많은 연구를 통해 세포간 부착은 신생혈관형성에 큰 영향을 미치며, 이러한 세포부착억제를 통해 직접적으로 신생혈관형성을 제어할 수 있다. 따라서 본 연구에서는 이러한 신생혈관형성 억제력을 가지는 지역 천연산물을 이용하여 HUVECs 및 U937 cells를 이용한 세포부착 억제정도를 확인하였다. 4가지 천연산물의 세포부착 억제력을 확인하기 위해 세포부착 억제실험을 3가지 방법으로 달리 하여 세포 부착 억제정도를 확인한 결과 먼저, IL-$1\beta$ 및 천연산물이 자극된 HUVECs 에 대한 U937 세포부착 억제실험에서는 전호, 파고지, 희첨 및 산수유의 농도 증가에 따라 전호의 경우 최고 0.2 mg/L에서 276%의 저해율을, 파고지의 경우 5 mg/L에서 220%, 희첨의 경우 10 mg/L에서 158%, 산수유의 경우 20 mg/L에서 132%의 저해효과가 있음을 보였다. 두 번째로 실시한 HUVECs에 대한 PMA 및 천연산물이 자극된 U937 세포부착 억제실험에서는 전호 0.2 mg/L에서 139%, 파고지 5 mg/L에서 442%, 희첨 10 mg/L에서 720%, 산수유 20 mg/L에서 664%의 저해율을 보임을 확인하였다. 마지막으로 실시한 IL-$1\beta$ 및 천연산물 추출물이 자극된 HUVECs에 대한 천연산물 추출물이 자극된 U937 cells 의 세포부착 억제실험의 경우, 전호 0.2 mg/L에서 286%, 파고지 5 mg/L에서 146%, 희첨 10 mg/L에서 436%, 산수유 20 mg/L에서 297%의 저해율을 보였다. 이상의 3가지 방법으로 실시한 세포부착 억제실험에서 모두 각각의 천연산 물 추출물의 농도증가에 따라 현저하게 그 부착력이 억제됨을 확인하였다. 따라서, 본 연구에서 사용된 전호, 파고지, 희첨 및 산수유는 세포부착을 억제함으로서, 신생혈관형성과 관련된 암 및 비만의 근본적인 치료제제로써 사용 가능함을 시사한다.
Methanol and/or boiling water extraction of 201 natural products and subsequent MTT assay using MT-4 cell line was carried out to screen the anti-HIV-1 activity. Among 97 methanol extracts, 7 extracts from Chrysanthemi Indicium Flos, Magnoliae Cortex, Machili Cortex, Reynoutriae Rhizoma, Lithospermi Radix, Agastachis Herba, and Chaenomelis Fructus showed anti-HIV-1 activity and their SI value were 2.25 to 5.77. In addition, among 119 boiling water extracts, 10 extracts from Lonicerae Caulis et Foloium, Elsholtziae Herba, Leonuri Herba, Portulacae Herba, Schizonepetae Herba, Curcumae Rhizoma, Amomi Cardamomi Fructus, Cirsii Radix et Herba, Carpesii Herba, and Siegesbeckiae Herba showed anti-HIV-1 activity and their SI value were 1.30 to 7.64. Methanol extracts of above seven natural products were fractionated and the anti-HIV-1 activity of each fraction was examined. Extraction was carried out with hexane, chloroform, butanol, and water to trace active anti-HIV-1 componets. As a result, the water fraction of Magnoliae Cortex, Machili Cortex, Reynoutriae Rhizoma, Agastachis Herba, Chaenomelis Fructus and the butanol fraction of Chrysanthemi Indicium Flos, Reynoutriae Rhizoma showed anti-HIV-1 activity and their SI value were 1.40 to 8.02. We could reach a conclusion that studies to trace the anti-HIV-1 active component of each natural products in further fractionation and to identify its structure by Infrared spectroscopy, NMR spectroscopy and gel permeation chromatography were needed.
