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• 2015

본 연구의 목적은 누에형질전환 기술을 이용하여 누에체액에서 melittin 항균펩타이드를 생산하는 것으로서, 본 실험에서는 누에유래의 액틴3 프로모터를 이용하여 melittin 항균펩타이드를 발현시켰다. 누에형질전환체 선발을 위해서는 3xP3 promoter와 EGFP 유전자를 이용하여 선발하였고, 300개의 누에알에 microinjection 하여 F1 세대에서 11 bloods의 누에형질전환체를 선발하였다. 선발된 누에형질전환체는 초기배 단계의 눈과 신경조직, 유충과 번데기 그리고 성충의 눈에서 EGFP 형광단백질이 발현되는 것을 확인할 수 있었다. 또한 G2 세대 누에형질전환체를 5령 5일 유충까지 사육 후, 체액을 채취한 후 전처리 하였다. 이 시료를 항균활성검정을 하였고, 총 10마리의 누에를 선발할 수 있었다. 이렇게 선발 된 누에는 서로 교배를 통해서 계대사육을 하였다. 이러한 과정으로 선발된 G3세대 누에형질전환체를 이용하여 앞의 과정과 동일한 방법으로 항균할성을 검정하였다. 그 결과 대조군으로 사용된 시그마사의 melittin(0.016 mg/ml)과 거의 동일한 항균활성을 나타내었다. 이상의 결과에서 melittin 항균펩타이드를 생산하는 누에형질전환체가 성공적으로 제작되었음을 확인할 수 있었다.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제52권1호
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• pp.25-32
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• 2014

본 연구의 목적은 누에형질전환 기술과 피브로인 재조합단백질 발현시스템을 이용하여 청색형광실크를 개발하는 것으로서, 본 실험에서는 피브로인 H-chain의 N-말단과 C-말단을 이용하여 피브로인 재조합단백질 발현 시스템을 제작하였고, 종결코돈이 없는 EBFP 유전자를 위의 발현 시스템에 클로닝하여 청색형광실크를 제작하였다. 누에형질전환체 선발을 위해서는 $3{\times}P3$ promoter와 DsRed2를 이용하여 선발하였고, 300개의 누에알에 microinjection하여 F1 세대에서 5 bloods의 형질전환체를 선발하였다. 선발된 누에형질전환체는 초기배 단계의 눈과 신경조직, 유충과 번데기 그리고 성충의 눈에서 DsRed2 형광단백질이 발현되는 것을 확인할 수 있었다. 또한 실크의 피브로인에서 EGFP 단백질이 발현되는 것을 확인하기 위해, F2 세대의 누에형질전환체 중에서 5령 3일 유충을 해부하여 견사선을 형광현미경으로 관찰하였고, 중부 견사선에서 청색형광단백질이 발현되는 것을 확인할 수 있었다. 또한 F2 세대의 고치와 저온에서 정련한 실크에서도 청색형광단백질의 발현을 확인할 수 있었고, Western blot 분석에서도 EBFP 재조합 단백질이 피브로인 H-chain과 융합된 형태로 존재하는 것이 확인되었다. 이상의 결과에서 청색형광실크를 생산하는 누에형질전환체가 성공적으로 제작되었음을 확인할 수 있었고 이러한 결과를 토대로 새로운 산업소재로서 실크를 활용할 수 있을 것으로 기대한다.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제51권2호
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• pp.191-196
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• 2013

