• 생명과학회지
• /
• 제21권2호
• /
• pp.183-193
• /
• 2011

중간엽 줄기세포의 이동과 분화는 손상된 조직의 재생을 위해 필수적이다. Sphingosine-1-phosphate (S1P)는 세포성장, 생존, 분화, 이동성 등 여러 가지 생명현상에 중요한 역할을 하는 생리활성 지질이다. 본 연구에서는 인체 골수유래 중간엽 줄기세포의 이동과 세포분화에 대한 S1P의 영향을 조사하였다. S1P는 중간엽 줄기세포의 이동을 증가시켰으며 pertussis toxin의 전처리는 S1P에 의한 세포이동을 억제하였다. 본 결과는 S1P에 의한 세포 이동과정에 Gi에 연결된 수용체가 관여함을 제시한다. $S1P_1$과 $S1P_3$ 수용체에 대한 길항제인 VPC23019의 전처리나 siRNA를 이용한 $S1P_1$ 수용체의 발현억제는 S1P에 의한 세포 내 칼슘 증가와 중간엽 줄기세포의 이동을 저해 하였다. 또한, S1P의 처리는 중간엽 줄기세포에서 평활근세포의 표지유전자인 $\alpha$-smooth muscle actin ($\alpha$-SMA)의 발현을 증가시켰으며 VPC23019의 전처리는 S1P에 의한 $\alpha$-SMA의 발현증가를 저해하였다. S1P는 중간엽 줄기세포에서 p38 mitogen-activated protein kinase (p38 MAPK)의 인산화를 촉진하였으며 p38 MAPK의 저해제인 SB202190의 전처리 또는 p38 MAPK의 dominant negative mutant의 과발현은 S1P에 의한 중간엽 줄기세포의 이동 $\alpha$-SMA 발현증가를 억제하였다. 본 연구결과는 S1P가 $S1P_1$-p38 MAPK 신호전달기전을 통해 중간엽 줄기세포의 이동과 평활근세포로의 분화를 촉진함으로써 중간엽 줄기세포를 이용한 조직재생에의 활용 가능성을 제시한다.

• Ultrasonography
• /
• 제32권1호
• /
• pp.59-65
• /
• 2013

목적: 본 연구는 초음파 조영제를 직접 합성하고 그 크기 및 소멸 시간 등의 특성을 분석하며, 기존의 초음파 조영제와의 영상을 비교하여 앞으로 초음파 조영제를 매개로 한 영상 유도 하 약물 및 유전자 치료제의 전달 시스템 구축의 기본을 갖추고자 한다. 대상 및 방법: 초음파 조영제는 21마이크로 몰의 DPPC(1, 2-Dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine, $C_{40}H_{80}NO_8P$), 9 마이크로 몰의 콜레스테롤, 1.9 마이크로 몰의 DCP(Dihexadecylphosphate, $[CH_3(CH_2)_{15}O]_2P(O)OH$) 및 클로로포름 및 SF6 기체를 이용하여 합성하였다. 약 12-24시간의 동결건조 후에 초음파 조영제는 SF6 기체와 초음파 처리(sonication) 법을 이용하여 합성하였고 그 초음파 조영제의 크기는 압출기를 이용하여 일정한 크기로 조정하였다. 합성된 초음파 조영제는 동적 광산란 측정법(dynamic light scattering measurement)을 이용하여 그 크기를 분석하였다. 한편 합성한 초음파 조영제의 소멸 양상을 평가하기 위하여 광학 현미경을 이용하여 그 숫자를 합성 직후, 12시간, 24시간, 36시간, 48시간, 60시간, 72시간 및 84시간 후에 평가하였다. 초음파 조영제로서의 효과를 평가하기 위하여 모형을 만들어 현재 임상적으로 사용되고 있는 초음파 조영제와 그 에코를 비교 분석하였다. 결과: 초음파 조영제는 동결건조-초음파 처리 방법을 통하여 성공적으로 합성 할 수 있었다. 합성된 초음파 조영제는 154.2 nm의 정점 (peak)에서 가장 많이 분포하였으며 합성 후 24시간부터는 입자의 숫자들이 감소하는 양상을 보였다. 소노뷰와 합성된 초음파 조영제의 에코밝기는 유의한 차이를 보이지 않았으나 소노뷰와 생리식염수 및 합성된 초음파 조영제와 생리식염수의 에코 밝기는 통계적으로 유의한 차이를 보였다 (p < 0.01). 결론: 본 연구를 통하여 초음파 조영제를 직접 합성할 수 있는 방법을 습득할 수 있었고 그 크기 및 특성을 분석할 수 있었다.

