Tezias, Sotirios S.;Tsiftsoglou, Asterios S.;Amanatiadou, Elsa P.;Vizirianakis, Ioannis S.
BMB Reports
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제45권2호
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pp.126-131
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2012
We have previously identified a DNA silent region located downstream of the 3'-end of the ${\beta}^{major}$ globin gene (designated B1-559) that contains a B1 retrotransposon, consensus binding sites for erythroid specific transcription factors and shares the capacity to act as promoter in hematopoietic cells interacting with ${\beta}$-globin gene LCR sequences in vitro. In this study, we have cloned four new non-polyA RNA transcripts being detected upon blockade of murine erythroleukemia (MEL) cell differentiation to erythroid maturation by methylation inhibitors and demonstrated that two of them share high structural homology with sequences of B1 element found within the B1-559 region. Although it is not clear yet whether and how these RNAs interfere with induction of erythroid maturation, these data provide evidence for the first time showing that methylation inhibitors can activate silent repetitive DNA sequences in MEL cells and may have implications in cancer chemotherapy using demethylating drugs as antineoplastic agents.
DW-116 is a new fluoroquinolone antimicrobial agent with a broad spectrum. In order to elucidate the resistance mechanism to DW-116 in Acinetobacter spp. bacteria, total chromosomal DNA was isolated from 10 strains of Acinetobacter spp. resistant to DW-116. Quinolone resistance determinant region (QRDR) of DNA gyrase gene was amplified by PCR. The 345 bp nucleotide fragment yielded was inserted into pKF 3 which was used as the vector. Comparisons of the DNA sequences of 8 strains with that of the wild type strain revealed a Ser-83 to Leu mutation in mutants and all ten strains contained one silent mutation$(T{\rightarrow}G)$in QRDR. From Acinetobacter MB4-8 strain, DNA gyrase was isolated and purified, through novobiocin-sepharose, heparin-sepharose affinity column chromatography. The enzyme was composed of two subunits and the molecular mass of subunits A and B were 75.6 and 51.9 kDa, respectively. The supercoiling activity of the reconstituted DNA gyrase composed of subunit A from Acinetobacter MB4-8 and subunit B from E. coli was not inhibited by $128{\mu}\textrm{g}$ml of ciprofloxacin. It might be said that one of the resistance mechanisms to DW-116 in Acinetohacter MB4-8 was subunit A alteration of DNA gyrase.
본 연구는 mtDNA cytochrome b (cyt b) 유전자의 염기변이를 동정하고 이를 토대로 백한우의 계통유전학적 유연관계를 파악하기 위하여 실시하였다. 백한우 14두에 대한 mtDNA cyt b 유전자 전체서열 내에서 염기의 삽입/결실변이 없이 1개의 silent mutation이 동정되었고, 2개의 haplotype으로 분류되었다. 14두 중 13두가 major haplotype인 H1에 포함되었으며, 나머지 1두는 칡소와 같은 haplotype에 속하였다. Haplotype 다양성지수 및 염기변이율은 각각 0.143, 0.00013으로, 기존에 보고된 한국 재래소 및 중국소 품종들보다 현저히 낮게 나타났다. 한국, 일본, 중국 및 유럽 소 품종과의 유전적 유연관계를 확인하기 위해서 Dxy 유전거리 산출 및 neighbor-joining tree를 작성하였다. 2개의 group (A, B)으로 분류되었으며, 백한우는 B. taurus 계열인 A group에 포함되었다. Dxy유전거리 산출 결과, 백한우는 흑우(0.00018) 및 Yanbian (0.00021) 품종과 가까운 유연관계를 보였다. 이상의 결과를 종합해보면, 모계유전특성에 기초하여 백한우는 칡소, 흑우 및 Yanbian과 유전적으로 높은 연관성을 보였다. 이러한 결과는 백한우의 효율적인 관리 및 지속가능한 활용을 위한 중요한 자료로 이용될 수 있을 것으로 사료된다.