본 연구는 누에 수정란 초기에 발현하는 유전자를 대량 선발하고, 유용 유전자의 프로모터를 개발하기 위한 연구의 일환으로 추진하였다. 산란 후 2 ~ 16시간이 경과한 누에알로부터 cDNA 유전자은행을 제작하였다. 제작된 cDNA 유전자은행으로 전체 960개 클론을 무작위 추출하여 부분 염기서열 분석을 통해 EST를 제작하였다. 분석된 652개 ESTs 중 염기서열 상동성 분석을 통해 156개의 기존 알려진 유전자와 178개의 미지의 유전자로 구성된 334개 독립유전자를 최종 선발하여 'eegEST'로 명명하였다. eegEST 분석 결과, 기존 염기서열 정보가 알려진 156개 독립유전자 중 2회 이상 출현한 유전자 수는 143개로 전체의 34%를 차지하였으며, Hsp20.8 유전자(12회)와 ubiqutin-like 유전자(11회)가 가장 높은 출현 빈도를 나타내었다. 또한 eegEST 독립유전자의 추정 기능에 따른 분류에서 곤충 수정란 발생초기에 확인할 수 있는 기관 형성과 관련한 유전자가 전체 24%를 차지하고 있었다. 본 연구에서 작성된 누에 수정란 초기 발현유전자 데이터베이스(eegEST)는 곤충 발생학 연구를 위한 정보제공 뿐 아니라 형질전환누에 제작을 위한 프로모터 개발 연구에 활용될 수 있을 것으로 기대한다.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제50권2호
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• pp.87-92
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• 2012

본 연구의 목적은 누에형질전환 기술을 이용하여 적색형광실크를 개발하는 것으로서, 본 실험에서는 피브로인 H-chain의 N-말단과 C-말단을 이용하여 피브로인 재조합 단백질 발현 시스템을 제작하였고, 종결 코돈이 없는 DsRed2 유전자를 위의 발현 시스템에 클로닝하여 적색형광실크를 제작하였다. 누에형질전환체 선발을 위해서는 3xP3 promoter와 EGFP 유전자를 이용하여 선발하였고, 1020개의 누에알에 microinjection 하여 F1 세대에서 6 broods의 형질전환체를 선발하였다. 선발된 누에형질전환체는 초기배 단계의 눈과 신경조직, 유충과 번데기 그리고 성충의 눈에서 EGFP 형광단백질이 발현되는 것을 확인 할 수 있었다. 또한 실크의 피브로인에서 DsRed2 단백질이 발현되는 것을 확인하기 위해, F2세대의 누에형질전환체 중에서 5령 5일 유충을 해부하여 견사선을 형광현미경으로 관찰하였고, 중부와 후부 견사선에서 적색형광단백질이 발현되는 것을 확인 할 수 있었고, F2 세대의 고치에서도 적색형광단백질의 발현을 확인할 수 있었다. 이상의 결과에서 적색형광실크를 생산하는 누에형질전환체가 성공적으로 제작되었음을 확인할 수 있었고 이러한 결과를 토대로 새로운 산업소재로서 실크를 활용할 수 있을 것으로 기대한다.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제8권
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• pp.41-50
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• 1968

산견능률을 향상시키기 위해서는 불결견잠을 방제하는 일이 급선무라 할 수 있다. 그러므로 누에를 생리해부학적인 면에서 그 출현기구를 분석구명하여 이의 방제책을 한 자료로 삼으려 한 것이며 조사 연구내용을 요약하면 다음과 같다. 1. 견사선에 이상이 없음에도 영견치 않는 누에의 토계부부근의 조직을 검사한 결과 토계관의 기부에 와 있는 신경, 기관 및 근육 등에서 다각체를 발견하였다. 2. 불토사잠중에서 농병에 의하는 것이 차지하는 비율이 상당히 높았다. 3. 5령의 누에에 향식 당일부터 8시간에 걸쳐 농즙을 접종한 결과 결견잠수에 있어서 접종이 늦을수록 많고 불결견잠수는 접종초기와 중기에 있어서는 큰 차가 없었지만 후기에 이르러 감소하는 경향이 있고 사육 및 족중폐잠수는 접종시기가 빠를수록 많았다. 4. 농병의 증세는 농즙 접종후 약 3일전후하여 농잠으로서의 특징을 나타내기 시작하였다. 그리고 농병잠이라하여도 영견능력이 있는 것은 상족직전에 접종된 것 중에서 영견개시후 발병되기 때문에 도중에서 토계불능케 되어 박피 또는 중피견 밖에 영견할 수 없는 것이고 또한 경도의 농병잠은 토계기능의 마비상태가 토계불능까지는 되지 않는 것으로 인정되였다. 5. 원종 교잡종을 합하여 44품종에 걸친 불결견잠 출현경향을 조사한 결과 교잡종에 비하여 원종이 불결견잠의 수가 많았고 원종에서도 일본종계통이 많았다. 6. 불결견잠의 견사선에 있어서는 중부계선에 파동이 많았다. 7. 정상숙잠과 농병불결견잠의 잠체 및 소화기의 크기를 비교한 결과 길이에 있어서는 큰 차 없지만 체건-동체 둘레 및 소화기의 나비에 있어서는 농병불결견잠의 것이 훨씬 컸다. 8. 5령 성식기에 낙하충격을 가한 결과 두부하위낙하보다는 경면하위낙하의 것이 또는 온돌과 마루바닥보다는 시멘트바닥에 낙하된 것이 충격이 컸다.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제13권1호
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• pp.23-29
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• 1971