• 생명과학회지
• /
• 제29권4호
• /
• pp.402-409
• /
• 2019

생삼을 쪄서 건조시킨 홍삼은 전통적으로 사용되고 있는 약재로서 면역, 내분비 및 중추신경계 작용을 증진시키며 염증을 억제하는 효과가 있는 것으로 알려져 있다. 본 연구에서는 그람 양성균의 세포벽 성분인 lipoteichoic acid (LTA)에 의한 염증반응에 홍삼추출액(RGE)이 항염증 효과를 가지는지 관찰하고 그 작용 기전을 연구하였다. BV-2 소교세포에서 RGE는 세포에 독성을 유도하지 않으면서 LTA로 인한 nitric oxide (NO)의 생성과 inducible nitric oxide synthase (iNOS) 발현을 억제하였으며, NF-kB p65의 핵으로의 이동과 IkB-a의 분해 또한 억제하였다. 한편, RGE는 농도의존적으로 heme oxygenase-1 (HO-1)의 발현을 유도하였으며, HO-1 siRNA를 처리했을 때는 RGE가 iNOS의 발현을 억제하지 못하였다. RGE는 HO-1의 발현에 관여하는 전사인자인 nuclear factor E2-related factor 2 (Nrf2)를 핵으로 이동을 촉진시켰다. 또한 RGE에 의한 HO-1의 발현은 phosphatidylinositol-3-kinase(PI-3K) 및 MAPK 억제제에 의해 감소되었으며, RGE가 Akt와 ERK, p38, JNK의 인산화를 유도하였다. 이상의 결과를 종합해보면, RGE는 PI-3K/Akt 및 ERK, p38, JNK 신호전달과정을 통해 HO-1의 발현을 유도함으로써 NO와 같은 염증매개물질의 생성을 억제한다는 것을 알 수 있다. 그러므로 홍삼추출액은 그람 양성균에 의한 신경염증과 염증관련 신경계 질환의 치료제로서 사용될 수 있을 것이라 사료된다.

• Journal of Applied Biological Chemistry
• /
• 제66권
• /
• pp.204-212
• /
• 2023

미백은 멜라닌 세포 내 멜라닌 생성 억제 기능을 의미한다. 기존 미백소재의 피부 부작용 때문에 최근에는 천연 소재를 활용한 미백 연구가 활발히 진행되고 있다. 무화과(Ficus Carica L.)는 뽕나무과에 속하는 열매로 줄기와 잎 성분의 미백 활성은 보고되었으나 무화과 열매의 미백 활성은 알려지지 않아 본 연구를 통해 멜라닌 생성 억제, 항산화 및 항염증 활성을 규명하고자 하였다. 무화과 열매 추출물(Figs fruits extract, FFE)의 라디칼 소거 활성은 DPPH/ABTS 분석에서 최대 농도에서 대조군 대비 34.52±1.98%/60.71±1.26% 수준으로 관찰되었다. CCK-8 assay를 통한 FFE의 세포독성은 약 10% 농도부터 관찰 되어 독성이 없는 최대 농도를 5%로 설정하여 모든 실험에 적용하였다. FFE는 inducible nitric oxide synthase, cyclooxygenase-2, interleukin-6 및 tumor necrosis factor-α 유전자 발현 억제와 함께 NO 생성을 농도 의존적으로 감소시켜 항염증 활성이 있음을 알 수 있었다. 또한 미백 기능 규명을 위해 α-MSH로 자극된 B16F10 세포에서 FFE를 농도별로 처리한 결과 세포 내 멜라닌 생성을 유의하게 하향 조절했을 뿐만 아니라 시험관 내에서 tyrosinase 활성이 억제되었다. 또한 FFE는 RT-PCR에서 α-MSH 처리군에 비해 Microphthalmia-associated transcription factor (MITF) mRNA 발현을 약 94.34% 감소시켰다. 마지막으로, FFE는 α-MSH로 자극된 B16F10 세포에서 MITF, cAMP response element-binding protein 및 tyrosinase 단백질 발현을 유의하게 감소시켰다. 이러한 결과를 통해 우리는 FFE가 tyrosinase 효소 활성을 직접적으로 억제할 수 있을 뿐만 아니라 α-MSH 신호 기전 내 MITF 유전자 발현 조절을 통해 멜라닌 생성을 억제할 수 있음을 확인하였다.