The methanol extracts were prepared from 46 oriental medicines currently used for stroke treatment, and the effects were assessed on the excitotoxic neuronal cell death induced by L-glutamate(Glu) in primary cultured rat cortical neurons. The extracts from Angelicae gigantis Radix, Manitis Squama, Acori graminei Rhizoma, Uncariae Ramulus et Uncus, Alpiniae Fructus, Paeoniae Radix, and Cnidii Rhizoma inhibited the Glu-induced neurotoxicity with the IC$_50$ values of 95.2, 218.6, 263.3, 295.1, 297.9, 310.1, and 446.7 $\mu$g/ m$\ell$, respectively. The extracts from Arisaematis Rhizoma, Loranthi Ramulus, Anemarrhenae Rhizoma, Carthami Flos, Clematidis Radix, Bambusae Concretio Silicea, and Angelicae koreanae Radix also exhibited significant inhibition of the toxicity. In contrast, the extracts from Aconiti Tuber Araliae cordatae Radix, Curcumae Rhizoma, Leonuri Herba, Polygalae Radix, Salviae Radix, and Siegesbeckiae Herba increased the Glu-induced toxicity at the concentrations of 500 and 1000 $\mu$g/m$\ell$. Rest of the extracts evaluated in the present study showed minor or negligible inhibition. liken together the oriental medicines including Angelicae gigantis Radix, Muitis Squama, Acori graminei Rhizoma, Uncariae Ramulus et Uncus, and Alpiniae Fructus appear to exert pharmacological effects through the inhibition of excitotoxic neuronal cell death. Further studies are in progress to characterize active principles in these extracts.
This experimental study was designed to investigate the effects of SIEGESBECKIAE HERBA extract (SHE) on the change of cerebral hemodynamics 〔regional cerebral blood flow (rCBF) and mean arterial blood pressure(MABP)〕 in normal condition and cerebral ischemic rats, and to determine the mechanism of action of SHE. This study was designed to investigate whether or not SHE inhibit lactate dehydrogenase (LDH) activity in neuronal cells and cytokines production in serum of cerebral ischemic rats. The results were as follows SHE increased rCBF significantly in a dose-dependent manner, but MABP was not changed by SHE in normal rats. The SHE-induced increase in rCBF was significantly inhibited by pretreatment with indomethacin (IDN), an inhibitor of cyclooxygenase but was increased by methylene blue (MTB), an inhibitor of guanylate cyclase. SHE inhibited lactate dehydrogenase (LDH) activity significantly in neuronal cells. rCBF was increased significantly and stably by SHE(10㎎/㎏, i.p.) during the period of cerebral reperfusion, which contrasted with the findings of rapid and marked increase in control group in ischemic rats. In serum by drawing from femoral arterial blood after middle cerebral arterial occlusion(MCAO) for 1hr and reperfusion for 1hr, the sample group was decreased IL-1β production significantly compared to that of the control group. In serum by drawing from femoral arterial blood after MCAO 1hr and reperfusion 1hr, sample group decreased TNF-α production significantly compared to that of the control grolilp. In serum by drawing from femoral arterial blood after reperfusion 1hr, sample group increased TGF-β production significantly compared to that of the control group. In serum by drawing from femoral arterial blood after MCAO for 1hr and reperfusion for 1hr, IL-10 production of the sample group was similar to that of control group. These results suggested that SHE had inhibitive effect on the brain damage by inhibited LDH activity, IL-1β and TNF-α production, but accelerated TGF-β production.
Apoptosis is the ability of cells to self-destruct by the activation of an intrinsic cellular suicide program when the cells are no longer needed or when they are seriously damaged. Morphologically, apoptosis is characterized by the appearance of membrane blebbing, cell shrinkage, chromatin condensation, DNA cleavage, and the fragmentation of the cell membrane-bound apoptotic bodies. Siegesbeckia glabrescens Makino (Siegesbeckiae Herba, SG) has been widely used as treatments for arthritis, and fever, as well as detoxification properties. The present studies were undertaken to evaluate if SG has an anti-apoptotic property. Cell viability was measured by XTT and tryphan blue stain. Morphological characteristic of human aortic smooth muscle cells(HASMC) were visualized with a phase-contrast microscope. SG significantly reduced HASMC, but not human umbilical vein endothelial cell(HUVEC), viability in a dose-dependent manner. Confluent untreated cells at 24hrs showed normal morphology, flat with a uniform polygonal shape. SG-treated cells (0.5㎎/㎖) at 24hrs showed apoptotic morphology. Cells became irregular with elongated lamellipodia, and exhibited condensed chromatin in nuclei with occasional endoucleation. There was an increase in the number of apoptotic cells rounding-up and being detached from the substrate. TUNEL staining of SG-treated cells showed dark-brown stains in nuclei and cytosol. Caspases are central components of the machinery responsible for apoptosis and are generally divided into two categories; the initiator caspases, which include caspases-2,-8,-9, and -10, and the effector caspases, which include caspases-3,-6, and -7. SG decreased anti-caspase-3 protein expression, which means activation of caspases-3 activity. It has been reported that there is a link between NO formation and apoptosis. NO production was accelerated by SG treatment in HASMC. L-NNA, NOS inhibitor, inhibited SG-induced apoptosis. These results, therefore, indicated that both caspases-3 and NO production are involved in apoptosis in smooth muscle cells. According to these results, SG may have a potential effect in the treatment of hypertensive atherosclerosis.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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