가잠난을 대상으로 하고 시료조건을 Part 1에서는 갑배자에서부터 최청시키면서 부화직전에 이르기까지 Ascorbic acid와 Lipids (triglyceride 와 cholesterol) 및 free fatty acid를 분석하고 Part 2에서는 시료의 일부를 병$_{B}$ 시기에 방사선 800${\gamma}$에서 40분간 조사시킨 후 표준구와 같은 조건에서 최청하면서 glucose와 phosphorus를 분석, 비교 검토하는 동시에 이상의 각종 내용물질의 변동을 생화학적으로 분석한 결과 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. Ascorbic acid는 병$_{B}$ 배자에서 319.5${\gamma}$/g으로 가장 많았고 그 후부화전까지 감소해 감을 알 수 있었다. 2. Triglyceride는 병$_{A}$ 배자에서 27.54mg/g으로 난내세포가 활성화되는 시기에 가장 많았고 그 후 배자가 발육함에 따라 점차적으로 감소하였으며 Total Cholesterol이나 Free Cholesterol은 최청초기부터 부화직전까지 큰 변동이 없음을 확인하였다. 3. Free Fatty acid 는 Triglyceride가 가장 증가한 병$_{A}$ 에서 257.4$\mu$ mole/g으로 최소량을 나타냈고 반대로 감소되는 己A에서 1,020$\mu$ mole/g로 증가함을 알 수 있었고 전반적으로 보아 배자가 발육함에 따라 증가되는 결과를 얻었다. 4. Glucose는 표준구 점청기 281.2mg/g으로 가장 많은 증가를 보이고 방사선 조사구에서도 같은 시기 179.6mg/g으로 최고를 나타내어 동일한 경향을 보이나 양적으로 ${\gamma}$-Ray 처리구가 적다는 것과 Free Fatty acid 및 Phosphorus와의 상반된 변동을 알 수 있었다. 5. 표준구에서 Organic phosphorus는 병에서 5.23mg/g이었고 ${\gamma}$-Ray 처리구는 己A에서 5.73mg/g으로 가장 많은 양을 나타내고 Inorganic phosphorus에서는 약간의 변동이 있을 뿐이다. 방사선 처리구는 Organic phosphorus와 Inoranic phosphorus는 다 같이 최청초기에는 적으나 己A 이후는 급격히 증가하여 부화직전에 이르기까지 표준구보다 많았음을 알 수 있다. 이상과 같은 결과를 얻은 것은 금후 잠종의 취급 보존에 크게 밑 받침 될 것으로 생각된다.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제24권2호
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• pp.55-72
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• 1983