• Bioinformatics and Biosystems
• /
• 제1권2호
• /
• pp.99-102
• /
• 2006

BLAST(Basic Local Alignment Search Tool)는 서열 데이터베이스 탐색을 위하여 가장 많이 사용되는 프로그램이다. 전체 서열간의 최적 글로벌 정렬을 수행하는 대신에 지역적 유사성이 있는 부분을 찾아 서열 짝짓기를 수행하는 특징을 갖는다. 일반적인 연구자들은 서열 상동성 검색을 위해 NCBI에 접속하여 웹 브라우저를 통해 온라인으로 BLAST를 수행하게 되는데, 이 경우 사용자 각각의 네트워크 환경이나 입력할 데이터양에 따른 검색속도의 지연 및 제한 등과 같은 여러 문제에 부딪히게 되고, 또한 보안유지가 필요한 서열 데이터의 유출 가능성이 존재한다. 그러므로 대량의 서열 데이터에 대하여 빠르고 안전하게 BLAST 상동성 검색이 가능한 Local BLAST 검색 시스템의 필요성이 증대되고 있다. 본 연구에서는 NCBI의 Genbank에서 공개된 동물의 발현 유전자 단편들(ESTs)에 대한 데이터를 이용하여 소, 돼지, 닭, 등의 경제형질과 연관된 유용 유전자만을 추출하여 이들만으로 구성된 새로운 데이터베이스를 구축하였고, 또한 이들을 사용할 수 있는 새로운 검색시스템을 개발하였다 자체 제작한 Perl script를 사용하여 필요한 데이터를 축종별로 추출 하여 새로운 DB를 구축하였으며 이 속에는 소의 경우 650,046개, 돼지의 경우 368,120개, 닭의 경우 693,005개의 발현 유전자 단편들(ESTs)이 포함된다. 또한 이들 DB 분석이 가능한 Local Animal BLAST Web 검색시스템(http://bioinfo.kohost.net)을 고성능 병렬 PC Cluster 시스템과 연동하도록 자체 구축함으로써 본 시스템이 보다 효율적인 생물정보학 연구수행이 기여할 것으로 기대된다.

• Journal of Ginseng Research
• /
• 제37권3호
• /
• pp.332-340
• /
• 2013

In this study, gamma rays were used to irradiate embryogenic calli induced from cotyledon explants of Panax ginseng Meyer. After the embryogenic calli were irradiated, they were transferred to adventitious roots using an induction medium; next, mutated adventitious root (MAR) lines with a high frequency of adventitious root formations were selected. Two MAR lines (MAR 5-2 and MAR 5-9) from the calli treated with 50 Gy of gamma rays were cultured on an $NH_4NO_3$-free Murashige and Skoog medium with indole-3-butyric acid 3 mg/L. The expression of genes related to ginsenoside biosynthesis was analyzed using reverse transcription polymerase chain reaction with RNA prepared from native ginseng (NG), non-irradiated adventitious root (NAR) and 2 MAR lines. The expression of the squalene epoxidase and dammarenediol synthase genes was increased in the MAR 5-2 line, whereas the phytosterol synthase was increased in the MAR 5-9 line. The content and pattern of major ginsenosides (Rb1, Rb2, Rc, Rd, Re, Rf, and Rg1) were analyzed in the NG, NAR, and 2 MAR lines (MAR 5-2 and MAR 5-9) using TLC and HPLC. In the TLC analysis, the ginsenoside patterns in the NG, NAR, and 2 MAR lines were similar; in contrast, the MAR 5-9 line showed strong bands of primary ginsenosides. In the HPLC analysis, compared with the NG, one new type of ginsenoside was observed in the NAR and 2 MAR lines, and another new type of ginsenoside was observed in the 2 MAR lines irradiated with gamma rays. The ginsenoside content of the MAR 5-9 line was significantly greater in comparison to the NG.