인간 내인성 레트로 바이러스는 약 3~4 천만 년 전 인간게놈에 통합되기 시작했던 화석바이러스로서 인간게놈의 약 8%를 구성하고 있다. 이러한 고대의 레트로 바이러스는 연속된 유전자변이로 인해 본래의 기능을 잃게 됨으로써 "쓸모없는 DNA (junk DNA)"로 여겨져 왔다. 그러나 최근 연구는 모든 인간 내인성 레트로 바이러스가 단지 침묵을 지키는 승객만이 아님을 보여준다. 현재까지는 이들 바이러스가 인간 질병의 직접 원인이 된다는 것은 밝혀지지 않았으나, 다발성 경화증, 정신 분열증 및 근 위축성 측삭경화증을 포함한 신경학적 장애와 인간면 역결핍바이러스 (HIV)나 헤르페스 등의 바이러스 감염, 여러 유형의 암과 같은 질환을 가진 환자에서 인간 내인성 레트로 바이러스의 DNA가 과도발현 됨을 보여주는 연구들이 다양하게 이루어지고 있다. 이 리뷰논문은 신경학적 질환에 대한 인간 내인성 레트로 바이러스의 가능한 관련여부를 다루고 있다.
본 논문에서는 DNA 시퀀스의 불법 복제 및 변이 방지와 개인 정보 침해 방지, 또는 인증을 위한 DNA 워터마킹에 대하여 논의하며, 변이에 강인하고 아미노산 보존성을 가지는 부호영역 DNA 시퀀스 기반 DNA 워터마킹 기법을 제안한다. 제안한 DNA 워터마킹은 부호 영역의 코돈 서열에서 정규 특이점에 해당되는 코돈들을 삽입 대상으로 선택되며, 워터마크된 코돈이 원본 코돈과 동일한 아미노산으로 번역되도록 워터마크가 삽입된다. DNA 염기 서열은 4개의 문자 {A,G,C,T}로 (RNA은 {A,C,G,U}) 구성된 문자열이다. 제안한 방법에서는 워터마킹 신호처리에 적합한 코돈 부호 테이블을 설계하였으며, 이 테이블에 따라 코돈 서열들을 정수열로 변환한 다음 원형 각도 형태의 실수열로 재변환한다. 여기서 코돈은 3개의 염기들로 구성되며, 64개의 코돈들은 20개의 아미노산으로 번역된다. 선택된 코돈들은 아미노산 보존성을 가지는 원형 각도 실수 범위 내에서 인접 코돈과의 원형 거리차 기준으로 워터마크에 따라 변경된다. HEXA와 ANG 시퀀스를 이용한 $in$$silico$ 실험을 통하여 제안한 방법이 기존 방법에 비하여 아미노산 보존성을 가지면서 침묵 변이와 미스센스 변이에 보다 강인함을 확인하였다.
Susceptibility to chronic wasting disease (CWD) in cervid species has been associated with polymorphisms in the prion protein gene (PRNP). The single nucleotide polymorphisms (SNPs) were found in the PRNP of the Korean subspecies of Chinese water deer via analyses of the DNA sequences obtained from 34 individual deer. Two SNPs were detected at codons 77 and 100. One SNP at codon 77 encoding Glycine was determined to be a silent mutation but the other SNP detected at codon 100 induced an amino acid change, from Asparagine to Serine. The prion protein (PrP) amino acid sequence of the water deer showed 98.8-99.2% homology with those of American elk, white-tailed deer and mule deer. The PrP of the water deer contained amino acid residues closely related with CWD-susceptibility. This study is the first to describe genetic variations in the PRNP of the Korean subspecies of Chinese water deer.
본 연구는 mtDNA cytochrome b (Cyt b) 유전자 서열을 토대로 한국흑우의 유전적 다양성 및 계통유전학적 위치를 파악하기 위하여 실시하였다. 한국흑우 38두로부터 결정된 mtDNA Cyt b 유전자 전체서열 내에서 염기삽입 및 결실 없이 1개의 silent mutation이 동정되었다. 또한 2개의 haplotype으로 분류되었고, 염기변이율 및 haplotype 다양성지수에 기초한 한국흑우의 유전적 다양성은 기존에 보고된 중국 품종에 비해 낮게 나타났다. 한국, 일본, 중국에 분포하고 있는 12품종 101개 서열을 수집하여 한국흑우와의 유연관계를 확인하였다. 한국흑우에서 분류된 2개의 haplotype은 모두 B. taurus 계열에 포함되었으며, 한우, 일본흑우, Yanbian, Zaosheng 등 4개 품종과 하나의 그룹을 형성하였다. 또한 품종별 Dxy 유전거리 산출 결과, 한국흑우는 한우 및 일본흑우에 비해서 중국의 Yanbian, Zaosheng 품종과 더 가까운 유연관계를 보였다. 본 연구의 결과는 가축유전자원으로서 한국흑우의 보존 및 유전적 특성 구명을 위한 중요한 자료로 활용이 가능할 것으로 사료된다.