가잠의 휴면성을 난각의 조직학적 특성을 보고자 난각층에 대한 전자현미경상을 관찰하였고 또한 난각의 물리화학적 특성에 대해서는 수분투과성, 염산투과성, 염색성 및 난각 구조단백질을 조사한 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 난각구조를 전자현미경으로 보면 뚜렷이 4층으로 되어 있으며, 또한 휴면난과 비휴면난 및 즉침난 사이에 구조적인 차이가 보인다. 즉 외층 밖에 또 다른 전자밀도가 낮은 얇은 층이 휴면난에는 존재하고 있으나 비휴면 및 즉침난에는 이 층을 볼 수 없다. 2. 산난후 20∼24시간째의 휴면난과 비휴면난 및 즉침난 사이에 난각염산투과성의 차이를 보면 휴면난에 비해 즉침난 및 비휴면난이 모두 투과성이 높았고 또한 난령이 지남에 따라 휴면난은 투과성이 떨어지는데 반하여 즉침난 및 비휴면난은 투과성이 높아졌다. 3. 휴면난의 ether 처리난은 무처리난에 비해 난각의 투과성이 변하는 것으로 보아 난각물질 중 ether 용출물이 존재한다. 4. 난각의 수분투과성도 염산투과성에 있어서와 같이 휴면난이 즉침난 및 비휴면난에 비해 수분투과성이 낮았다. 5. 가잠난각의 조직화학적 특성은 단백질과 당에 대한 염색성이 높아 난각에는 단백질과 당이 풍부하며 특히 지질에 대한 염색성은 거의 음성이나 내층으로 갈수록 진하게 염색되었다. 6. 누에의 난각점착물은 PAS-alcian 반응으로 보아 mucopolysaccharides이다. 7. 난각 구조단백질 중 SH단백질에 대한 전기영동상에 있어서 휴면난과 비휴면난 모두 2개의 band가 인정되나 비휴면난의 경우 이동거리가 빠른 band는 매우 흔적적이며 또한 영동거리도 원점으로부터 멀리 이동하여 두 처리간에 minor component에 차이가 보였다. 8. SH단백질에 대한 아미노산조성에 있어서는 휴면난 및 비휴면난 사이에 큰 차이를 인정할 수 없었고 난각단백질중 SH단백질의 구성아미노산에는 glycine이 가장 많고 cystine함량은 적었다. SI K-2 는 Penicillin, Ampicillin과 Cephalothin에 저항성을 나타냈고 ts-U171, A-N92와 A-N115는 이 세항생제에 민감성을 나타냈다. Temperature - sensitive돌연변이균주를 42$^{\circ}C$에서 24시간 배양후에 28$^{\circ}C$로 옮기어 배양한 결과 ts-U601, -U603, -U604와 -U171은 성장을 더 이상하지 않았다.ta-exotoxin을 생산했는데, 48시간 배양 배지 $m\ell$당 70$\mu\textrm{g}$을 분비한 균주는 BTK-1이고, BTK-37 균주는 $m\ell$당 88$\mu\textrm{g}$(6.1$\times$$10^{8}$ Cells/$m\ell$) BTK-35 균주는 $m\ell$당 81$\mu\textrm{g}$(5.2$\times$$10^{8}$ Cells/$m\ell$)을 생산했고. 그외는 모두 70$\mu\textrm{g}$미만이었다. 3. Beta-exotoxin과 B. thuringiensis 균체을 동시에 per os, interaperitoneal injection, subcuntaneous injection, nasal cavity inoculation, intracerebral injection을 120시간 처리했어도 치사효과를 나타내지 않았다.삼각호마법 and Japan#s 병음한자변환방식 have prospect to be prevalent. The following suggestions can be made from these results, 1) All the

• 한국잠사곤충학회지
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• 제30권2호
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• pp.96-104
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• 1988