• Journal of Gastric Cancer
• /
• 제20권2호
• /
• pp.139-151
• /
• 2020

Purpose: Globally, there is a high incidence of gastric cancer (GC). Leucine zipper-EF-hand containing transmembrane protein 1 (LETM1) is reported to play a vital role in several human malignancies. However, there is limited understanding of the role of LETM1 in GC. This study aims to investigate the effects of LETM1 on proliferation, migration, and invasion of GC cells. Materials and Methods: The expression levels of LETM1 in the normal gastric mucosal epithelial cells (GES-1) and GC cells were analyzed by quantitative real-time polymerase chain reaction and western blotting. CCK-8, wound healing, and Transwell invasion assays were performed to evaluate the effect of LETM1 knockdown or overexpression on the proliferation, migration, and invasion of the GC cells, respectively. Additionally, the effect of LETM1 knockdown or overexpression on GC cell apoptosis was determined by flow cytometry. Furthermore, the effect of LETM1 knockdown or overexpression on the expression levels of PI3K/Akt signaling pathway-related proteins was evaluated by western blotting. Results: The GC cells exhibited markedly higher mRNA and protein expression levels of LETM1 than the GES-1 cells. Additionally, the knockdown of LETM1 remarkably suppressed the GC cell proliferation, migration, and invasion, and promoted the apoptosis of GC cells, which were reversed upon LETM1 overexpression. Furthermore, the western blotting analysis indicated that LETM1 facilitates GC progression via the PI3K/Akt signaling pathway. Conclusions: LETM1 acts as an oncogenic gene to promote GC cell proliferation, migration, and invasion via the PI3K/Akt signaling pathway. Therefore, LETM1 may be a potential target for GC diagnosis and treatment.

• IMMUNE NETWORK
• /
• 제11권3호
• /
• pp.175-181
• /
• 2011

Background: CM1 (centrocyte/-blast marker 1) was defined by a mAb against concavabalin-A (ConA) activated PBMC. It is expressed in germinal center of human tonsil and on the surface of activated PBMC as well as cancer cells. Recently, increased productions of pro-inflammatory mediators were detected from activated PBMC by CM1 ligation. Methods: However, there is a limitation to explain the exact role of CM1 on inflammation and its related mechanisms, since the identity of CM1 is still not clarified. In our previous study, we have already confirmed that soluble form of CM1 was produced by Raji. Therefore, we performed Q-TOF analysis after immunoprecipitation of concentrated Raji culture supernatant using anti-CM1 mAbs. Results: As a result, we found that CM1 is identical to enolase-1(ENO1), a glycolytic enzyme, and we confirmed that results by silencing ENO1 using siRNA. It was also confirmed through competition assay between anti-CM1 and anti-ENO1 mAbs. Finally, we investigated the possible role of CM1 in inflammatory response and cancer. The ligation of CM1 on Raji cells with anti-CM1 mAbs induces the extensive production of prostaglandin $E_2(PGE_2)$. In addition, the increased activity of matrix metalloproteinase (MMP)-2/9 was shown in NCI-N87, stomach cancer cell line by CM1 stimulation. Conclusion: CM1 is identical to ENO1 and it might be an important role in the regulation of inflammatory responses.

• BMB Reports
• /
• 제43권5호
• /
• pp.355-362
• /
• 2010

The sterile alpha motif (SAM) is a putative protein interaction domain involved in a wide variety of biological processes. Here we report the identification and characterization of a novel gene, SAMD4B, which encodes a putative protein of 694 amino acids with a SAM domain. Northern blot and RT-PCR analysis showed that SAMD4B is widely expressed in human embryonic and adult tissues. Transcriptional activity assays show SAMD4B suppresses transcriptional activity of L8G5-luciferase. Over-expression of SAMD4B in mammalian cells inhibited the transcriptional activities of activator protein-1 (AP-1), p53 and p21, and the inhibitory effects can be relieved by siRNA. Deletion analysis indicates that the SAM domain is the main region for transcriptional suppression. The results suggest that SAMD4B is a widely expressed gene involved in AP-1-, p53- and p21-mediated transcriptional signaling activity.

• 약학회지
• /
• 제46권6호
• /
• pp.426-432
• /
• 2002

Cervical cancer is one of the leading causes of female death from cancer worldwide with about 500,000 deaths per year. A strong association between certain human papilloma viruses (HPV type 16 and 18) and cervical cancer has been well known. An extract of Saururus chinensis, named as PE-46, has been used to investigate whether this agent has the ability of inhibiting the oncogenes E6 and E7 of HPV type 16. PE-46 inhibited the proliferation of human cervical cancer cell lines in a dose response manner. PE-46 also inhibited the in vitro binding of E6 and E6AP which are essential for the binding and degradation of the tumor suppressor p53. In addition, PE-46 inhibited the in vitro binding of E7 and Rb which is essential tumor suppressor for the control of cell cycle. The levels of mRNA for E6 and E7 were also decreased by PE-46. SiHa cells treated with PE-46 induced G0/G1 arrest, resulting in inhibition of growth. Our study showed that the PE-46 can inhibit the cervical carcinomas via both inhibition of bindings between oncogenes and tumor suppressors, and inhibition of G1longrightarrowS transition. PE-46 inhibited the oncogenecity of E6 and E7 of HPV 16 type, thus could be used as a putative modulating agent for the treatment of cervical carcinomas caused by HPV.