We determined the sequences of the quinolone resistance-determining region (QRDR) of gyrA and gyrB for 21 clinical strains of Enterobacteriaceae resistant to ciprofloxacin, norfloxacin and levofloxacin. The clinical strains were isolated from the specimens of three general hospitals in Busan. In the present study, we found mutations in type II topoisomerase (DNA gyrase) genes for all strains. We confirmed that some genera of Enterobacteriaceae of clinical specimen exhibited decreased sensitivity to fluroquinolone due to changes in Ser-83$\rightarrow$Leu and Asp-87$\rightarrow$Asn types on gyrA and alterations in Glu-465$\rightarrow$Arg and Ser-492$\rightarrow$Asn type on gyrB. All the twenty-one strains had a missense mutation in gyrA (codon 83 and 87). Three of them had an additional mutation in gyrB (codon 465 or 492), but one of them had an additional mutation in gyrB (codon 426, 427, 491, 495 and 496). The strains which had two mutations in type II topoisomerase genes (gyrA and gyrB) were significantly more resistant to fluoroquinolones than those with a single mutation in gyrA (mean MICs of ciprofloxacin: $\geq8\mu$g/ml, mean MICs of levofloxacin: $\geq16\mu$g/ml). Interestingly, the examination of silent nucleotide changes n the gyrA and gyrB genes revealed six different patterns of DNA polymorphism, respectively. Fifteen strains of the twenty-one strains bearing the gyrase A mutation shared the same polymorphism and eleven strains of the twenty-one strains bearing the gyrase B mutation shared the same polymorphism.
연구배경: INH 내성은 katG 와 inhA(ORF와 promoter)의 변이에 의한 것으로 알려져 있다. 유전자 변이는 지역적으로 종류와 빈도가 다르게 나타날 수 있는데 기존 국내의 연구보고들은 흔하다고 알려진 katG의 463 코돈만을 추적한 것들이었다. 따라서 본 연구는 국내에서 분리된 INH 내성균들의 두 유전자에서 나타날 수 있는 변이의 종류와 빈도를 확인하고자 하였다. 연구방법: 대한결핵협회 결핵연구원에서 MDR-TB로 판명된 INH 내성 결핵균 29주로부터 bead beater-phenol법으로 DNA를 추출하여 katG(2,223 bp), inhA ORF(-77~897, 975 bp) 및 inhA promoter(-168~80, 248 bp) 염기서열 결정 및 분석은 ABI PRISM 3730 XL Analyzer 및 MegAlign package를 사용하였다. 결과: 모든 균주들은 분석 표적으로 사용한 세 유전자 부위 중에서 적어도 한 개 이상의 유전자 부위에 변이가 있었다. INH 내성균은 거의 대부분(>93%) katG의 변이를 갖고 inhA 유전자 변이만 있는 경우는 드물어 INH 내성을 결정하는 중요한 요인은 katG의 변이 인 것을 확인할 수 있었다. katG 부위에서 Arg463Leu 변이와 Ser315Thr 변이가 높은 빈도(62.1% 및 55.2%)로 발견되었고, katG 완전결실과 inhA promoter-15($C{\rightarrow}T$) 변이도 일정한 빈도로 나타남을 볼 수 있었다. 그 외 inhA ORF 변이도 1주에서 1종류의 변이가 발견되었다. 결론: 기존 연구결과에서는 보고되지 않고 본 연구에서 처음으로 확인된 변이들도 14 종류나 있어서, INH 내성은 주로 katG 혹은 일부 inhA 특정 부위의 변이가 주도하지만 이들 외에도 다양한 변이가 존재한다는 것을 알 수 있었다. 이들 새로이 확인된 변이들은 염기서열 분석에 의한 INH 내성 여부 판단 시, 기존 알려진 변이 외에 보조 자료로 사용할 수 있을 것으로 생각한다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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