누에 난황단백질의 주성분인 난황소(vitellin)를 분리하고 그 면역반응적 특성과 난소 이식과의 관계 및 배발생중의 양적 변화를 조사한 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 누에의 용혈액 vitellogenin과 난황소는 원심분리에 이은 DEAE-cellulose column chromatography에 의해 거의 순수하게 분리되었으며 두 단백질의 polyacrylamide gel 전기영동상의 이동도는 같았다. 2. 누에의 난황소와 이의 전구물질인 용혈림프 vitellogenin은 면역반응적으로 서로 동질임이 확인되었고, 가잠의 근록곤충인 상잠(Bombyx mandarina)의 난황단백질에는 가잠의 난황소와 면역학적으로 같은 반응을 나타낸 항원이 있는 반면, 천잠(Antheraea yamamai)의 난황단백질에는 가잠과의 공통항원이 없었다. 3. 수누에에 이식한 난소에서 생성된 난황단백질에는 난황소가 결여됨이 확인되어 난황소의 합성에는 난소이외의 다른 암컷 기관에서 생성된 전구물질이 필요함을 나타내었다. 4. 배발생중의 난황소는 배자발육 후기에 주로 기관의 형성에 이용되어 배자발육 초기부터 꾸준하게 이용되는 난특이단백질(ESP)과는 이용상 다른 특성을 보였다.

• International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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• 제26권1호
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• pp.31-40
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• 2013

Paralytic peptide binding proteins (PP-BP) are 30KP proteins that show similarity to ENF binding proteins. The ENF-BP act as active regulators of ENF peptides. ENF peptides are multifunctional insect cytokines. The comparison of gene expression in diapause induced and non-diapause eggs at different time intervals after oviposition showed an upregulation of PP at 18h as well as PP-BP at 12 and 18h after oviposition along with few other genes. The current study has been taken up to investigate the role of PP as well as PP-BP in diapause induction in polyvoltine silkworms and to study the multigene organization of PP-BP in the Bombyx mori genome. The tissue specific expression analysis revealed that, PP-BP is highly expressed in fat body followed by egg and brain while no expression was observed in midgut. The expression levels of PP and PP-BP in diapause and non-diapause eggs from 0h to 48h after oviposition, validated through realtime PCR revealed that PP is highly expressed at 18 and 24h while PP-BP expression is higher at 12 and 18h time intervals suggesting their possible role in diapause induction. The whole genome survey of the PP-BP paralogous sequences revealed a total of 46 B. mori PP-BP homologs that are classified into 3 categories viz., ENF-BP, Typical 30KPs and serine/threonine rich 30KPs. These paralogous sequences are distributed on chromosomes 7, 20, 22 and 24, all 30KP and S/T rich 30KP proteins are present in the same locus of chromosome 20.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제18권2호
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• pp.1-60
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• 1976

본 연구에서는 전자현미경과 Radioautography에 의하여 가잠의 휴면 기구를 연구하였다. 1. 가잠의 휴면성은 최청중의 온도와 명장에 의하여 변하기 쉬운 것으로서 특히 배자의 후기와 관계가 깊다는 사실은 잘 알려저 있다. 그러므로 저온과 고온최청의 경우 가잠의 배자 발생 단계중에 있어서 핵산과 단백질의 전구물질을 사용하여 합성의 Pattern을 조사하였다. 고온최청 때에는 반전후 3일째에 $^3$H-glycine이 배자의 뇌와 식도하신경구에 다량으로 들어가 있는 동시에 타부위에도 약간이나마 들어가 있었다. 그러나 저온최청 때에는 뇌와 식도하신 경구 그리고 타부위 사이에 차이가 없었다. 고온과 저온과의 사이에는 배자의 DNA 합성의 차리를 인정할 수 없었다. 산난후 20일째의 휴면난에 있어서는 소수의 중배엽세포의 핵에 들어가 있었으나 월연한 잠난에 있어서는 중배엽의 전핵에 들어가 있었다. 고온과 저온최청때에 반전후의 배자의 전부 즉 뇌와 식도하신경구의 주위에만 $^3$H-thymidine이 들어가 있는 것을 볼 수 있었으나 후부에서는 전혀 볼 수 없었다. 한편 전 최청기간중 또는 산난후 20일째의 난황세포에 있어서는 단백질합성과 나NA 합성을 인정하지 못하였으나 월년난 배자의 부속지 발생전까지는 RNA합성이 관찰되었다.